一种杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种杂交瘤细胞株及其应用，属于生物医学技术领域。该杂交瘤细胞株已于2021年12月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.45006，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该杂交瘤细胞株不但可以稳定传代，而且其分泌的犬CR1

【技术实现步骤摘要】
一种杂交瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术属于生物医学
，尤其涉及一种杂交瘤细胞株及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，大量研究表明红细胞在补体受体的介导下其免疫功能与免疫性疾病的发生发展具有显著相关性，尤其是补体受体介导的免疫细胞对机体循环免疫复合物的清除是先天免疫系统重要的防御功能。
[0003]目前单克隆抗体技术不仅用于免疫性疾病的治疗，而且广泛运用在了免疫性疾病的分子机制研究中，作为一种研究工具，单克隆抗体以及相关的制备技术经常被用于分析和纯化抗原、定位抗原决定簇、确定蛋白互作位点等方面。所以为了进一步阐明红细胞免疫在疾病发展过程中发挥免疫功能的分子机理，补体受体单克隆抗体的制备成为保证相关研究的重要环节。
[0004]目前可稳定传代的产犬CR1
‑
L单克隆抗体的杂交瘤细胞株以及犬CR1
‑
L单克隆抗体都未有报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一在于提供一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株已于2021年12月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.45006，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0006]本专利技术的目的之二在于提供一种由上述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。
[0007]进一步的，所述单克隆抗体的重链为50kDa，轻链为30kDa。
[0008]本专利技术的目的之三在于提供上述杂交瘤细胞株在制备犬CR1
‑
L单克隆抗体中的应用。
[0009]本专利技术的目的之四在于提供一种检测试剂，所述试剂中含有上述单克隆抗体。
[0010]本专利技术的目的之五在于提供一种试剂盒，所述试剂盒中含有上述单克隆抗体。
[0011]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0012]本专利技术成功构建了可稳定生产犬CR1
‑
LMcAb的杂交瘤细胞株，并获得犬CR1
‑
LMcAb，为进一步研究动物红细胞免疫功能的分子机制奠定基础。
[0013]生物保藏说明：
[0014]保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
[0015]保藏编号：CGMCCNO.45006；
[0016]保藏日期：2021年12月08日；
[0017]保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
附图说明
[0018]图1为实施例1中犬CR1
‑
L基因片段的PCR扩增结果图。
[0019]图2为实施例1中蛋白诱导表达检测结果图。
[0020]图3为实施例1中重组蛋白Frd
‑
GST
‑
CR1L纯化后的凝胶电泳图。
[0021]图4为实施例3中还原性SDS
‑
PAGE检测犬CR
‑
L单克隆抗体图。
[0022]图5为实施例3中犬CR1
‑
LMcAb免疫印迹检测结果图。
具体实施方式
[0023]实施例1
[0024]利用NCBI(National center for biotechnology information)提供的blastn在线程序，将人、黑猩猩、狒狒、穴兔等动物的补体受体mRNA序列进行同源性比对，确定相对保守序列，后续步骤如下：
[0025](1)提取健康比格犬血细胞总RNA；
[0026](2)对犬CR1
‑
L基因cDNA部分片段进行RT
‑
PCR扩增；
[0027](3)反应完毕后抽取反应液进行1％琼脂糖凝胶电泳，结果如图1所示，其中得到了约l000 bp，900bp，600bp的条带，分别命名为A、B、C，将CR1
‑
like基因片段PCR产物A
‑
C进行测序，并将测序结果于GenBank数据库进行同源性比对，结果表明条带A与B均为非特异性扩增，条带C为606bp的犬CR1
‑
L基因片段。条带C具体序列如下：
[0028]SEQ ID NO.1：
[0029]ttTGTCCAAATCCTCCGGCTATCCTTAACGGGCACCACACTGGAACTTCTTGGGGACGCATTCCCTATGGAAAAGAAATTACTTACATTTGTGACTACCAGCCAGCCAGCGGGATGATCTTCAAACTCGTTGGGGAGAGCACCATCCTCTGCACCAGTGACAATCAAGGGAACGGGATTTGGAGCGGCCCTGCTCCTCACTGTGAACCTGCTGGTCCTACAGCATGCCCATATCCACCCAAGATCCACAACGGGCATTACATTGGAAGACATGTGTCTCCATATCTTCCTGGGATGATCGTCAGCTATGCTTGTGATCCAGGCTACTTGTTGGTGGGAAGAGCCTTCATATTCTGCACCTACCAGGGAACCTGGAGCCAATTTGATCATTATTGCAAAGAGATAAAATGTATCCTCCCAGAGTTTATGAATGGAATCCAGAAGAAGTTGCACATGAGAAAAGTATACCACTATGGAGATAATGTAACTTTTGAGTGTGAAGTTGGATATACTCTAAAAGGCAGTCGCCAGAGTCAGTGTCAGGCAGATGACACATGGAACCCTCCTCTGGCCGTATGTACATCTCGCACACGTGATTCTCTCAaaa；
[0030]将此片段与GenBank收录的人、猩猩、野猪、兔的补体受体I型基因进行同源性比对，相似性分别为为83％、82％、84％和80％；
[0031](4)将测序得到的目的序列交予福因德生物公司，根据大肠杆菌的密码子偏好性进行优化，合成含有BamHI(GGATCC)与XhoI(CTCGAG)酶切位点以及6
×
His标签的目的基因，序列如SEQ ID NO.2所示，将目的基因与原核表达载体pFrd
‑
GST1质粒(福因德科技(武汉)有限公司生产)连接后转化大肠杆菌工程菌；
[0032]SEQ ID NO.2：
[0033]GGATCCTGCCCTAATCCGCCGGCAATTCTGAATGGTCATCATACCGGTACAAGTTGGGGTCGCATTCCGTATGGCAAAGAAATTACCTATATTTGCGATTATCAGCCGGCAAGCGGCATGATTTTTAAACTGGTTGGTGAAAGCACCATTCTGTGTACCAGTGATAATCAGGGCAATGGTATTTGGAGCGGCCCGGCCCCGCATTGTGAACCGGCAGGTCCGACCGCATGTCCGTATCCGCCGAAAATTCATAATGGTCATTATATTGGTCGC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株已于2021年12月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.45006，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.由权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。3.如权利2所述的单克隆抗体，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯震，李宏全，尹伟，范阔海，孙娜，孙盼盼，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：