一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明专利技术分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCCNo.22334。本发明专利技术获得的抗丙炔氟草胺单克隆抗体细胞株可用于食品安全检测中丙炔氟草胺残留分析检测，其对丙炔氟草胺有较好的检测灵敏度和特异性(IC

A hybridoma cell line secreting monoclonal antibody against flutamide propionate and its application

【技术实现步骤摘要】
一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术属于食品中农药残留的快速检测
，尤其是涉及一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

技术介绍

[0002]丙炔氟草胺(flumioxazin，简称FLU)，商品名Sumisoya、速收，是日本住友化学工业株式会社开发的环酰亚胺类除草剂。丙炔氟草胺为原卟啉原氧化酶抑制剂，是触杀型选择性除草剂，使用后会在土壤表面形成处理层，杂草幼苗接触后会引起植物体内的原卟啉积累，使细胞膜脂质过氧化作用增强，从而导致敏感杂草的细胞膜结构与细胞功能产生不可逆损害，在24～ 48h内敏感杂草幼苗就会由凋萎、白化到坏死及枯死。其目前已在多个国家上市，主要用来防除大豆、棉花、葡萄和其他许多作物田中的阔叶杂草。
[0003]测定丙炔氟草胺含量的分析方法目前研究较少，主要有气相色谱
‑
串联质谱法(GC
‑
MS/MS)和高效液相色谱法(HPLC
‑
UV)等仪器方法，这些检测方法具有耗时、步骤繁琐、无法进行现场快速检测、成本高等缺点，因此建立快速简便的丙炔氟草胺检测方法具有重要意义。酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，适用于大量样本的现场快速检测，为丙炔氟草胺检测提供了一种新的检测途径。

