一种地高辛有关物质的检测方法技术

一种地高辛有关物质的检测方法，利用高效液相色谱仪对供试品溶液进行检测，采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱：0～23min，流动相A为25％；23～45min，流动相A从25％升到40％；45～55min，流动相A从40％升到80％；55～55.5min，流动相A从80％降到25％；而后以流动相A为25％平衡至60min，利用本发明专利技术的检测方法对地高辛原料药、制剂，尤其是地高辛注射液中的有关物质进行分离测定，可检出的杂质多，各峰间的分离度好，灵敏度高，重复性和回收率良好，能够对关键的10个已知杂质和6个未知杂质进行控制，有利于地高辛制剂的质量控制。质量控制。质量控制。

【技术实现步骤摘要】
一种地高辛有关物质的检测方法


[0001]本专利技术属于药物的分析检测方法
，具体涉及一种地高辛有关物质的检测方法。

技术介绍

[0002]地高辛，英文名称为Digoxin，化学名称为3β
‑
[[O
‑
2，6
‑
二脱氧
‑
β
‑
D
‑
核
‑
己吡喃糖基
‑
(l
→
4)
‑
O
‑
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‑
二脱氧
‑
β
‑
D
‑
核
‑
己吡喃糖基]氧代]‑
12β，14β
‑
二羟基
‑
5β
‑
心甾
‑
20(22)烯内酯，分子式为C
41
H
64
O
14
，分子量为780.95，CAS号为20830
‑
75
‑
5，结构式如下：
[0003][0004]地高辛注射剂是强心苷类药物，可用于室上性心律失常，用于急性和慢性心功能不全；控制伴有快速心室率的心房颤动、心房扑动患者的心室率及室上性心动过速。
[0005]地高辛注射液中的有关物质可能来源于两个方面，工艺杂质和降解杂质，其中部分工艺杂质和降解杂质的结构经确定如表0所示：
[0006]表0：地高辛杂质谱分析汇总表
[0007][0008][0009]目前，对于地高辛有关物质检查方法中，国外药典如欧洲药典和美国药典对地高辛原料药有关物质检测均采用的是高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：水＝10:90为流动相A；乙腈：水＝90:10为流动相B，检测波长为220nm，按表1进行梯度洗脱。
[0010]表1 地高辛原料药有关物质检查方法
[0011]时间(分钟)A％B％
0782257822153030
[0012]可见，欧洲药典和美国药典在检测地高辛有关物质中，高效液相色谱法两个方法前15分钟一致，所有杂质出峰均在15min内，仍然存在着些许不足，如不能检测出全部的杂质，且分离度较差，对杂质的分离能力和检出能力有限，对产品的质量控制有待进一步提高。

