CD47结合分子及其用途制造技术

本申请提供了一种分离的CD47结合分子、编码所述CD47结合分子的核酸以及包含所述核酸的表达载体或宿主细胞、以及包含所述CD47结合分子的药物或试剂盒。所述CD47结合分子包含SEQ ID NO：10

【技术实现步骤摘要】
CD47结合分子及其用途


[0001]本申请属于生物
，一般而言涉及分离的CD47结合分子及其用途。更具体地，本申请涉及一种分离的特异性结合CD47的抗体或其抗原结合片段、编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸以及包含所述核酸的表达载体或宿主细胞、及其相关用途。

技术介绍

[0002]近年来，免疫检查点相关治疗在很多肿瘤上都体现出来惊人的效果，比如PD-1、PD-L1和CTLA-4等，目前免疫治疗已经成为炙手可热的一个领域，有望在将来使“癌症成为一种慢性病”变为现实。但随着对免疫治疗的深入研究，人们发现，除了T细胞上的免疫检查点，巨噬细胞对癌症细胞的吞噬和杀伤也受到免疫检查点的调节，如CD47-SIRPα。
[0003]作为天然免疫系统的一部分，巨噬细胞负责吞噬外来细菌、病毒等病原体和快速扩增的癌细胞，其中对细胞的吞噬受到两个信号的调节，一个是“eat me”的信号，比如，癌症细胞上会表达一些异于正常细胞的钙网蛋白，帮助巨噬细胞识别癌症细胞；另一个是“don
’
t eat me”的信号，比如CD47，当与巨噬细胞上的SIRPα结合之后，其会激活SIRPα下游信号通路，抑制巨噬细胞对靶细胞的吞噬。对于肿瘤细胞，抗体阻断CD47与对应受体SIRPα的结合，即可促进吞噬细胞对癌症细胞的杀伤，然而对于正常细胞，由于没有“eat me”的信号，阻断CD47的抗体不会导致吞噬,因此，CD47被认为是一个充满前景的靶点，针对其开发的抗体药物具有更高的安全性，被称之为第二代免疫检查点分子。
[0004]CD47蛋白是免疫球蛋白Ig超家族的成员，最早是在20世纪80年代首次在人类卵巢癌中发现。之后发现，CD47广泛表达于各种正常组织的表面，而且在一些癌症中呈现出平均三倍于正常细胞的高表达，如急性髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、多发性骨髓瘤(MM)、结直肠癌、膀胱癌、卵巢癌和其他实体瘤，临床研究表明，癌症病人中CD47的表达水平和预后以及总生存期呈现反比关系，这说明CD47不仅可以作为肿瘤患者预后的生物标志物，同时，CD47可能在此类癌症中发挥重要的促癌作用，针对其开发的抗体可能发挥非常好的疗效。
[0005]目前针对CD47靶点开发抗体的药物中，只有少数在临床阶段，进展最快的是开发FortySeven公司的抗体Hu-5F9，又名magrolimab。一期临床试验显示，通过联合利妥昔单抗在复发/难治性非霍奇淋巴瘤的治疗上展示出极好的疗效，目前处于二期临床试验中。
[0006]因此亟需研发新的CD47结合分子，例如CD47单克隆抗体，用于癌症的免疫治疗，使其具有更低的毒副作用和更佳的临床药效。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种新的CD47结合分子，具体而言，提供一种新的特异性识别CD47的抗体，例如，单克隆抗体，与本领域中现有的CD47抗体相比，所述新的CD47单克隆抗体具有更低的毒副作用和更佳的临床药效，能够更有效地治疗癌症。
[0008]总的来说，本专利技术提供一种分离的CD47结合分子，其能够特异性结合CD47，例如，
与CD47特异性结合的抗体，在下文中称为抗CD47抗体或CD47抗体。本申请还提供了构建和筛选所述CD47结合分子的方法，编码所述CD47结合分子的核酸分子、用于表达CD47结合分子的载体和宿主细胞以及包含所述CD47结合分子的组合物或试剂盒。本申请进一步提供了体外和体内验证CD47结合分子功能的方法。本申请的CD47结合分子能够通过调节免疫系统治疗多种癌症，因此能够用于制备治疗癌症的药剂。
[0009]具体而言，本专利技术提供一种分离的与CD47特异性结合的抗体，在下文中称为抗CD47抗体或CD47抗体。本申请还提供了构建和筛选所述抗CD47抗体的方法，编码所述抗CD47抗体的核酸分子、用于表达抗CD47抗体的载体和宿主细胞以及包含所述抗CD47抗体的组合物或试剂盒。本申请进一步提供了体外和体内验证抗CD47抗体功能的方法。本申请的抗CD47抗体能够通过调节免疫系统治疗多种癌症，因此能够用于制备治疗癌症的药剂。所述抗CD47抗体可以是单克隆抗体。
[0010]更具体而言，本专利技术通过小鼠免疫库筛选到相应的鼠源抗CD47抗体，后续又经过人源化和亲和力成熟改造最终得到了候选分子,在体内外效果都优于对照抗体Hu5F9，而且血凝实验上显示更优，这表明其具有更低的毒性。
[0011]在一些方面，本专利技术提供一种分离的CD47结合分子，其能够特异性结合CD47，例如，人CD47，优选地特异性结合CD47的胞外结构域，所述CD47结合分子包含：
[0012](1)重链可变区，所述重链可变区包含重链CDR1、CDR2和CDR3(下文中分别称为HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其中
[0013]HCDR1包含SEQ ID NO：10或由SEQ ID NO：10组成，
