产生抗β-淀粉样蛋白抗体的杂交瘤细胞及其用途制造技术

本申请提供了产生抗β

【技术实现步骤摘要】
产生抗
β
‑
淀粉样蛋白抗体的杂交瘤细胞及其用途


[0001]本申请涉及细胞及抗体领域，更具体地，本申请涉及产生抗β
‑
淀粉样蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及其用途。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默症(Alzheimer
’
s Disease，AD)是一种渐进性神经系统疾病，会损害思维、记忆和独立性。临床前阶段包括大脑中所有看不见的变化(如斑块的积聚)在症状出现前数年发生，随着疾病的发展，患者日常活动的护理需求越来越高，轻度AD患者虽然开始忘记熟悉的单词或物体的位置，但生活仍然可以自理；发展到中度，患者变得更健忘，更难以完成日常任务，并经历性格和行为的变化；重度AD患者则不能再对他们的环境做出反应，不能进行交谈，也不能控制运动或控制大便。
[0003]AD的病因仍不明确，β淀粉样蛋白(Amyloid beta peptide，Aβ)级联假说认为Aβ蛋白代谢失衡、聚集和形成的低聚物和纤维体会沉积于脑中，沉积物形成老年斑，引起神经炎症增加，以及神经元凋亡等脑部病变，是诱发阿尔兹海默症的重要因素。Aβ分子量约为4kDa，是由跨膜淀粉样前体蛋白(Amyloid precursor protein，APP)经过β和γ分泌酶两次裂解后产生的神经毒性蛋白，是蛋白质错误折叠形成的，其能够以单体、寡聚体、原纤维和不溶性纤维的形式存在，在脑内沉积并伴随突触的损伤和神经元的死亡。
[0004]尽管没有治愈AD的方法，但一些FDA批准的药物可以延缓疾病进展，如胆碱酯酶抑制剂(增加脑内神经递质乙酰胆碱的量，促进细胞间信号传导)、NMDA受体拮抗剂(改变脑细胞信号传导)，但是这些药物的疗效依然不够好，特别对中重度AD患者，依然未能满足患者的临床需求。此外，一些药物尽管有时能延缓一些患者的智力衰退，但可引起严重副作用。因此，病人需要更有效的药物。
[0005]近年来以Aβ为药物靶点治疗AD的研究取得了较大进展，2021年6月7日，美国食品药品监督管理局(FDA)宣布批准渤健(Biogen)公司研发的阿尔茨海默症新药阿杜那单抗(Aducanumab，商品名Aduhelm)上市。阿杜那单抗代表了首个被批准用于阿尔茨海默病的治疗方法，其最常见的不良反应(至少比安慰剂发生率高10%)：ARIA水肿、头痛、ARIA
‑
H微出血、ARIA
‑
H表面铁沉积症和跌倒。
[0006]有研究表明，从脑中除去Aβ而设计的免疫治疗已在AD的动物模型中产生了阳性结果，因此针对Aβ蛋白的检测对于AD的诊断、干预及治疗有重要意义。
[0007]因此，开发Aβ(特别是Aβ1~42肽和/或Aβ1~40肽)靶向抗体对于AD的实验室研究和临床诊断都具有一定的意义。

