一种作为改善生长表现和免疫反应的饲料补充物的重组抗微生物胜肽制造技术

本发明专利技术涉及一种重组抗微生物胜肽，其可在转化酵母中表现。本发明专利技术还提供一种用于改善动物的生长表现及免疫反应的膳食补充物，其包含重组胜肽。重组胜肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种作为改善生长表现和免疫反应的饲料补充物的重组抗微生物胜肽


[0001]本专利技术涉及一种新颖重组抗微生物胜肽，其可用作改善生长表现及免疫反应的膳食饲料补充物。

技术介绍

[0002]抗生素会抑制或杀死可对肉鸡健康有负面影响的病原体，以使肉鸡获得最大限度生长。饲养者经常寻求增加动物(包括家畜、家禽及水生动物)的丰度、一致性及生长速度的方法。因此，通过典型施用抗生素来控制疾病暴发为常见做法。多年来，抗生素已广泛用于畜牧业以减少细菌感染[1]。然而，在生命某些阶段进行抗生素治疗会严重破坏肠道微生物，导致免疫系统发育延迟及免疫功能紊乱。举例来说，不适当的抗生素治疗可导致肉鸡在后期的发育阶段变得容易受到病原体的感染[2]。此外，过度使用抗生素会促进病原体中的抗生素抗药性，这可能对动物及人类健康产生负面影响(https://www.danmap.org/downloads/reports.aspx)[3]。自2006年以来，欧洲已禁止使用抗生素来促进生长[4，5]。
[0003]因此，需要可在家禽产生中代替抗生素的新颖抗微生物剂来用作替代饲料添加剂。最近，由于抗微生物胜肽(AMP)破坏细菌及其他病原体的膜完整性的能力，其已作为抗生素的等同物出现[6]。AMP对不同及多样化的微生物表现出强的抗微生物活性，但对宿主细胞的溶血活性通常仍然很低[7]。Piscidin包含一种研究最广泛的AMP家族。从若干种鱼类中分离出来的piscidin，表现出广泛的生物学功能，包括抗细菌、抗真菌、抗寄生虫、抗伤害感受及抗肿瘤功能[8/>–
12]。五种来自尼罗吴郭鱼(Oreochromis niloticus)的piscidin类AMP(命名为TP1
–
TP5)已被选殖，并由与本申请专利技术人相同的一些研究小组特性化[9]。研究表明，病原体对picidin的抗性比对抗生素的抗性更弱。Piscidin类AMP的毒性可能是源自piscidin与病原体(诸如克雷伯氏肺炎杆菌及鲍氏不动杆菌)的膜脂质组分之间的静电相互作用的相对非专一性所致[13]。鲜少有报导描述使用重组蛋白表现系统来产生piscidin[14，15]。
[0004]然而，无从得知piscidin是否能有效改善鸡的生长表现及免疫反应。在家禽养殖业中，仍需要开发一种膳食来代替抗生素作为饲料添加剂。