技术实现思路

[0004]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。
[0005]本专利技术的第一个目的在于提供一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株于2021年05月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院 3号，保藏编号CGMCC No.22334，所述杂交瘤细胞株分类命名为单克隆细胞株。
[0006]本专利技术的第二个目的在于提供一种分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：
[0007]S1：取杂环酮、硫羧酸溶于有机溶剂中，并加入碳酸钾，加热回流反应，待反应结束后将反应液分离纯化得到丙炔氟草胺半抗原FLU
‑
COOH；
[0008]S2：利用S1中所述丙炔氟草胺半抗原制备丙炔氟草胺完全抗原，将丙炔氟草胺完全抗原与完全弗氏佐剂制备得到免疫原1，所得丙炔氟草胺完全抗原和不完全弗氏佐剂乳化得到免疫原2；
[0009]S3：将S2中所得免疫原1对小鼠进行皮下免疫；
[0010]S4：将S3中免疫后的小鼠使用S2中免疫原2再进行加强免疫，并使用丙炔氟草胺完全抗原进行冲刺免疫；
[0011]S5：取S4中冲刺免疫后的小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞，进行细胞融合，得到所述杂交瘤细胞株。
[0012]在本专利技术的一个实施例中，S1中所述杂环酮的结构式为：
[0013][0014]其中
[0015][0016]在本专利技术的一个实施例中，S1中所述硫羧酸如式(1)
‑
式(2)所示：
[0017]其中n＝1
‑
6。
[0018]在本专利技术的一个实施例中，S1中所述丙炔氟草胺与硫羧酸的质量之比为1:0.8
‑
3。
[0019]在本专利技术的一个实施例中，S1中所述有机溶剂为DMSO、乙二醇和DMF 中的一种或多种。
[0020]在本专利技术的一个实施例中，S1中所述丙炔氟草胺半抗原结构式：
[0021][0022][0023][0024]n＝1
‑
6。
[0025]本专利技术的第三个目的在于提供所述杂交瘤细胞株在制备抗丙炔氟草胺单克隆抗体中的应用。
[0026]本专利技术的第四个目的在于提供一种抗丙炔氟草胺单克隆抗体，所述抗丙炔氟草胺单克隆抗体是由所述的杂交瘤细胞株分泌所得。
[0027]本专利技术的第五个目的在于提供所述的抗丙炔氟草胺单克隆抗体在检测丙炔氟草胺中的应用。
[0028]本专利技术的第六个目的在于提供一种组合物，所述组合物包括所述的抗丙炔氟草胺单克隆抗体。
[0029]所述的组合物在检测丙炔氟草胺中的应用。
[0030]本专利技术的第七个目的在于提供一种试剂盒，包括所述的抗丙炔氟草胺单克隆抗体。
[0031]所述的试剂盒在检测丙炔氟草胺中的应用。
[0032]本专利技术的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
[0033]本专利技术提供的杂交瘤细胞株SALL分泌的单克隆抗体，对丙炔氟草胺具有较好的特异性和检测灵敏度(IC
50
值为0.59ng/mL)，可实现对谷物、油料、蔬菜、水果、调味料以及生乳中丙炔氟草胺残留量的检测，为食品中丙炔氟草胺残留的免疫学检测提供了原料，具有实际应用价值。
附图说明
[0034]为了使本专利技术的内容更容易被清楚的理解，下面根据本专利技术的具体实施例并结合附图，对本专利技术作进一步详细的说明，其中
[0035]图1
‑
图3是本专利技术实施例1中丙炔氟草胺羧酸衍生物FLU
‑
COOH的质谱图。
[0036]图4是本专利技术实施例1中所得偶联物丙炔氟草胺
‑
BSA
[0037]图5是本专利技术SALL单克隆抗体对丙炔氟草胺的抑制标准曲线。
具体实施方式
[0038]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0039]本专利技术通过将丙炔氟草胺完全抗原免疫小鼠，通过细胞融合，HAT选择性培养基培养，通过icELISA筛选细胞上清，最终得到了对丙炔氟草胺有较高灵敏度的单克隆抗体杂交瘤细胞株SALL。
[0040]实施例1
[0041]1.完全抗原的制备
[0042](1)半抗原的合成，反应方程式如下所示：
[0043][0044]衍生步骤简述如下：
[0045]丙炔氟草胺半抗原的制备：取0.5g丙炔氟草胺，适量的巯基丙酸与碳酸钾，按1:1:3的比例溶入10mLDMF中，高温加热回流12h，反应结束后加入 100mL去离子水，滴加1M HCl溶液调至酸性，乙酸乙酯萃取，合并三次萃取的有机相，60℃旋转蒸馏干燥，得到丙炔氟草胺羧酸衍生物FLU
‑
COOH；将所得FLU
‑
COOH进行表征，具体见图1
‑
图3。(通式中n＝2)。
[0046](2)称取3.4mg已制备的FLU
‑
COOH，溶于200μLDMF中，搅拌下依次加入4.6mgN
‑
羟基
琥珀酰亚胺和7.7mg 1
‑
乙基碳二亚胺盐酸盐，室温反应4h，得到的混合物称为A液；然后称取10mg牛血清蛋白BSA溶于2mL 碳酸盐缓冲液中，称为B液；将A液缓慢滴入B液中，搅拌下室温反应12h，用0.01mol/L磷酸缓冲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株于2021年05月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCCNo.22334。2.一种分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：取杂环酮和硫羧酸溶于有机溶剂中，并加入碳酸钾，加热回流反应，待反应结束后将反应液分离纯化得到丙炔氟草胺半抗原；S2：利用S1中所述丙炔氟草胺半抗原制备丙炔氟草胺完全抗原，将丙炔氟草胺完全抗原与完全弗氏佐剂制备得到免疫原1，所得丙炔氟草胺完全抗原和不完全弗氏佐剂乳化得到免疫原2；S3：将S2中所得免疫原1对小鼠进行皮下免疫；S4：将S3中免疫后的小鼠使用S1中免疫原2再进行加强免疫，并使用丙炔氟草胺完全抗原进行冲刺免疫；S5：取S3中冲刺免疫后的小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞，进行细胞融合，得到所述杂交瘤细胞株。3.根据权利要求2所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥传来，王鹏，匡华，徐丽广，孙茂忠，刘丽强，吴晓玲，宋珊珊，胡拥明，郝昌龙，吴爱红，郭玲玲，胥欣欣，倪萍，毕雪威，
申请(专利权)人：无锡杰圣杰康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：