石房蛤毒素的检测方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种石房蛤毒素的检测方法和应用，涉及化合物检测技术领域。包括采用超高液相色谱

【技术实现步骤摘要】
石房蛤毒素的检测方法和应用


[0001]本专利技术涉及化合物检测
，具体而言，涉及一种石房蛤毒素的检测方法和应用。

技术介绍

[0002]贝类中毒多伴随群体性中毒事件，具有家族性、突发性、地域性，会导致众多人员中毒和死亡，造成的社会危害极大，日益引起社会重视。贝类毒素包括麻痹性贝类毒素、腹泻性贝类毒素、神经性贝类毒素和健忘性贝类毒素。
[0003]麻痹性贝类毒素是毒性很强的毒素之一，其毒性与河豚毒素相当。麻痹性贝类毒素是一种强极性的四氢嘌呤三环类化合物，它由20多种结构不同的甲藻产生的毒素组成，这些甲藻既可在热带水域又可在温带水域生长。麻痹性贝类毒素主要由石房蛤毒素(saxitoxin,STX)及其衍生物组成，其毒性是眼镜蛇毒性的80倍，是一般麻醉剂毒性的10万多倍，人口服0.5～1.0mg便可致死，小鼠腹腔注射石房蛤毒素的半数致死剂量LD
50
为24nmol/kg、灌胃的LD
50
为1 237nmol/kg；人口服的LD
50
为5.7μg/kg，相当于摄入时致死剂量为0.57mg。由于石房蛤毒素毒性大、反应快、无适宜解毒剂，给防治带来了许多困难。因此急需开发一种石房蛤毒素的精准检测方法，为保障水产品安全提供技术基础。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种石房蛤毒素的检测方法和应用。
[0006]本专利技术是这样实现的：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种石房蛤毒素的检测方法，包括采用超高液相色谱
‑
串联质谱法检测待测样品，液相色谱检测结束后对待测样品采用质子辅助电离技术处理，再进行质谱检测。
[0008]在可选的实施方式中，质子辅助电离技术包括将电离溶剂与色谱仪中流出的待测样品混合后通入质谱仪。
[0009]优选地，电离溶剂包括甲酸或乙酸溶液，电离溶剂的浓度为0.4～0.6％。
[0010]优选地，电离溶剂的流速为3～8μL/min。
[0011]在可选的实施方式中，超高液相色谱
‑
串联质谱法包括采用Waters Acquity Ultra Performance LCTM
‑
PremierXE MS/MS检测。
[0012]在可选的实施方式中，液相色谱柱为Waters ACQUITY UPLC Hilic，流动相A为乙酸铵
‑
甲酸水溶液，流动性B为甲酸甲醇溶液，柱温为35～45℃，样品盘温度为2～6℃。
[0013]优选地，流动相A为5mM乙酸铵
‑
0.1％甲酸水溶液，流动性B为0.5％甲酸甲醇溶液。
[0014]优选地，流动相的洗脱程序包括：0～2min，采用10％的流动相A洗脱，余量为流动相B；2～2.1min，采用10～30％的流动相A洗脱，余量为流动相B；2.1～4min，采用30％的流动相A洗脱，余量为流动相B；4～4.1min，采用30～60％的流动相A洗脱，余量为流动相B；4.1
～7min，采用60％的流动相A洗脱，余量为流动相B；7～7.1min，采用60～10％的流动相A洗脱，余量为流动相B；7.1～12min，采用10％的流动相A洗脱，余量为流动相B。
[0015]优选地，进样体积为1～4μL。
[0016]在可选的实施方式中，质谱包括采用Waters TQS三重四极杆质谱仪检测。
[0017]优选地，离子源为ESI离子源，离子源温度：140～160℃，毛细管电压：1.5～2.5kV，锥孔电压：50～70V，脱溶剂温度：450～550℃，脱溶剂气流量：800～1000L/h，锥孔气流量：140～160L/h。
[0018]在可选的实施方式中，待测样品的制备包括将贝肉与提取液混合提取后固液分离，重复提取至少两次，再对提取液除杂。
[0019]在可选的实施方式中，提取包括将贝肉与提取液涡旋再超声提取。
[0020]优选地，贝肉与提取液的质量体积比为0.8～1.2g：4～8ml。
[0021]优选地，提取液包括甲酸水溶液或甲酸乙腈溶液中的任一种。
[0022]优选地，甲酸水溶液中甲酸的含量为0.1～0.4％。
[0023]优选地，涡旋时间为2～7min。
[0024]优选地，超声提取为水浴超声提取，超声时间为8～12min，水浴温度为40～60℃。