[0014]HCDR2包含SEQ ID NO：11或由SEQ ID NO：11组成，和
[0015]HCDR3包含SEQ ID NO：12或由SEQ ID NO：12组成；和/或
[0016](2)轻链可变区，所述轻链可变区包含轻链CDR1、CDR2和CDR3(下文中分别称为LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中
[0017]LCDR1包含SEQ ID NO:13或由SEQ ID NO:13组成，
[0018]LCDR2包含SEQ ID NO:14或由SEQ ID NO:14组成，和
[0019]LCDR3包含QQGX1X2X3PFT或由QQGX1X2X3PFT组成,其中X1为N或K,X2为T或N，X3为L或Y。
[0020]在一个优选的实施方案中，所述CD47结合分子包含：
[0021](1)重链可变区，所述重链可变区包含：
[0022]SEQ ID NO：10所示的HCDR1，
[0023]SEQ ID NO：11所示的HCDR2，和
[0024]SEQ ID NO：12所示的HCDR3；和
[0025](2)轻链可变区，所述轻链可变区包含：
[0026]SEQ ID NO:13所示的LCDR1，
[0027]SEQ ID NO:14所示的LCDR2，和
[0028]QQGX1X2X3PFT所示的LCDR3，其中X1为N或K,X2为T或N，X3为L或Y。
[0029]在一个优选的实施方案中，所述CD47结合分子包含：
[0030](1)重链可变区，所述重链可变区包含：
[0031]包含SEQ ID NO：10或由SEQ ID NO：10组成的HCDR1，
[0032]包含SEQ ID NO：11或由SEQ ID NO：11组成的HCDR2，和
[0033]包含SEQ ID NO：12或由SEQ ID NO：12组成的HCDR3；和
[0034](2)轻链本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的CD47结合分子，其特异性结合人CD47，其中所述分离的CD47结合分子包含：(1)重链可变区，所述重链可变区包含重链CDR1、CDR2和CDR3，其中重链CDR1包含SEQ ID NO：10或由SEQ ID NO：10组成，重链CDR2包含SEQ ID NO：11或由SEQ ID NO：11组成，和重链CDR3包含SEQ ID NO：12或由SEQ ID NO：12组成；和/或(2)轻链可变区，所述轻链可变区包含轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中轻链CDR1包含SEQ ID NO:13或由SEQ ID NO:13组成，轻链CDR2包含SEQ ID NO:14或由SEQ ID NO:14组成，和轻链CDR3包含QQGX1X2X3PFT或由QQGX1X2X3PFT组成,其中X1为N或K,X2为T或N，X3为L或Y。2.根据权利要求1所述的分离的CD47结合分子，其中所述分离的CD47结合分子包含：(1)重链可变区，所述重链可变区包含：包含SEQ ID NO：10或由SEQ ID NO：10组成的重链CDR1，包含SEQ ID NO：11或由SEQ ID NO：11组成的重链CDR2，和包含SEQ ID NO：12或由SEQ ID NO：12组成的重链CDR3；和(2)轻链可变区，所述轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:13或由SEQ ID NO:13组成的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:14或由SEQ ID NO:14组成的轻链CDR2，和包含SEQ ID NO:15或16或由SEQ ID NO:15或16组成的轻链CDR3。3.根据权利要求2所述的分离的CD47结合分子，其中所述分离的抗CD47结合分子包含：(1)重链可变区，所述重链可变区包含：SEQ ID NO：10所示的重链CDR1，SEQ ID NO：11所示的重链CDR2，和SEQ ID NO：12所示的重链CDR3；和(2)轻链可变区，所述轻链可变区包含：SEQ ID NO:13所示的轻链CDR1，SEQ ID NO:14所示的轻链CDR2，和SEQ ID NO:15或16所示的轻链CDR3。4.根据权利要求1所述的分离的CD47结合分子，其中所述分离的CD47结合分子包含：(1)重链可变区，所述重链可变区：(i)包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；(ii)包含与SEQ ID NO：3的氨基酸序列具有至少85％、至少90％或至少95％同一性并且保留特异性结合CD47的能力的氨基酸序列；或(iii)包含与SEQ ID NO：3的氨基酸序列相比具有一个或多个(例如1－10个，1－5个，1－3个，例如1、2、3、4或5个)氨基酸的添加、缺失和/或取代并且保留特异性结合CD47的能力的氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭永聪，郎国竣，刘新垣，章康健，方先龙，顾锦法，孔超，刘婵娟，张文海，孙兴鲁，范宝国，曹雪萍，
申请(专利权)人：三优生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：