技术实现思路

[0013]针对现有技术中对地高辛注射液中有关物质的分离度较差及检出杂质少的问题，本专利技术提供一种地高辛有关物质的检测方法，对地高辛及其有关物质进行分离测定，最多可检出16个杂质，各峰间的分离度全部在1.2以上，分离度在2.0以上的出峰达到14个，灵敏度高，杂质的检测限低于0.04μg/ml，定量限低于0.14μg/ml，重复性良好，各杂质回收率均在93.7％～102.1％之间，RSD为2.3％(≤10％，n＝9)，能够对关键的10个已知杂质和6个未知杂质进行控制，有利于地高辛注射液的质量控制。
[0014]为了达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0015]一种地高辛有关物质的检测方法，包括以下步骤：
[0016]利用高效液相色谱仪对供试品溶液进行检测，采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A，水为流动相B，按流速0.8～1.2ml/min进行梯度洗脱，所述供试品溶液为含有地高辛的水溶液；
[0017]其中，梯度洗脱条件为：0～23min，流动相A为25％，流动相B为75％；23～45min，流动相A从25％升到40％，流动相B从75％降到60％；45～55min，流动相A从40％升到80％，流动相B从60％降到20％；55～55.5min，流动相A从80％降到25％，流动相B从20％升到75％；而后继续以流动相A为25％，流动相B为75％平衡至60min。
[0018]进一步，所述有关物质中包括：杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质J、杂质K、未知杂质1、未知杂质2、未知杂质3、未知杂质4、未知杂质5和未/或知杂质6；
[0019]所述杂质A为洋地黄毒甙、杂质B为吉妥辛、杂质C为异羟基洋地黄毒苷元、杂质D为地高新单糖苷、杂质E为双羟基毛地黄毒苷、杂质F为异羟基洋地黄毒苷配基双洋地黄毒糖苷、杂质G为新地毒苷、杂质H为毛花苷C、杂质J为β
‑
乙酰地高辛、杂质K为地高西孕素四分位二酮苷；
[0020]已知杂质的结构式和名称分别如下：
[0021][0022][0023]优选地，所述C18色谱柱柱长为2
‑
30cm。
[0024]又，所述C18色谱柱填料粒径为1.7
‑
5μm。
[0025]进一步，所述C18色谱柱为选自以下品牌系列的色谱柱：Agilent ZORBAX、Agilent InfinityLab Poroshell 120、Agilent Zorbax、Agilent Pursuit、Agilent XRs、Agilent XRs Ultra、Agilent Polaris、waters Symmetry、waters Sunfire、waters Xterra、waters XBridge、waters XSelect、waters CORTECS、岛津Inertsil、岛津wandasil、岛津WondaCract或岛津Shim
‑
pack。
[0026]又，所述高效液相色谱仪以二极管阵列或者紫外吸收为检测器，色谱柱温度为25～35℃，检测波长为200～240nm。
[0027]进一步，所述供试品溶液中地高辛的浓度是0.1
‑
0.75mg/ml。
[0028]又，进样体积为10
‑
50μl，梯度洗脱时流速为1.0ml/min，供试品溶液中地高辛的浓度是0.25mg/ml。
[0029]优选地，所述供试品溶液为地高辛注射液或含有机溶剂的地高辛水溶液，所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、DMSO或乙腈，所述有机溶剂的添加量为20
‑
50v/v％。
[0030]本专利技术地高辛有关物质的检测方法可用于地高辛原料药或地高辛制剂中的杂质检测或分离。
[0031]专利技术人通过筛选合适流动相并优化各组分比例，以乙腈为流动相A、水为流动相B进行梯度洗脱，在0
‑
23min，流动相比例为25:75，该设置可以使杂质C、杂质D、未知杂质1、杂质E、未知杂质2、杂质F、未知杂质3均可以很好的分离，在23
‑
45min，流动相比例从25:75变化至40:60，该设置可以使杂质G、杂质H、地高辛、未知杂质4、杂质K、未知杂质5、未知本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种地高辛有关物质的检测方法，包括以下步骤：利用高效液相色谱仪对供试品溶液进行检测，采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A，水为流动相B，按流速0.8～1.2ml/min进行梯度洗脱，所述供试品溶液为含有地高辛的水溶液；其中，梯度洗脱条件为：0～23min，流动相A为25％，流动相B为75％；23～45min，流动相A从25％升到40％，流动相B从75％降到60％；45～55min，流动相A从40％升到80％，流动相B从60％降到20％；55～55.5min，流动相A从80％降到25％，流动相B从20％升到75％；而后继续以流动相A为25％，流动相B为75％平衡至60min。2.根据权利要求1所述地高辛有关物质的检测方法，其特征在于，所述有关物质中包括：杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质J、杂质K、未知杂质1、未知杂质2、未知杂质3、未知杂质4、未知杂质5和/或未知杂质6；所述杂质A为洋地黄毒甙、杂质B为吉妥辛、杂质C为异羟基洋地黄毒苷元、杂质D为地高新单糖苷、杂质E为双羟基毛地黄毒苷、杂质F为异羟基洋地黄毒苷配基双洋地黄毒糖苷、杂质G为新地毒苷、杂质H为毛花苷C、杂质J为β
‑
乙酰地高辛、杂质K为地高西孕素四分位二酮苷。3.根据权利要求1或2所述地高辛有关物质的检测方法，其特征在于，所述C18色谱柱柱长为2
‑
30cm。4.根据权利要求3所述地高辛有关物质的检测方法，其特征在于，所述C18色谱柱填料粒径为1.7
‑
5μm。5.根据权利要求4所述地高辛有关物质的检测方法，其特征在于，所述C18色谱柱为选自以下品牌系列...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭华龙，杨易可，梁屹，杨婷婷，
申请(专利权)人：上海旭东海普药业有限公司，
类型：发明
国别省市：