一株抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，涉及食品安全免疫检测技术领域。本发明专利技术提供的抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株，于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.45115。本发明专利技术提供的细胞株分泌的单克隆抗体对十氯酮具有较好的特异性和检测灵敏度(IC

A hybridoma cell line with monoclonal antibody against chlordecone and its application

【技术实现步骤摘要】
一株抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术涉及食品安全免疫检测
，尤其涉及一株抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

技术介绍

[0002]十氯酮(chlordecone，CLD)又称为开蓬(Kepone)，是一种人工合成的有机氯杀虫剂。十氯酮因其难溶于水，有很强的疏水性，特别易于富集在生物体中，并且难以进行化学和生物降解，以及具有长距离跨界迁移的可能性，可以在环境中持久存在具有持久性有机污染物(POPs)的特性已被禁用。十氯酮曾广泛用于控制香蕉根蛀虫.它还用于苍蝇幼虫杀虫剂、杀菌剂、控制马铃薯甲虫、锈螨、马铃薯和烟草切根虫以及用于蚂蚁和蟑螂诱剂中，十氯酮是一种毒性较高的有机物，对胎儿中枢神经系统、泌尿生殖系统、免疫系统有一定影响。十氯酮可影响人体神经系统，使人体产生颤抖、体重下降、眼球痉挛、肋膜炎、关节痛、肝肿大和精子减少等症状。人体和动物的实验研究表明，十氯酮被吸收后，主要富集在肝脏，通过胆汁缓慢代谢，经过粪便排出体外，十氯酮对大鼠和小鼠有明显的致癌性，能使肝脏等其它器官产生恶性肿瘤.由于人类和老鼠都是哺乳类动物，有理由认为十氯酮对人体有可能的致癌性。因此，建立快速有效的检测十氯酮含量的方法具有重要意义及市场价值。
[0003]针对十氯酮的高效灵敏的检测方法是亟待解决的问题。目前的检测方法包括仪器分析法和免疫分析法。仪器分析法如高效液相色谱法(王荟,彭英,穆肃,等.气相色谱
‑
串联质谱法测定土壤中十氯酮[J].中国环境监测,2015(5)：129/>‑
133；Saint
‑
Hilaire M,Inthavong C,Bertin T,Lavison
‑
Bompard G,Gu
é
rin T,Fournier A,Feidt C,Rychen G,Parinet J.Development and validation of an HPLC
‑
MS/MS method with QuEChERS extraction using isotopic dilution to simultaneously analyze chlordecone and chlordecol in animal livers.Food Chem.2018,30；252：147
‑
153.)、气相色谱串联质谱法(Martin
‑
Laurent F,Sahnoun MM,Merlin C,Vollmer G,L
ü
bke M.Detection and quantification of chlordecone in contaminated soils from the French West Indies by GC
‑
MS using the 13C10
‑
chlordecone stable isotope as a tracer[J].Environ Sci Pollut Res Int.2014,21(7)：4928
‑
4933；ALAIN SOLER,MARC LEBRUN,YOAN LABROUSSE,et al.Solid
‑
phase microextraction and gas chromatography
‑
mass spectrometry for quantitative determination of chlordecone in water,plant and soil samples[J].Fruits,2014(4)：325
‑
339)。由于对样品前处理繁琐，干扰物较多及仪器工作条件的限制，同时对操作人员的技术要求较高，因此仪器方法并不适用于现场检测。
[0004]免疫分析方法相对于仪器检测方法，具有低成本、高通量、高灵敏、对技术人员要求低等特点，因此适用于大量样品的快速筛查。因此免疫检方法对十氯酮的检测具有重要意义。
[0005]酶联免疫法(ELISA)是一种低成本、快速且便携的免疫学检测方法，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测出结果。建立高效的免疫
学检测方法，筛选高特异性的单克隆抗体是其重要前提。

技术实现思路

[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一株抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。由该杂交瘤细胞株分泌的抗体针对十氯酮具有较高的检测灵敏度，可以用来建立针对十氯酮的免疫学检测方法。
[0007]本专利技术的第一个目的是提供一株抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述的杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.45115，本专利技术所得的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株。
[0008]本专利技术的第二个目的是提供一株抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：
[0009]S1、将克来范溶于有机溶剂，加入碱性溶液加热至70
‑
90℃搅拌反应0.5
‑
2h，用酸性溶液调节pH至4
‑
5，得到十氯酮半抗原；
[0010]S2、使用S1中所述十氯酮半抗原制备十氯酮完全抗原，将所得的十氯酮完全抗原制备成含抗原弗氏完全佐剂与含抗原弗氏不完全佐剂；
[0011]S3、对免疫动物进行首次免疫、加强免疫和冲刺免疫，首次免疫采用S2中所述含抗原弗氏完全佐剂，加强免疫采用S2中所述含抗原弗氏不完全佐剂，冲刺免疫采用S2中所述十氯酮完全抗原；
[0012]S4、取S3中冲刺免疫后的免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合，得到所述抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0013]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，还包括萃取、纯化和干燥步骤。
[0014]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，所述有机溶剂为二甲亚砜、甲醇和四氢呋喃中的一种或多种。
[0015]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，所述碱性溶液中的碱性溶剂为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
[0016]在本专利技术的一个实施例中，所述克来范和碱性溶剂的物质的量比为1：1
‑
3。
[0017]在本专利技术的一个实施例中，所述克来范和碱性溶剂的物质的量比为1：2。
[0018]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，所述有机溶剂中克来范的浓度为0.01
‑
0.05g/mL。
[0019]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，所述有机溶剂中克来范的浓度为0.02g/mL。
[0020]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，所述酸性溶液为盐酸溶液。
[0021]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，所述十氯酮半抗原结构式如下：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述的杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.45115，本发明所得的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株。2.一株抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：S1、将克来范溶于有机溶剂，加入碱性溶液加热至70
‑
90℃搅拌反应0.5
‑
2h，用酸性溶液调节pH至4
‑
5，得到十氯酮半抗原；S2、使用S1中所述十氯酮半抗原制备十氯酮完全抗原，将所得的十氯酮完全抗原制备成含抗原弗氏完全佐剂与含抗原弗氏不完全佐剂；S3、对免疫动物进行首次免疫、加强免疫和冲刺免疫，首次免疫采用S2中所述含抗原弗氏完全佐剂，加强免疫采用S2中所述含抗原弗氏不完全佐剂，冲刺免疫采用S2中所述十氯酮完全抗原；S4、取S3中冲刺免疫后的免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合，得到所述抗十氯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在S1中，所述十氯酮半抗原结构式如下：4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥传来，姚静静，匡华，徐丽广，孙茂忠，吴晓玲，刘丽强，马伟，朱建平，郝昌龙，宋珊珊，吴爱红，郭玲玲，胥欣欣，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：