一株11-α羟孕酮单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株11

【技术实现步骤摘要】
一株11
‑
α
羟孕酮单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，尤其涉及一株11
‑
α羟孕酮单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。

技术介绍

[0002]孕激素是由卵巢黄体分泌的一种类固醇激素，又称孕酮，作为血压调节器和抗雄激素非常重要。其中，孕酮衍生物11
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α
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和11
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β
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羟孕酮在体外是11
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β
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羟类固醇脱氢酶亚型2的有效抑制剂。为了评估11
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α
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和11
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β
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羟孕酮是否具有血压调节作用，有研究发现将其连续14天注入完整的和肾上腺切除的Sprague
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Dawley大鼠体内，11
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α
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和11
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β
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羟孕酮均在3天内导致大鼠血压显著升高，并且这种效应持续14天。这些结果表明，11
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α
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和11
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β
‑
羟孕酮在大鼠体内均具有潜在的致高血压作用。此外，还有报道显示，11
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α
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羟孕酮在前列腺癌组织中高水平存在。不过只有全面分析C11α
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羟基代谢物水平，才能全面评估11
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α
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羟孕酮及其代谢物对人类病理生理学的潜在影响。虽然11
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α
‑
羟孕酮在生理和病理生理状态下均可被检测到，但是11
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α
‑
羟孕酮的生物合成和代谢至今仍不清楚，11α
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羟化酶(一种被认为与11
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α
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羟孕酮生物合成有关的酶)也尚未在人体组织中被发现。因此，建立一种快速、高效的11
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α羟孕酮的监测方法对于研究11
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α
‑
羟孕酮的生物合成和代谢是十分必要的。
[0003]目前11
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α羟孕酮含量分析方法有高效液相色谱法(HPLC)、液质联用(LC
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MS)等仪器方法。然而，这些检测方法具有耗时长、步骤繁琐、成本高等缺点。因此建立快速简便的11
‑
α羟孕酮检测方法具有重要意义。酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，适用于大量样本的现场快速检测，为11
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α羟孕酮检测提供了一种新的检测途径。

技术实现思路

[0004]为此，本专利技术所要解决的技术问题在于克服现有技术中11
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α羟孕酮含量分析方法耗时长、步骤繁琐、成本高等。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一株11
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α羟孕酮单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。通过将11
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α羟孕酮完全抗原免疫动物，通过细胞融合，HAT选择性培养基培养，并通过ic
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ELISA筛选细胞上清，最终得到了对11
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α羟孕酮有较好特异性和灵敏度的单克隆抗体杂交瘤细胞株。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一株11
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α羟孕酮单克隆抗体杂交瘤细胞株，所述的杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45112，本专利技术所得的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供一株11
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α羟孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤，
[0008]S1、将11
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α羟孕酮溶于溶液中，加入羧甲基羟胺半盐酸盐，60
‑
70℃搅拌1
‑
3h，静置8
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14h，得到11
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α羟孕酮半抗原；
[0009]S2、使用S1中所述11
‑
α羟孕酮半抗原制备11
‑
α羟孕酮完全抗原，将所得的11
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α羟孕酮完全抗原制备成含抗原弗氏完全佐剂与含抗原弗氏不完全佐剂；
[0010]S3、对免疫动物进行首次免疫、加强免疫和冲刺免疫，首次免疫采用S2中所述含抗原弗氏完全佐剂，加强免疫采用S2中所述含抗原弗氏不完全佐剂，冲刺免疫采用S2中所述11
‑
α羟孕酮完全抗原；
[0011]S4、取S3中冲刺免疫后的免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合，得到所述抗11
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α羟孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0012]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，还包括通过氮气吹干，重悬于1mL三氯甲烷中，并用超纯水萃取三次。收集有机相，再次氮气吹干，终产物溶于中1mL无水N,N
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二甲基甲酰胺(DMF)中。
[0013]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，所述溶液的溶剂为甲醇和/或吡啶。
[0014]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，所述溶液为甲醇、水和吡啶的混合溶液；所述甲醇：水：吡啶的体积比为4：1：1。
[0015]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，所述11
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α羟孕酮、羧甲基羟胺半盐酸盐的摩尔比为1：1
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2。
[0016]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，所述11
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α羟孕酮半抗原选自以下结构：
[0017][0018]在本专利技术的一个实施例中，在S1中，称取10mg 11
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α羟孕酮，溶解于0.6mL甲醇：水：吡啶(4：1：1)溶液中，加入4mg羧甲基羟胺半盐酸盐(Carboxymethoxylamine hemihydrochloride，CMO)，65℃水浴搅拌2h，室温避光静置过夜。随后，溶液通过氮气氮吹干，重悬于1mL三氯甲烷中，并用超纯水取三次。收集有机相，再次氮吹吹干，终产物溶于中1mL无水N,N
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二甲基甲酰胺(DMF)中，即11
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α羟孕酮半抗原。
[0019]在本专利技术的一个实施例中，在S2中，所述11
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α羟孕酮完全抗原由所述11
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α羟孕酮半抗原活化后与载体蛋白偶联得到。
[0020]在本专利技术的一个实施例中，在S2中，所述11
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α羟孕酮完全抗原的制备方法包括如下步骤，将所述11
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α羟孕酮半抗原、N
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羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1
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乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于溶剂中，反应得到混合液，后将混合液加入到载体蛋白溶液中进行反应，得到所述11
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α羟本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株11
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α羟孕酮单克隆抗体杂交瘤细胞株，其特征在于，所述的杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45112，本发明所得的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株。2.一株11
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α羟孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤，S1、将11
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α羟孕酮溶于溶液中，加入羧甲基羟胺半盐酸盐，60
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70℃搅拌1
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3h，静置8
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14h，得到11
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α羟孕酮半抗原；S2、使用S1中所述11
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α羟孕酮半抗原制备11
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α羟孕酮完全抗原，将所得的11
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α羟孕酮完全抗原制备成含抗原弗氏完全佐剂与含抗原弗氏不完全佐剂；S3、对免疫动物进行首次免疫、加强免疫和冲刺免疫，首次免疫采用S2中所述含抗原弗氏完全佐剂，加强免疫采用S2中所述含抗原弗氏不完全佐剂，冲刺免疫采用S2中所述11
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α羟孕酮完全抗原；S4、取S3中冲刺免疫后的免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合，得到所述抗11
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α羟孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在S1中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥传来，姜晓倩，匡华，徐丽广，孙茂忠，吴晓玲，刘丽强，马伟，朱建平，郝昌龙，宋珊珊，胡拥明，吴爱红，郭玲玲，胥欣欣，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：