小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株、抗体、抗体组合物及试剂盒制造技术

技术编号:34355406 阅读:16 留言:0更新日期:2022-07-31 06:29
本发明专利技术提供了一种小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株、抗体、抗体组合物及试剂盒。其中,小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株为2H10,保藏号为CCTCC NO:C202234;或者杂交瘤细胞株为7H10,保藏号为CCTCC NO:C202245。通过筛选两株抗人IgG单抗杂交瘤细胞株,获得了两个新的抗人IgG的抗体,具有较高的特异性,因而适合用于人IgG含量的检测中。且当将这两个抗体制备成双抗体夹心法检测试剂盒时,不仅能够提高检测特异性和准确性,而且相比其他检测方法,也具有高效、快速及通量高的优势。快速及通量高的优势。快速及通量高的优势。

【技术实现步骤摘要】
小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株、抗体、抗体组合物及试剂盒


[0001]本专利技术涉及免疫学检测方法领域,具体而言,涉及一种小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株、抗体、抗体组合物及试剂盒。

技术介绍

[0002]IgG是由四条肽链组成的蛋白复合物:两条相同的重链和两条相同的轻链排列而成的一个Y 型抗体单体。每个 IgG 都有 2 个抗原结合位点。IgG 是唯一能够通过人类胎盘的免疫球蛋白,从而给子宫内的胎儿提供保护。IgG是机体免疫细胞识别抗原后合成并分泌的,在血液中含量很高,占血液中免疫球蛋白的75%左右。免疫球蛋白含量的高低与许多疾病有密切的联系(如含量升高常见于各种慢性感染、肺结核、慢性肝病及自身免疫性疾病如类风湿性关节炎等;而在肾病、免疫缺陷综合征、蛋白丢失性肠病、慢性淋巴细胞白血病等情况下,IgG含量会降低)。血液制品、科学实验、临床诊断中,快速、准确的检测人血清中IgG的含量都有很大的参考价值。从献血者的血浆中提取的 IgG 抗体可用作静脉注射免疫球蛋白,来治疗免疫缺陷、自身免疫性疾病和感染性疾病。
[0003]目前常用的IgG测定方法是免疫比浊法,免疫比浊法是利用抗原和抗体可以特异性结合的性质,在液相中产生一定大小的复合物,形成光的折射或吸收,测定折射或吸收后的透射光或散射光推算出其中的含量。其缺点有:需要样本量较多,关键试剂使用量较多(抗人IgG血清);大批量检测困难,操作复杂,且需要特定的分析仪器;实验重复性较差;液体中形成的复合物分子不够稳定,要足够大足够多才能有较为准确的读值,在样本含量低时准确度会很差;所使用的缓冲体系中还需要用到叠氮钠危险品。紫外

分光光度法测定IgG含量也有上述缺点。
[0004]其他的检测方法还有免疫扩散实验,其缺点是实验操作影响因素多,检测时间长,灵敏度差,适合于粗略估计样本中的含量;HPLC及毛细管电泳法,其缺点是需要专门的仪器和经验丰富的人员操作,仪器价格昂贵。
[0005]因此,仍需要提供一种新的检测人IgG含量的方法,以提高检测的便利性及准确性。

技术实现思路

[0006]本专利技术的主要目的在于提供一种小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株、抗体、抗体组合物及试剂盒,以解决现有技术中的检测繁琐或准确性低或检测通量低的问题。
[0007]为了实现上述目的,根据本专利技术的一个方面,提供了一种小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株,杂交瘤细胞株的分类命名为小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株2H10,保藏编号为CCTCC NO:C202234,保藏日期为2022年3月1日,保藏单位为中国典型培养物保藏中心,保藏地址为中国武汉武汉大学;或者杂交瘤细胞株的分类命名为小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株7H10,保藏编号为CCTCC NO:C202245,保藏日期为2022年3月1日,保藏单位为中国典型培养物保藏中心,保藏地址为中国武汉武汉大学。
[0008]根据本专利技术的第二方面,提供了一种抗人IgG抗体,抗人IgG抗体的轻链和重链可变区氨基酸序列分别为:SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4,或者为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
[0009]进一步地,抗人IgG抗体为上述的抗人IgG单抗杂交瘤细胞株产生的;优选地,抗人IgG抗体为固相载体包被抗体或为检测标记所标记的抗体;优选地,固相载体选自酶标板、微球、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜或尼龙膜;优选地,检测标记为酶标记、生物素标记或荧光素标记;优选地,酶标记选自如下任意一种:HRP、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β