技术实现思路

[0005]因此，本专利技术提供一种新颖膳食补充物，其作为抗生素的替代物用于改善畜牧业中的生长表现及免疫反应，其中使用重组鞍带石斑鱼piscidin(recombinant Epinephelus lanceolatus piscidin，rEP)来预防病原体感染，以及避免病原体的抗药性。
[0006]根据本专利技术，鞍带石斑鱼piscidin(Epinephelus lanceolatus piscidin，EP)包含选自以下组成的群组的胺基酸序列：
[0007](1)EP1:CIMKHLRNLWNGAKAIYNGAKAGWTEFK(SEQ ID NO:1)，
[0008](2)EP2:CFFRHIKSFWRGAKAIFRGARQGWRE(SEQ ID No:2)，及
[0009](3)EP3:GFIFHIIKGLFHAGRMIHGLVNRRRHRHGMEE(SEQ ID NO:3)。
[0010]在一个具体实施例中，膳食补充物包含一种EP或其混合物。在本专利技术中，鞍带石斑鱼piscidin(EP)可用饲料补充物的形式制备，其经证实对家鸡(G.domesticus)(鸡)的生长表现及免疫反应具有影响。
[0011]在另一方面，本专利技术提供一种用于改善动物的生长表现及免疫反应的方法，其包含向该动物施用有效量的本专利技术的rEP。
[0012]下面描述阐述本专利技术一或多个具体实施例的细节。本专利技术的其他特征或优点将通过以下若干具体实施例的详细描述以及所附权利要求书而变得显而易见。
附图说明
[0013]当结合附图阅读时，将更好理解前面
技术实现思路
及下面本专利技术的实施方式。出于说明本专利技术的目的，附图中显示出目前较佳的具体实施例。然而，应理解到本专利技术不限于所示出的精确配置及手段。
[0014]图1提供鞍带石斑鱼piscidin(E.lanceolatus piscidin)g6496.t1(EP
‑
1)、g6497.t1(EP
‑
2)及g6498.t1(EP
‑
3)的序列；其中显示出核苷酸(nt)序列及预测的胺基酸(aa)序列。核苷酸从第一个核苷酸开始编号。星号(*)表示终止密码子。EP cDNA基因(g6498.t1)基于嗜甲醇酵母菌(P.pastoris)表现系统的优先密码子使用而修饰。
[0015]图2显示出吴郭鱼piscidin及鞍带石斑鱼piscidin的序列比对。吴郭鱼piscidin胜肽与分离的鞍带石斑鱼piscidin的多个序列比对(g6496.t1、g6497.t1及g6498.t1)；其中插入间隙以获得最大同源性。使所有编码序列输入树状图中进行比对。相同的胺基酸以相同的颜色表示，例如，甲硫胺酸(M)以黄色表示。显示出来自吴郭鱼(TP1至TP5)及鞍带石斑鱼的piscidin谱系分析的结果。
[0016]图3显示出鞍带石斑鱼piscidin
‑6×
His(rEP)蛋白在嗜甲醇酵母菌中的表现。图3(a)显示出pPICZαA
‑
EP
‑
his载体的质体图谱。图3(b)提供用于诱导的不同浓度的甲醇，并通过西方点墨法分析重组蛋白表现。图3(c)显示出收集细胞，并通过SDS
‑
PAGE及西方点墨法分析来自上清液及沉淀物的总蛋白。泳道1，低范围彩虹标记；泳道2，合成的EP；泳道3，由pPICZαA载体表现的蛋白；泳道4
–
9，在诱导0小时(无甲醇诱导)、1、2、3、4及5天后，含有EP表现载体的细胞。
[0017]图4提供培养基组成物对嗜甲醇酵母菌中rEP表现的影响。通过比较在BMGY(烧瓶培养物，圆圈)及BSM(发酵槽培养物，正方形)中生长的嗜甲醇酵母菌X33转化体培养物，根据其(a)湿细胞重量及(b)细胞计数，来评估营养物含量的影响。
[0018]图5显示出通过烧瓶及发酵槽方法在嗜甲醇酵母菌中产生的rEP的抗微生物活性。图5(a)显示出在烧瓶培养中以甲醇诱导24小时至120小时之前及之后，酵母培养物上清液中的rEP浓度。诱导5天后，酵母培养物上清液产生大按宽度排列产酸克雷伯氏菌(K.oxytoca)、大肠杆菌(E.coli)、绿脓杆菌(P.aeruginosa)及金黄色葡萄球菌(S.aureus)的抑制区。标记
“‑”
表示革兰氏阴性；“+”表示革兰氏阳性。图5(b)显示出通过发酵槽方法产生的rEP的抗微生物活性。在发酵槽中以甲醇诱导酵母24小时至120小时。通过OD
600
测量，上清液显示出对大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组鞍带石斑鱼piscidin(Epinephelus lanceolatus piscidin，EP)，其包含由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的胺基酸序列组成的胺基酸分子。2.如权利要求1的EP，其是由SEQ ID NO:1组成的胺基酸序列组成的胺基酸分子。3.如权利要求1的EP，其是由SEQ ID NO:2组成的胺基酸序列组成的胺基酸分子。4.如权利要求1的EP，其是由SEQ ID NO:3组成的胺基酸序列组成的胺基酸分子。5.一种用于改善鸡的生长表现及免疫反应的膳食补充物，其包含如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志毅，
申请(专利权)人：刘扶东，
类型：发明
国别省市：