一种血清1型马立克病病毒pp38单克隆抗体的制备方法及应用技术

本发明专利技术属于基因编辑技术在动物免疫学技术领域中的新应用，公开了一种基于CRISPR/Cas9基因编辑技术筛选和鉴定抗血清1型马立克病病毒特异性pp38蛋白单克隆抗体的方法及应用。其中抗MDV

【技术实现步骤摘要】
一种血清1型马立克病病毒pp38单克隆抗体的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及一种基于CRISPR/Cas9基因编辑技术构建血清1型马立克病病毒MDV
‑
1特异性pp38基因编辑缺失毒株，进行MDV
‑
1特异性pp38蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选、鉴定、单克隆抗体制备及应用，属于基因工程


技术介绍

[0002]鸡马立克病(Marek
’
s disease，MD)是由马立克病病毒(Marek
’
s disease virus，MDV)早期感染雏鸡引发的一种最重要的免疫抑制病及肿瘤病。主要特征是外周神经、内脏器官(性腺、肝、脾、肺、肾、腺胃、肠道等)、虹膜、肌肉及皮肤内发生淋巴样细胞浸润，并最终发展成为淋巴瘤。MDV可经空气传播，传染能力强，最终会诱发宿主产生内脏肿瘤和大批死亡，对全球养禽业年均导致约10
‑
20亿美元的巨大经济损失，加上MDV感染宿主后产生免疫抑制导致临床疫苗免疫预防效果不佳而产生间接影响，经济损失无法估量。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分泌抗血清1型马立克病病毒pp38蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，其特征在于，所述单克隆抗体杂交瘤细胞株为鼠源单克隆抗体杂交瘤细胞株pp38
‑
31G7，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23025。2.一种抗血清1型马立克病病毒pp38蛋白的单克隆抗体31G7，其特征在于，所述单克隆抗体31G7是由权利要求1所述鼠源单克隆抗体杂交瘤细胞株pp38
‑
31G7所分泌；所述单克隆抗体31G7的轻链为Kappa型，亚型为IgG1。3.如权利要求2所述的单克隆抗体31G7，其特征在于，所述单克隆抗体31G7的重链可变区核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.如权利要求2所述的单克隆抗体31G7，其特征在于，所述单克隆抗体31G7的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。5.如权利要求2所述的单克隆抗体31G7的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用血清1型马立克病病毒超强毒株GX0101感染鸡胚成纤维细胞CEF，随后提取病毒感染CEF的细胞浆蛋白，以所述细胞浆蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠，利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞，筛选培养上清阳性的杂交瘤细胞，结合2～3轮亚克隆，筛选并构建特异针对病毒蛋白的杂交瘤细胞株和单克隆抗体库；(2)利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建血清1型马立克病病毒特异性pp38基因编辑缺失的毒株GX0101Δpp38；(3)利用间接免疫荧光实验IFA，以野生型亲本毒株GX0101和突变型基因编辑缺失毒株GX0101Δpp38，对步骤(1)所得杂交瘤细胞株和单克隆抗体库进行差异筛选和交叉鉴定，即得。6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)免疫原的制备方法为：将GX0101接种于单层鸡胚成纤维细胞CEF，置37℃、5％(v/v)CO2培养箱中培养3
‑
4d；出现典型病毒噬斑后，收集细胞，以1000rpm的速度离心10min，收集细胞沉淀，提取病毒感...

【专利技术属性】
技术研发人员：滕蔓，罗俊，罗琴，张改平，郑鹿平，刘金玲，卢清侠，柴书军，赵东，程娜，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：