分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞株、抗HCG单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术涉及生物工程技术领域，具体涉及分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞株、抗HCG单克隆抗体及应用，包括分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞株，包括杂交瘤细胞株C1和杂交瘤细胞株C2，且分别保藏于中国典型培养物保藏中心；杂交瘤细胞株C1的保藏编号为CCTCC NO：C2021219，杂交瘤细胞株C2的保藏编码为CCTCC NO：C2021220。将上述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体经过饱和硫酸铵盐和protein

【技术实现步骤摘要】
分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞株、抗HCG单克隆抗体及应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体涉及分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞株、抗HCG单克隆抗体及应用。

技术介绍

[0002]HCG即人绒毛膜促性腺激素，是人类受孕后胎盘合体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素，由结构单位α亚基和功能单位β亚基组成。在妊娠早期HCG的浓度迅速增高,检测尿中的HCG即可证实妊娠。有许多研究表明，肿瘤病人的血和尿中有游离的HCG的β亚基存在，研制高纯度的HCG单克隆抗体对早孕、癌症的检测有重要的意义。
[0003]HCG的α亚基与LH（促黄体生成素）、FSH（促卵泡激素）、TSH（促甲状腺激素）的结构相似，氨基酸排列顺序基本相同，仅β亚基有部分不同，在羧基末端约30个氨基酸的片段，代表了HCG的特异性。当用HCG分子作为免疫原制备单克隆抗体，或多或少地都会和LH、FSH、TSH发生交叉反应，抗α
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HCG的抗体无法识别α
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HCG和甾体糖蛋白之间的差异，抗β
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HCG的抗体灵敏性和特异性较好，在HCG的诊断与治疗等检测中可以有效的降低交叉反应。目前，单克隆抗体的制备主要有小鼠体内诱生腹水、杂交瘤细胞体外培养及基因工程等方法。其中由于腹水制备的成本低，产量大，且操作简单，而被广泛应用。但此方法所得到的抗体中含有多种杂蛋白及其他杂质，为了获得高效价、高纯度、高特异性的抗体，必须选择合适的纯化方法对其进行分离纯化，以满足在工业、科学研究或医疗诊断等方面的应用。<br/>
技术实现思路

