抗唾液酸酶的糖类、其制造方法及用途技术

本发明专利技术所揭示的是制备含3

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗唾液酸酶的糖类、其制造方法及用途

技术介绍

[0001]唾液酸是带负电荷的单糖，通常分布在糖脂和糖蛋白上的聚糖的最末端，其参与许多生理学的细胞内和细胞间过程，包括与细胞、病毒和细菌上其他生物分子和受体的相互作用1。此外，唾液酸化在调节分泌的糖蛋白和膜结合受体的功能和命运中扮演重要角色。例如，表皮生长因子受体(EGFR)的唾液酸化经证实可抑制EGFR二聚化，从而干扰EGF结合和磷酸化，这与肿瘤发生有关2。而且，唾液酸化调节血液循环中糖蛋白的半衰期，因为N
‑
聚糖的去唾液酸化暴露出底下的半乳糖，其被肝脏脱唾液酸糖蛋白受体识别，导致糖蛋白从循环中快速去除3。因此，增加唾液酸化程度可以改善糖蛋白治疗剂的半衰期和不良作用。
[0002]近年来，糖基化对蛋白质结构和功能的作用已经有了深入的研究，激发了对蛋白质，特别是治疗性单株抗体(mAb)的聚糖合成(synthesicampillary)和糖工程(glycoengineering)的新方法开发5。例如，已证实具有末端α
‑
2,6
‑
连接唾液酸的无岩藻糖基化双触角(afucosylated biantennary)N
‑
聚糖具有最佳的聚糖结构，可增强抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗发炎活性6。
[0003]已知在C
‑
3位置具有氟的唾液酸衍生物可抑制唾液酸转移酶和唾液酸酶(或称神经氨酸酶)，并且更稳定7。然而，由于氟基团的强拉电子效应使糖基化反应失去活性，因此用氟化糖作为供体的糖基化常常带来重大挑战。尽管有一种唾液酸转移酶能够从相应的单磷酸胞苷
‑
唾液酸转移3
‑
氟唾液酸残基以形成α
‑
2,3
‑
连接唾液酸糖苷，却没有相应的α
‑
2,6
‑
唾液酸转移酶
11
。
[0004]因此，需要提供一种可靠地制备含α
‑
2,6
‑
连接3
‑
氟唾液酸糖苷的糖的方法可用来开发糖蛋白治疗剂。

