一种猫细小病毒中和性单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种猫细小病毒中和性单克隆抗体及其应用，涉及生物工程技术领域。本发明专利技术提供了一种杂交瘤细胞株，于2022年5月6日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCCNO：C2022111。本发明专利技术还提供一种猫细小病毒中和性单克隆抗体，该猫细小病毒中和性单克隆抗体由上述的杂交瘤细胞分泌产生，具体序列如SEQ ID NO：1和2所示。本发明专利技术的杂交瘤细胞能够分泌产生猫细小中和单克隆抗体，该单克隆抗体经体外细胞水平中和试验和动物保护性实验证明，具有很高的中和活性，能够特异性地治疗FPV，并且制备简单、操作方便，对于预防和治疗该病具有重大意义。大意义。大意义。

A neutralizing monoclonal antibody against feline parvovirus and its application

【技术实现步骤摘要】
一种猫细小病毒中和性单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，特别是涉及一种猫细小病毒中和性单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]猫细小病毒(Feline panleukopenia virus，FPV)，旧名猫瘟热病毒，又名猫全白细胞减少症病毒、猫泛白细胞减少症病毒，感染的临床表现主要有突发高热、顽固性呕吐、腹泻、脱水及白细胞严重减少，该病毒具有高度接触传染性，其中幼年动物的发病率和死亡率最高，对猫而言，各种年龄的猫均可感染，主要感染1岁以下的幼猫。以3
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5个月龄未接种疫苗的幼猫最易感，感染率可达70％，病死率为50％
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60％。该病毒宿主范围广泛，包括家养和野生猫科动物和一些野犬科动物，例如浣熊和狐狸，犬除外，是目前肉食兽细小病毒感染范围最宽、致病性最强的一种病毒。
[0003]FPV对外界因素具有强大的抵抗力，常温下能够存活至少一年。它还具有耐高温(80℃持续30分钟)和低pH值(3.0)的能力。在受FPV感染的猫中，大量的病毒存在于病猫的排泄物中，包括唾液，尿液，粪便和呕吐物中。FPV具有极高的传染性，可以通过患猫直接接触传染，或者通过垫料、用具、螨虫或人作为媒介机械传播，感染的主要门户是通过胃肠道，而较不常见的是通过吸入雾化的病毒粒子而进入呼吸道。
[0004]由于FPV的传染性极强，因此感染FPV的患猫需要隔离饲养，并且需要经常对饲养环境进行消毒，以降低环境中的病毒含量。目前对于该病多采用免疫预防，但是免疫幼猫仍会发生该病，因此除了要积极预防外，有必要进行有效的治疗。目前除采用免疫和药物治疗外，通常还进行一些辅助护理方法如补液(补充电解质和葡萄糖)、抗菌和驱虫、止吐与胃肠道保护剂等。有效的中和抗体治疗方法还未广泛用于临床病例。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种猫细小病毒中和性单克隆抗体及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术提供的单克隆抗体可以有效中和猫细小病毒。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种杂交瘤细胞株，于2022年5月6日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2022111。
[0008]本专利技术还提供一种猫细小病毒中和性单克隆抗体，所述猫细小病毒中和性单克隆抗体由上述的杂交瘤细胞分泌产生。
[0009]本专利技术还提供上述的单克隆抗体在制备猫细小病毒预防或治疗药物中的应用。
[0010]本专利技术还提供上述的猫细小病毒中和性单克隆抗体的制备方法，包括将上述的杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔，获得小鼠腹水，再经纯化，即可得到所述猫细小病毒中和性单克隆抗体。
[0011]进一步地，所述纯化采用ProteinA+Protein G亲和层析法。
[0012]本专利技术公开了以下技术效果：
[0013]本专利技术的杂交瘤细胞能够分泌产生猫细小中和单克隆抗体，该单克隆抗体经体外细胞水平中和试验和动物保护性实验证明，具有很高的中和活性，能够特异性地治疗FPV，并且制备简单、操作方便，对于预防和治疗该病具有重大意义。
附图说明
[0014]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0015]图1是FPV分离株感染细胞后不同时间点IFA检测；
[0016]图2是单克隆抗体中和效价检测，其中A：腹水的中和保护率，B：抗体的中和保护率，C：50％中和保护效价；
[0017]图3是PCR检测感染前实验动物粪便，其中M：2000bp DNA Marker，1
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6：6只猫感染前的粪便样本；
[0018]图4是PCR检测感染后实验动物粪便，其中M：2000bp DNA Marker，1
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17：粪便样品；
[0019]图5是感染FPV后猫的临床症状及特征，其中FPV为阳性组，FP
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9mAb为治疗组，Mock为阴性组；
[0020]图6是感染FPV后猫的临床指标变化，其中A
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F分别为A：体温，B：体重，C：临床评分，D：白细胞数，E：存活率，F：抗体稀释倍数；
[0021]图7是感染FPV后猫的病理剖检图；
[0022]图8是感染FPV后猫的组织病理学变化(HE染色)；
[0023]图9是感染FPV后猫的组织病理学变化(免疫组化)。
具体实施方式
[0024]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0025]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0026]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0027]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实
施方式对技术人员而言是显而易见得的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0028]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0029]以下实施例中，FPV易感细胞CRFK购自中国典型培养物保藏中心。
[0030]实施例1
[0031]1.猫细小病毒的纯化
[0032](1)在6孔培养板中将FPV易感细胞CRFK培养至单层，将猫细小病毒接种至CRFK中，在37℃培养箱中吸附1
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2h后弃掉培养液，用PBS洗三遍CRFK细胞。加入含2％胎牛血清的DMEM维持液继续于37℃静置培养，因细胞病变难以观察，通过不同时间点进行间接免疫荧光来确定病毒增殖情况，结果如图1所示，发现在60h时病毒量最多，之后细胞开始脱落。因此，60h时将第一代的培养物取出在
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80℃与常温之间反复冻融3次，8000rpm，4℃离心15min，取上清，分装至无菌EP管中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，于2022年5月6日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2022111。2.一种猫细小病毒中和性单克隆抗体，其特征在于，所述猫细小病毒中和性单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞分泌产生，轻链序列如SEQ ID NO：1所示，重链序列如SEQ ID NO：2所示。3.一种如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭贵青，焦宇洲，沈洲，杨梦芳，方祾颖，史佳乐，许谦，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：