技术实现思路

[0008]第一方面，本申请提供了产生特异性结合β
‑
淀粉样蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其以保藏号CGMCC No. 45043保藏。
[0009]在第一方面的一些实施方案中，所述杂交瘤细胞株被命名为7D10
‑
1E6。
[0010]在第一方面的一些实施方案中，所述杂交瘤细胞株为小鼠杂交瘤细胞株，例如Balb/c小鼠杂交瘤细胞株。
[0011]在第一方面的一些实施方案中，所述单克隆抗体特异性结合于灵长类动物β
‑
淀粉样蛋白。在第一方面的一些具体实施方案中，所述单克隆抗体特异性结合于人β
‑
淀粉样蛋白。
[0012]在第一方面的一些实施方案中，所述单克隆抗体特异性结合于人β
‑
淀粉样蛋白的Aβ1~40亚型或Aβ1~42亚型。在第一方面的一些具体实施方案中，所述单克隆抗体特异性结合于人β
‑
淀粉样蛋白的Aβ1~42亚型。
[0013]在第一方面的一些实施方案中，所述单克隆抗体包含选自IgG1亚型、IgG2亚型或IgG4亚型的重链恒定区。
[0014]在第一方面的一些实施方案中，所述单克隆抗体包含选自κ亚型或者λ亚型的轻链恒定区。
[0015]在第一方面的一些实施方案中，其中所述单克隆抗体的EC
50
值不超过100 pM。
[0016]第二方面，本申请提供了特异性结合β
‑
淀粉样蛋白的单克隆抗体，其由第一方面所述的杂交瘤细胞株产生。
[0017]第三方面，本申请提供了产生第二方面所述的单克隆抗体的方法，其包括培养第一方面所述的杂交瘤细胞株。
[0018]在第三方面的一些实施方案中，所述方法还包括纯化所述单克隆抗体的步骤。
[0019]第四方面，本申请提供了第一方面所述的杂交瘤细胞株或第二方面所述的单克隆抗体在制备用于检测β
‑
淀粉样蛋白和/或用于诊断阿尔兹海默症的产品中的用途。
附图说明
[0020]图1显示了由杂交瘤细胞株7D10
‑
1E6产生的单克隆抗体的EC
50
值测定曲线。
[0021]图2显示了由杂交瘤细胞株7D10
‑
1E6产生的单克隆抗体的亚型检测结果。
具体实施方式
[0022]人体内Aβ最常见的亚型是Aβ1~40和Aβ1~42，在人脑脊液和血中，Aβ1~40分别比Aβ1~42的含量水平高10倍和1.5倍，Aβ1~42具有更强的毒性，且更容易聚集，从而形成Aβ沉淀的核心，引发神经毒性作用。在病理条件下，AD患者脑内Aβ的产生是正常情况下的4~10倍，大量的Aβ聚集形成的神经炎性斑(老年斑)，老年斑的形成导致海马内大量细胞的死亡，这说明延长的两个氨基酸不仅增加了Aβ的疏水性，使其更容易聚集，而且提高了聚集物的稳定性，早期即可选择性地在淀粉样斑块中沉积。
[0023]在AD患者中，在脑脊液(CSF)中会出现Aβ浓度的变化，其病理变化依次是脑Aβ积聚、CSF增加、海马和灰质体积减少、葡萄糖代谢减少、记忆障碍和痴呆。Aβ可由多种细胞产生，循环于血液、脑脊液和脑间质液中，大多与伴侣蛋白分子结合，少数以游离状态存在。Aβ不仅在脑细胞中表达，也能够在神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞中表达，还会在外周器官和组织如肝、肾、胰腺、脾等脏器及各种血液和内皮细胞中表达。
[0024]Aβ抗体可使体外聚集状的Aβ解聚，从而降低其毒性作用，用Aβ抗体治疗转基因AD小鼠，不但能减少模型鼠脑内的老年斑的数量，也可以改善其学习记忆能力，因此制备和应
用针对Aβ及其不同片段的抗体将会对于相关疾病的诊断、治疗以及研究都会有积极的影响。
[0025]本申请提供了产生特异性结合β
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淀粉样蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。所述杂交瘤细胞株能够产生特异性结合β
‑
淀粉样蛋白的单克隆抗体。在优选实施方案中，本申请的杂交瘤细胞株产生的特异性结合β
‑
淀粉样蛋白的单克隆抗体具有pM级别的EC
50<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.产生特异性结合β
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淀粉样蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其以保藏编号CGMCC No. 45043保藏。2.如权利要求1所述的杂交瘤细胞株，其中所述单克隆抗体特异性结合于灵长类动物β
‑
淀粉样蛋白。3.如权利要求2所述的杂交瘤细胞株，其中所述单克隆抗体特异性结合于人β
‑
淀粉样蛋白。4.如权利要求3所述的杂交瘤细胞株，其中所述人β
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淀粉样蛋白为人Aβ1~40亚型或人Aβ1~42亚型。5.如权利要求1所述的杂交瘤细胞株，其中所述单克隆抗体包含选自IgG1亚型、IgG2亚型或IgG4亚型的重链恒定区；和/或所述单克隆抗体包含选自κ亚型或者λ亚型的轻链恒...

【专利技术属性】
技术研发人员：张博文，康志云，王怡，郑新越，杨志云，李晓英，王月丹，王铁山，
申请(专利权)人：北京第一生物化学药业有限公司，
类型：发明
国别省市：