技术实现思路

[0005]本专利技术的一方面是制备含3
‑
氟唾液酸的糖的方法。该方法包括使3
‑
羟基唾液酸与糖反应进行糖基化反应，形成α2,6
‑
连接3
‑
羟基唾液酸糖苷，以及使该α2,6
‑
连接3
‑
羟基唾液酸糖苷与氟化剂反应进行氟化反应，形成含3
‑
氟唾液酸的糖。
[0006]本专利技术的另一方面是制备与含3
‑
氟唾液酸的糖结合的均质性抗体的方法。该方法是通过用该糖使单株抗体糖基化来进行。
[0007]本专利技术的另一方面是关于式(VI)化合物：
[0008][0009]其中R1是Ac或H，R2是Bz或H，R3是甲基或H，R4是Bn或H，且X是OH、离去基或糖。注：“Ac”代表乙酰基，“Bz”代表苄酰基，“Bn”代表苄基，且糖可为单糖、双糖或寡糖。
[0010]本专利技术范围也包括一种与以α2,6连接3
‑
氟唾液酸糖苷为末端的N
‑
聚糖结合的单株抗体。
[0011]本专利技术更涵盖一种治疗癌症的方法。所述方法包括向有此需要的个体投予有效量的与以α2,6连接3
‑
氟唾液酸糖苷为末端的N
‑
聚糖结合的单株抗体。
[0012]以下专利技术说明将阐述本专利技术细节。通过以下几个具体实例的详细说明以及所附权利要求书，本专利技术的其他特征、目的和优点将更加明白。
附图说明
[0013]下面的说明参考附图，其中：
[0014]图1A显示两个图，描绘了三种唾液酸糖苷(即1、2和S27)的酶催化水解，其为酶浓度的函数；图1B显示两个图，描绘了唾液酸酶抑制作用，其为2、S27或2
‑
脱氧
‑
2,3
‑
二去氢
‑
N
‑
乙酰基神经氨酸(DANA)(一种唾液酸酶抑制剂)浓度的函数；
[0015]图2是四种N
‑
聚糖的染色电泳凝胶：(1)rituxan
‑
G，(2)rituxan
‑
F
ax
‑
SCT，(3)rituxan
‑
SCT，及(4)市售rituxan；及
[0016]图3显示对三种N
‑
聚糖，即rituxan
‑
F
ax
‑
SCT、rituxan
‑
SCT及rituxan所获得的质谱。
具体实施方式
[0017]本文首先详细揭示一种制备含3
‑
氟唾液酸的糖的方法。
[0018]所述方法包括以下步骤：使3
‑
羟基唾液酸与糖反应进行糖基化反应，形成α2,6连接3
‑
羟基唾液酸糖苷，以及使该α2,6连接3
‑
羟基唾液酸糖苷与氟化剂反应进行氟化反应，形成含3
‑
氟唾液酸的糖。该糖可以是单糖、双糖或寡糖。在例示性方法中，该糖是单糖。
[0019]在本方法的某些具体实例中，该3
‑
羟基唾液酸是2
‑
溴
‑3‑
羟基唾液酸，且该糖基化反应是在三氟甲磺酸银(AgOTf)和磷酸氢二钠(Na2HPO4)的存在下进行。较佳地，该糖基化反应是在甲苯中进行。
[0020]在本方法的其他具体实例中，该氟化剂是全氟
‑1‑
丁烷磺酰氟(NfF)，且该氟化反应是在催化剂存在下进行。例如，该催化剂是1,8
‑
二吖双环[5,4,0]‑
十一
‑7‑
烯(DBU)。较佳地，该氟化反应是在甲苯中进行。值得注意的是，该反应可进一步在二氟三甲基硅酸三(二甲胺基)锍(TASF)的存在下进行。
[0021]在例示性方法中，3
‑
羟基唾液酸具有式(I)：
[0022][0023]糖是式(II)化合物：
[0024][0025]α2,6连接3
‑
羟基唾液酸糖苷是式(III)化合物：
[0026]以及
[0027]含3
‑
氟唾液酸的糖是式(IV)化合物：
[0028][0029]在另外的具体实例中，该方法进一步包括使用含3
‑
氟唾液酸的糖与第二糖反应来进行另一个糖基化反应。
[0030]同样在本专利技术范围内的是一种制备与含3
‑
氟唾液酸的糖结合的均质性抗体的方法。同样地，该方法包括用含3
‑
氟唾液酸的糖使单株抗体糖基化。
[0031]在该方法的某些具体实例中，该含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种制备含3
‑
氟唾液酸的糖的方法，其中，所述方法包含：使3
‑
羟基唾液酸与一糖反应进行糖基化反应，形成α2,6连接3
‑
羟基唾液酸糖苷，以及使所述α2,6连接3
‑
羟基唾液酸糖苷与氟化剂反应进行氟化反应，形成含3
‑
氟唾液酸的糖。2.如权利要求1所述的方法，其中，所述糖是单糖。3.如权利要求2所述的方法，其中，所述3
‑
羟基唾液酸是2
‑
溴
‑3‑
羟基唾液酸，且所述糖基化反应是在三氟甲磺酸银(AgOTf)和磷酸氢二钠(Na2HPO4)的存在下进行。4.如权利要求3所述的方法，其中，所述糖基化反应是在甲苯中进行。5.如权利要求2所述的方法，其中，所述氟化剂是全氟
‑1‑
丁烷磺酰氟(NfF)，且所述氟化反应是在催化剂存在下进行。6.如权利要求5所述的方法，其中，所述催化剂是1,8
‑
二吖双环[5,4,0]
‑
十一
‑7‑
烯(DBU)。7.如权利要求6所述的方法，其中，所述氟化反应是在甲苯中进行。8.如权利要求6所述的方法，其中，所述氟化反应是在二氟三甲基硅酸三(二甲胺基)锍(TASF)的存在下进行。9.如权利要求2所述的方法，其中，所述3
‑
羟基唾液酸是2
‑
溴
‑3‑
羟基唾液酸，所述氟化剂是NfF，所述糖基化反应是在AgOTf和Na2HPO4的存在下进行，且所述氟化反应是在催化剂存在下进行。10.如权利要求9所述的方法，其中，所述催化剂是DBU且所述糖基化和氟化反应都是在甲苯中进行。11.如权利要求10所述的方法，其中，所述3
‑
羟基唾液酸具有式(I)结构：所述糖是式(II)化合物：所述α2,6连接3
‑
羟基唾液酸糖苷是式(III)化合物：以及所述含3
‑
氟唾液酸的糖是式(IV)化合物：
12.如权利要求11所述的方法，其中，所述氟化反应是进一步在TASF存在下进行。13.如权利要求2所述的方法，其中，所述方法更包含使含3
‑
氟唾液酸的糖与一第二糖反应来进行另一个糖基化反应。14.如权利要求13所述的方法，其中，所述3
‑
羟基唾液酸是2
‑
溴
‑3‑
羟基唾液酸，所述氟化剂是NfF，所述糖基化反应是在AgOTf和Na2HPO4的存在下进行，且所述氟化反应是在催化剂存在下进行。15.如权利要求14所述的方法，其中，所述催化剂是DBU，且所述糖基化和氟化反应都是在甲苯中进行。16.如权利要求15所述的方法，其中，所述氟化反应是在TASF存在下进行。17.一种制备与含3

【专利技术属性】
技术研发人员：翁启惠，骆宏杰，
申请(专利权)人：刘扶东，
类型：发明
国别省市：