一种抗SARS-CoV-2广谱中和性单克隆抗体及其杂交瘤细胞株、检测试剂盒和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗SARS

A broad-spectrum neutralizing monoclonal antibody against sars-cov-2 and its hybridoma cell line, detection kit and Application

【技术实现步骤摘要】
一种抗SARS
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CoV
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2广谱中和性单克隆抗体及其杂交瘤细胞株、检测试剂盒和应用


[0001]本专利技术属于病毒检测
，具体涉及一种抗SARS
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CoV
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2广谱中和性单克隆抗体及其杂交瘤细胞株、检测试剂盒和应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒SARS
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CoV
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2是一种能够引起人与动物肺炎的致病病毒。SARS
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CoV
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2的S蛋白分为两个亚基：S1和S2。S1亚基通过受体结合域(RBD)与细胞受体血管紧张素转换酶2(ACE2)结合，而S2亚基通过融合肽(FP)介导病毒与细胞膜的融合。与S1不同，S2具有高度的保守性，由于其在病毒感染靶细胞的融合过程中发挥重要作用，使其可以作为广谱保护的靶点。SARS
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CoV
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2具有较强的突变性，免疫逃逸突变体频繁涌现，其中S蛋白(包括RBD和NTD区域)上的突变不仅影响病毒的传播性和致病力，还会对针对相应靶点的单克隆抗体的中和活性产生较大的影响，极易导致免疫逃逸发生。这无疑给当下针对具有免疫优势的RBD的新冠疫苗及被动治疗策略带了挑战。
[0003]然而，目前尚无针对所有谱系SARS
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CoV
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2均有抑制效果的广谱中和性单克隆抗体。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种抗SARS
‑<br/>CoV
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2广谱中和性单克隆抗体及其杂交瘤细胞株、检测试剂盒和应用，为野生型SARS
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CoV
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2及各类变体的诊断与治疗提供了可能。
[0005]本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株CoV2
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S2
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G5，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCCNO：C202293。
[0006]本专利技术提供了一种抗SARS
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CoV
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2广谱中和性单克隆抗体G5，由所述杂交瘤细胞株CoV2
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S2
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G5分泌得到。
[0007]本专利技术提供了所述抗SARS
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CoV
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2广谱中和性单克隆抗体在制备以下至少一种产品中的应用，所述产品包括诊断或检测SARS
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CoV
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2病毒的试剂盒、预防或治疗由新冠病毒感染引起的疾病的药物和疫苗筛选用试剂。
[0008]优选的，所述SARS
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CoV
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2病毒包括野生型SARS
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CoV
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2病毒株和/或SARS
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CoV
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2病毒突变株。
[0009]优选的，所述SARS
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CoV
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2病毒突变株包括以下一种或多种：南非毒株、德尔塔毒株和奥密克戎毒株。
[0010]优选的，所述产品基于以下一种或多种技术检测：ELISA技术、Western blot技术、IFA技术和胶体金免疫检测技术。
[0011]优选的，所述抗SARS
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2广谱中和性单克隆抗体联合新冠病毒SARS
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CoV
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2广谱多肽抗原制备产品，所述广谱多肽抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0012]本专利技术提供了一种广谱中和SARS
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CoV
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2病毒的药品，包括所述单克隆抗体G5和医学上可接受的辅料。
[0013]本专利技术提供了一种基于免疫反应的新冠肺炎诊断用试剂盒，包括所述单克隆抗体G5和检测试剂。
[0014]本专利技术提供了一种SARS
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CoV
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2病毒疫苗筛选用试剂，包括所述单克隆抗体G5和辅料。
[0015]本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株CoV2
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G5，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO：C202293。本专利技术使用抗原性较好的SARS
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2S基因S2段多肽免疫动物，经细胞融合，筛选获得一株稳定分泌特异性好、效价高的单克隆抗体的杂交瘤细胞株CoV2
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S2
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G5，并通过腹水制备及纯化，获得大量抗SARS
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2S蛋白的单克隆抗体G5。与现有技术相比，本专利技术的有益技术效果在于：1)本专利技术的单克隆抗体是由单个细胞株产生，具有高度特异性、均一性等特性，单抗纯度高、特异性强、能持续无限的供应，在免疫检测中具有更广泛的研究应用价值和商业使用价值。2)本专利技术的单克隆抗体具有较强的反应性，在IFA、Western blot以及ELISA中与SARS
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CoV
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2的S蛋白反应性良好，可用于SARS
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2的检测。3、本专利技术的单克隆抗体能有效中和SARS
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2野生株与多种重要变体(包括南非株、德尔塔及奥密克戎)的S蛋白假病毒。因此，本专利技术不仅为建立针对新冠病毒相关抗原广谱检测方法提供了特异性单克隆抗体，还为开发新冠病毒广谱被动治疗药物提供了候选。
附图说明
[0016]图1为免疫沉淀试验检测4株单克隆抗体对SARS
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CoV
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2S蛋白的结合能力，泳道1：单抗B10，泳道2：单抗C10，泳道3：单抗G5，泳道4：单抗E2，泳道5：同种型抗体对照；
[0017]图2为ELISA法检测单克隆抗体G5小鼠腹水效价；
[0018]图3为SDS
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PAGE鉴定单克隆抗体G5亲和层析纯化结果；
[0019]图4为Westernblot鉴定单克隆抗体G5与SARS
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CoV
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2S蛋白的反应性；
[0020]图5为IFA鉴定单克隆抗体G5与SARS
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2S蛋白的反应性；
[0021]图6为单克隆抗体G5有效中和SARS
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CoV
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2野生型及三种重要变体的S蛋白假病毒。
[0022]生物材料保藏信息
[0023]杂交瘤细胞株，保藏于中国典型培养物保藏中心，单位简称为CCTCC，地址为中国武汉，武汉大学，保藏时间为2022年04月09日。保藏编号为CCTCCNO：C202293，细胞株编号为CoV2
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S2
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G5。
具体实施方式
[0024]本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株CoV2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株CoV2
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S2
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G5，其特征在于，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO：C202293。2.一种抗SARS
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CoV
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2广谱中和性单克隆抗体G5，其特征在于，由权利要求1所述杂交瘤细胞株CoV2
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S2
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G5分泌得到。3.权利要求2所述抗SARS
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CoV
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2广谱中和性单克隆抗体在制备以下至少一种产品中的应用，所述产品包括诊断或检测SARS
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CoV
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2病毒的试剂盒、预防或治疗由新冠病毒感染引起的疾病的药物和疫苗筛选用试剂。4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述SARS
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2病毒包括野生型SARS
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2病毒株和/或SARS
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2病毒突变株。5.根据权利要求4所述应用，...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶建强，阚秋琪，李拓凡，秦爱建，万志敏，邵红霞，谢泉，张雯苑，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：