半乳糖苷酶、溶菌酶及苹果酸脱氢酶。
[0010]根据本专利技术的第三方面,提供了一种抗人IgG抗体组合,组合包括抗人IgG抗体1和抗人IgG抗体2,抗人IgG抗体1的轻链和重链可变区氨基酸序列分别为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4,抗人IgG抗体2的轻链和重链可变区氨基酸序列分别为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
[0011]进一步地,抗人IgG抗体1和抗人IgG抗体2均来源于杂交瘤细胞株,其中,抗人IgG抗体1的杂交瘤细胞株的分类命名为小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株7H10,保藏编号为CCTCC NO:C202245,保藏日期为2022年3月1日,保藏单位为中国典型培养物保藏中心,保藏地址为中国武汉武汉大学;抗人IgG抗体2的杂交瘤细胞株的分类命名为小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株2H10,保藏编号为CCTCC NO:C202234,保藏日期为2022年3月1日,保藏单位为中国典型培养物保藏中心,保藏地址为中国武汉武汉大学;优选地,抗人IgG抗体1包被于固相载体上,抗人IgG抗体2为带有检测标记的抗体;优选地,固相载体选自酶标板、微球、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜或尼龙膜;优选地,检测标记为酶标记、生物素标记或荧光素标记;优选地,酶标记选自如下任意一种:HRP、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β

半乳糖苷酶、溶菌酶及苹果酸脱氢酶。
[0012]根据本专利技术的第四方面,提供了一种人IgG含量检测试剂盒,试剂盒包括上述抗人IgG单抗杂交瘤细胞株,或上述的抗人IgG抗体,或者上述抗人IgG抗体组合。
[0013]进一步地,试剂盒选自酶联免疫检测试剂盒、荧光免疫检测试剂盒或化学发光免疫检测试剂盒。
[0014]进一步地,试剂盒为双抗体夹心法免疫检测试剂盒。
[0015]根据本专利技术的第五方面,提供了一种人IgG含量检测方法,检测方法包括:利用上述任一种试剂盒进行检测。
[0016]根据本专利技术的第六方面,提供了一种基因,该基因编码前述抗人IgG抗体,当抗人IgG抗体的轻链可变区和重链可变区氨基酸序列分别为:SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4时,编码轻链可变区的基因的序列为SEQ ID NO:1,编码重链可变区的基因的序列为SEQ ID NO:2;当抗人IgG抗体的轻链可变区和重链可变区氨基酸序列分别为:SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8时,编码轻链可变区的基因的序列为SEQ ID NO:5,编码重链可变区的基因的序列为SEQ ID NO:6。
[0017]应用本专利技术的技术方案,通过筛选两株抗人IgG单抗杂交瘤细胞株,获得了两个新的抗人IgG的抗体,具有较高的特异性,因而适合用于人IgG含量的检测。且当将这两个抗体制备成双抗体夹心法检测试剂盒时,不仅能够提高检测特异性和准确性,而且相比其他检测方法,也具有高效、快速及通量高的优势。
附图说明
[0018]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解,本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术,并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中:图1示出了根据本专利技术的实施例一制备得到抗体的电泳检测结果图。
[0019]图2示出了本专利技术的实施例二中通过双抗夹心ELISA的方法建立的标准曲线。
[0020]菌种保藏说明分类命名为小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株2H10,保藏编号为CCT本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株,其特征在于,所述杂交瘤细胞株的分类命名为小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株2H10,保藏编号为CCTCC NO:C202234,保藏日期为2022年3月1日,保藏单位为中国典型培养物保藏中心,保藏地址为中国武汉武汉大学;或者所述杂交瘤细胞株的分类命名为小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株7H10,保藏编号为CCTCC NO:C202245,保藏日期为2022年3月1日,保藏单位为中国典型培养物保藏中心,保藏地址为中国武汉武汉大学。2.一种抗人IgG抗体,其特征在于,所述抗人IgG抗体的轻链和重链可变区氨基酸序列分别为:SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4,或者为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。3.根据权利要求2所述的抗人IgG抗体,其特征在于,所述抗人IgG抗体为权利要求1所述的小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株产生的。4.根据权利要求3所述的抗人IgG抗体,其特征在于,所述抗人IgG抗体为固相载体包被抗体或为检测标记所标记的抗体。5.根据权利要求4所述的抗人IgG抗体,其特征在于,所述固相载体选自酶标板、微球、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜或尼龙膜。6.根据权利要求4所述的抗人IgG抗体,其特征在于,所述检测标记为酶标记、生物素标记或荧光素标记。7.根据权利要求6所述的抗人IgG抗体,其特征在于,所述酶标记选自如下任意一种:HRP、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β

半乳糖苷酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶。8.一种抗人IgG抗体组合,其特征在于,所述组合包括抗人IgG抗体1和抗人IgG抗体2,所述抗人IgG抗体1的轻链和重链可变区氨基酸序列分别为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4,所述抗人IgG抗体2的轻链和重链可变区氨基酸序列分别为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。9.根据权利要求8所述的抗人IgG抗体组合,其特征在于,所述抗人IgG抗体1和所述抗人IgG抗体2均来源于杂交瘤细胞株,其中,所述抗人IgG抗体1的所述杂交瘤细胞株的分类命名为小鼠抗人IgG单抗杂交瘤细胞株7H10,保藏编号为CCTCC NO:C202245,保藏日期为2022年3月1日,保藏单位为中国典型培养...

【专利技术属性】
技术研发人员:陈新新苑晓松潘悦路轲马玉岭
申请(专利权)人:北京索莱宝科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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