[0004]本专利技术的第一个目的在于：针对现有技术存在的不足，提供分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0005]为了实现上述专利技术的目的，本专利技术的技术方案是：分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞株，包括杂交瘤细胞株C1和杂交瘤细胞株C2，且分别保藏于中国典型培养物保藏中心；杂交瘤细胞株C1的保藏编号为CCTCC NO：C2021219，杂交瘤细胞株C2的保藏编码为CCTCC NO：C2021220。
[0006]作为一种改进的技术方案，所述杂交瘤细胞株C1和所述杂交瘤细胞株C2分别通过免疫小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞进行融合得到。
[0007]本专利技术的第二个目的在于：针对现有技术存在的不足，提供抗HCG单克隆抗体。
[0008]为了实现上述专利技术的目的，本专利技术的技术方案是：抗HCG单克隆抗体，所述抗HCG单克隆抗体包括单克隆抗体α
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HCG和单克隆抗体β
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HCG，所述单克隆抗体α
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HCG由保藏编号CCTCC NO：C2021219的细胞株分泌产生，所述单克隆抗体β
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HCG由保藏编码为CCTCC NO：C2021220的细胞株分泌产生。
[0009]作为一种改进的技术方案，抗HCG单克隆抗体的纯化方法，将采集的腹水经过冷冻保存，取出融化后经过离心、过滤，将收集的腹水经过饱和硫酸铵盐预处理，再经过
protein
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A层析柱处理后得到纯化后的抗HCG单克隆抗体。
[0010]作为一种改进的技术方案，饱和硫酸铵盐预处理是指将过滤后收集的腹水和饱和硫酸铵盐溶液按照0.8
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1：1
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1.2的体积比混合，经过搅拌混匀后再离心，收集的沉淀中加入PBS缓冲液进行透析处理，透析处理结束后再经过离心、过滤得到粗单克隆抗体。
[0011]作为一种改进的技术方案，protein
‑
A层析柱处理是指将饱和硫酸铵盐预处理得到的粗单克隆抗体按照2.5
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3.5ml/min上柱，加入柱体积9
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11倍量的第一洗脱液，经过洗脱处理后再加入柱体积9
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11倍量的第二洗脱液，收集的流出液调至中性，再经过浓缩、透析、离心、过滤处理得到纯化的单克隆抗体。
[0012]作为一种改进的技术方案，所述第一洗脱液的pH为7.2
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7.6，所述第一洗脱液中含有0.12
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0.18M的Nacl和18
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22mM 的Na2HPO4。
[0013]作为一种改进的技术方案，所述第二洗脱液的pH2.8
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3.2，所述第二洗脱液含有0.08
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0.12M的甘氨酸和0.2M
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0.4M的精氨酸。
[0014]本专利技术的第三个目的在于：针对现有技术存在的不足，提供抗HCG单克隆抗体在体外诊断试剂盒中的应用。
[0015]为了实现上述专利技术的目的，本专利技术的技术方案是：抗HCG单克隆抗体在体外诊断试剂盒中的应用，化学发光免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒、胶体金免疫检测试剂盒、荧光免疫检测试剂盒中均采用配对的单克隆抗体α
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HCG和β
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HCG，单克隆抗体α
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HCG作为包被抗体，单克隆抗体β
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HCG作为标记抗体。
[0016]本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有以下优点：本专利技术的杂交瘤细胞株C1和C2及其传代细胞株分别能够稳定的分泌单克隆抗体α
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HCG和单克隆抗体β
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HCG；将上述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体经过饱和硫酸铵盐和protein
‑
A层析柱处理后，可以有效除去杂质，得到纯度高，效价高，特异性强，稳定性好的单克隆抗体；纯化后得到的单克隆抗体用于检测试剂的生产，大大提高了试剂灵敏度。
附图说明
[0017]图1为α
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HCG+β
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HCG单克隆抗体效价与特异性的检测结果；图2为α
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HCG、β
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HCG单克隆抗体效价的检测结果；图3为α
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HCG、β
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HCG单克隆抗体特异性的检测结果。
具体实施方式
[0018]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0019]实施例1杂交瘤细胞株的制备（杂交瘤细胞株C1或C2的制备均采用以下方法）（1）动物免疫用α/β
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HCG蛋白（外购）作为免疫原，免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠。初次免疫，抗原与小鼠快速佐剂（3周，外购）等体积混合，经后腿小腿肌肉免疫小鼠，免疫剂量为20μg/只。第14天后同样方式加强免疫1针。第21天，采微量（100微升）尾血测效价。血清效价达到10万以上即可进行融合。融合前3天，对小鼠进行腹腔冲击免疫20μg免疫原。
[0020]（2）细胞融合将小鼠处死，浸泡于体积浓度为75%酒精中5min，在无菌环境下摘取免疫小鼠的脾脏，研磨分散细胞，洗涤离心后获得B淋巴细胞。将小鼠B淋巴细胞和处于对数生长期，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：包括杂交瘤细胞株C1和杂交瘤细胞株C2，且分别保藏于中国典型培养物保藏中心；杂交瘤细胞株C1的保藏编号为CCTCC NO：C2021219，杂交瘤细胞株C2的保藏编码为CCTCC NO：C2021220。2.根据权利要求1所述的分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述杂交瘤细胞株C1和所述杂交瘤细胞株C2分别通过免疫小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞进行融合得到。3.抗HCG单克隆抗体，其特征在于：所述抗HCG单克隆抗体包括单克隆抗体α
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HCG和单克隆抗体β
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HCG，所述单克隆抗体α
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HCG由保藏编号CCTCC NO：C2021219的细胞株分泌产生，所述单克隆抗体β
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HCG由保藏编码为CCTCC NO：C2021220的细胞株分泌产生。4.根据权利要求3所述的抗HCG单克隆抗体，其特征在于：抗HCG单克隆抗体的纯化是将采集的腹水经过冷冻保存，取出融化后经过离心、过滤，将收集的腹水经过饱和硫酸铵盐预处理，再经过protein
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A层析柱处理后得到纯化后的抗HCG单克隆抗体。5.根据权利要求4所述的抗HCG单克隆抗体，其特征在于：饱和硫酸铵盐预处理是指将过滤后收集的腹水和饱和硫酸铵盐溶液按照0.8
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1:1
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1.2的体积比混合，经过搅拌混匀后再离心，将收集的沉淀中加入PBS缓冲液进行透析处理，透析处理结束后再经过...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，王婷，张媛媛，刘万建，杜金芳，
申请(专利权)人：山东硕景生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：