[0025]在可选的实施方式中，固液分离包括离心、过率、压滤中的任一种。
[0026]优选地，固液分离为离心，离心机的转速为8000～12000rpm，离心时间为8～12min。
[0027]在可选的实施方式中，除杂包括加入除杂溶剂除杂和/或固相萃取除杂。
[0028]优选地，采用除杂溶剂除杂包括向提取液中加入除杂溶剂，涡旋后固液分离，保留上清液。
[0029]优选地，涡旋时间为2～5min，固液分离为离心，离心机的转速为8000～12000rpm，离心时间为8～12min。
[0030]优选地，除杂溶剂的添加量为3～12ml。
[0031]优选地，除杂溶剂包括正己烷、三氯甲烷中的至少一种。
[0032]优选地，固相萃取除杂的萃取柱为Prime HLB，6cc，150mg、MCX，6cc，150mg中的至少一种。
[0033]第二方面，本专利技术提供一种如前述实施方式任一项的石房蛤毒素的检测方法在食品、药品检测或日化产品中的应用。
[0034]本专利技术具有以下有益效果：
[0035]本专利技术提供了一种石房蛤毒素的检测方法和应用，通过采用超高液相色谱
‑
串联质谱法检测，结合质子辅助电离技术处理，提高了石房蛤毒素的检测灵敏度，即使待测样品中石房蛤毒素的浓度水平极低，也能够被检出，保证了水产品的使用安全性。
附图说明
[0036]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0037]图1为本专利技术提供的质子辅助电离技术的原理图；
[0038]图2为本专利技术实施例1提供的石房蛤毒素标准品溶液的色谱图；
[0039]图3为本专利技术实施例1提供的石房蛤毒素标准曲线图；
[0040]图4为本专利技术对比例1提供的石房蛤毒素标准品溶液的色谱图。
具体实施方式
[0041]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0042]第一方面，本专利技术提供一种石房蛤毒素的检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种石房蛤毒素的检测方法，其特征在于，包括采用超高液相色谱
‑
串联质谱法检测待测样品，其中，液相色谱检测结束后对所述待测样品采用质子辅助电离技术处理，再进行质谱检测。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述质子辅助电离技术包括将电离溶剂与色谱仪中流出的待测样品混合后通入质谱仪；优选地，所述电离溶剂包括甲酸或乙酸溶液，所述电离溶剂的浓度为0.4～0.6％；优选地，所述电离溶剂的流速为3～8μL/min。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述超高液相色谱
‑
串联质谱法包括采用Waters Acquity Ultra Performance LCTM
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PremierXE MS/MS检测。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，液相色谱柱为Waters ACQUITY UPLC Hilic，流动相A为乙酸铵
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甲酸水溶液，流动性B为甲酸甲醇溶液，柱温为35～45℃，样品盘温度为2～6℃；优选地，流动相A为5mM乙酸铵
‑
0.1％甲酸水溶液，流动性B为0.5％甲酸甲醇溶液；优选地，流动相的洗脱程序包括：0～2min，采用10％的流动相A洗脱，余量为流动相B；2～2.1min，采用10～30％的流动相A洗脱，余量为流动相B；2.1～4min，采用30％的流动相A洗脱，余量为流动相B；4～4.1min，采用30～60％的流动相A洗脱，余量为流动相B；4.1～7min，采用60％的流动相A洗脱，余量为流动相B；7～7.1min，采用60～10％的流动相A洗脱，余量为流动相B；7.1～12min，采用10％的流动相A洗脱，余量为流动相B；优选地，进样体积为1～4μL。5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：李桐，王培龙，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：