一种杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种杂交瘤细胞株及其应用，属于生物医学领域。本发明专利技术的杂交瘤细胞株为t

【技术实现步骤摘要】
一种杂交瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术涉及一种杂交瘤细胞株及其应用，属于生物医学领域。

技术介绍

[0002]血栓性疾病是一种起病隐匿、发病突然、致死致残率较高的疾病，可见于几乎各个临床科室，其病理过程涉及血管内皮、凝血和纤溶三大系统。现有的研究已经证实血栓前状态时，血管内皮、凝血和纤溶系统已发生改变，TAT、PIC、tPAI
‑
C和t
‑
PAI
‑
C是有效反应机体血管内皮、凝血和纤溶系统早期改变的有效指标，适用于各临床学科血栓高位人群血栓早期诊断及血栓风险评估。
[0003]组织型纤溶酶原激活剂及其抑制剂
‑
1复合物(tPAI
‑
C)是血管内皮细胞释放到血液中的组织型纤溶酶原激活物(t
‑
PA)与生理性抑制因子纤溶酶原激活物抑制物(PAI
‑
1)以1：1结合而形成的复合物。tPAI
‑
C是纤溶系统分子标志物，也是血管内皮细胞受损的分子标志物。
[0004]研究表明，tPAI
‑
C是静脉血栓栓塞(VTE)的最佳诊断标志物之一，在VTE患者血浆中活化的PAI
‑
1和tPAI
‑
C水平比健康对照人群明显升高，当tPAI
‑
C的cutoff取为3.6ng/ml时，其诊断VTE的灵敏度为74％(95％CI 64～82％)，特异度为69％(95％CI,59～77％),ROC曲线下面积为0.75(95％CI，0.68～0.72)。
[0005]同时tPAI
‑
C也可作为心肌梗死(MI)的风险预测指标。无论是男性或女性，血浆中tPAI
‑
C浓度与MI风险呈显著相关，男性和女性的风险比值比(OR)分别为2.4和2.0。在男性患者中，吸烟或糖尿病与血浆tPAI
‑
C具有协同作用。风险比值比(OR)分别为4.6和7.9。
[0006]tPAI
‑
C作为tPA和PAI
‑
1的复合物，其检测容易受tPA和PAI
‑
1单体的干扰。因此若要通过免疫学对其准确定量，则需要特定表位的单克隆抗体。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种能分泌tPAI
‑
C(组织型纤溶酶原激活剂及其抑制剂
‑
1复合物)单克隆抗体的杂交瘤细胞株，由本专利技术杂交瘤细胞株分泌的tPAI
‑
C单克隆抗体可准确测定tPAI
‑
C。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株为t
‑
PAIC2#，已于2020年4月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202066，保藏地址为中国武汉，武汉大学。
[0010]第二方面，本专利技术提供了一种tPAI
‑
C单克隆抗体，所述tPAI
‑
C单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株分泌产生。
[0011]第三方面，本专利技术提供了上述tPAI
‑
C单克隆抗体在制备检测tPAI
‑
C或静脉血栓栓塞的试剂盒中的应用。
[0012]第四方面，本专利技术提供了上述tPAI
‑
C单克隆抗体在制备预测心肌梗死风险的试剂
盒中的应用。
[0013]第五方面，本专利技术提供了一种用于检测tPAI
‑
C或静脉血栓栓塞或预测心肌梗死风险的试剂盒，所述试剂盒包含上述tPAI
‑
C单克隆抗体。
[0014]作为本专利技术所述试剂盒的优选实施方式，所述试剂盒还包含磁微粒、抗tPAI
‑
C抗体、AP、戊二醛和牛血清白蛋白。
[0015]作为本专利技术所述试剂盒的优选实施方式，所述试剂盒用于化学发光法检测。
[0016]第六方面，本专利技术提供了一种编码上述tPAI
‑
C单克隆抗体的多核苷酸。
[0017]第七方面，本专利技术提供了一种载体，其包含上述多核苷酸。
[0018]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了一种新的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株可分泌对tPAI
‑
C蛋白不同表位具有高亲和力的单克隆抗体。采用本专利技术的单克隆抗体检测tPAI
‑
C，不容易收到tPA和PAI
‑
1单体的干扰，准确度高。
[0019]本专利技术的tPAI
‑
C单克隆抗体可用作体外诊断试剂，例如用于制备化学发光检测试剂盒，准确定量血液中tPAI
‑
C蛋白的浓度，其具有巨大的经济和社会效益，为精确诊断、对症用药等临床治疗提供重要的辅助检测手段。
附图说明
[0020]图1为本专利技术制备tPAI
‑
C复合物时的SDS
‑
PAGE结果图；
[0021]图2为本专利技术采用tPAI
‑
C复合物免疫小鼠后，尾血效价检测结果图；
[0022]图3为本专利技术采用间接ELISA法测定抗体效价的结果图；
[0023]图4为本专利技术采用tPAI
‑
C单克隆抗体检测tPAI
‑
C的标准曲线图；
[0024]图5为采用希森美康化学发光试剂检测tPAI
‑
C的标准曲线图。
具体实施方式
[0025]为更好地说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明。
[0026]tPAI
‑
C作为tPA和PAI
‑
1的复合物，其检测容易受tPA和PAI
‑
1单体的干扰。若要通过免疫学对其准确定量，则需要特定表位的单克隆抗体。为此，本专利技术采取了下述技术方案：
[0027]第一方面，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株为t
‑
PAIC2#，已于2020年4月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202066，保藏地址为中国武汉，武汉大学。
[0028]本专利技术的杂交瘤细胞株是采用下述方法获得：以tPAI
‑
C作为抗原免疫小鼠，将免疫效价符合要求的小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，得到所述杂交瘤细胞株。
[0029]由本专利技术杂交瘤细胞株分泌的tPAI
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C单克隆抗体对tPAI
‑
C蛋白不同表位具有高亲和力，采用它来检测tPAI
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C，准确度高。由此，tPAI
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C单克隆抗体可用作诊断试剂(例如体外诊断试剂)检测tPAI
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为t
‑
PAIC2#，已于2020年4月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202066，保藏地址为中国武汉，武汉大学。2.一种tPAI
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C单克隆抗体，其特征在于，所述tPAI
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C单克隆抗体由权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌产生。3.权利要求2所述tPAI
‑
C单克隆抗体在制备检测tPAI
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C或静脉血栓栓塞的试剂盒中的应用。4.权利要求2所述tPAI
‑
C单克隆抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴培钿，卓业斌，谭仙桂，陈渤，吕锦华，
申请(专利权)人：广州万孚生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：