结合人CD38的抗体、其制备方法和用途技术

本发明专利技术属于肿瘤治疗领域，涉及一种结合人CD38的抗体或其抗原结合片段，能够有效结合人CD38，应用于制备治疗CD38强表达的疾病(例如多发性骨髓瘤)的药物，具有良好的临床应用前景。景。

【技术实现步骤摘要】
结合人CD38的抗体、其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于肿瘤治疗领域，涉及一种结合人CD38的抗体、其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]多发性骨髓瘤(MM)是一种浆细胞恶性肿瘤，约占所有癌症的1％，易累及骨骼和肾脏，易致病理性骨折、骨痛、脊髓压迫和肾功能衰竭。对于多发性骨髓瘤的治疗，传统的化疗、放疗等治疗方法，难以取得令人满意的疗效。在过去的十年里，针对骨髓瘤生物学的深入研究揭示了许多新的潜在的治疗靶点。
[0003]CD38是一种46kDa的II型跨膜糖蛋白，CD38已被发现具有多种功能，包括胞外酶活性以及受体介导的细胞粘附和信号转导的调节。CD3的酶活性涉及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)转化为环腺苷二磷酸核糖(CADPR)、ADPR和烟酸腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAADP)，这是调节细胞内钙信号所必需的底物。在对CD38受体功能的初步研究中，人们发现CD38介导细胞与内皮细胞的结合，在淋巴细胞迁移中发挥作用，并与T、B和自然杀伤(NK)细胞的表面分子有功能联系。CD38仅在祖细胞骨髓、生发中心的B淋巴细胞、终末分化的浆细胞和活化的扁桃体中高水平表达，而成熟和记忆B淋巴细胞表达低水平的CD38。在多发性骨髓瘤细胞上CD38强表达，使其成为治疗多发性骨髓瘤的理想靶点。目前，已上市的Daratumumab、Isatuximab在多发性骨髓瘤治疗上表现出色。目前国内还没有相关产品，针对抗体疗法的需求仍未得到满足。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术的专利技术人进行了大量试验，从抗原免疫、杂交瘤制备和筛选、抗体表达纯化到生物活性鉴定，筛选获得了特异性结合人CD38的鼠源抗体，并在此基础上，进一步构建获得其嵌合抗体以及人源化抗体。
[0005]因此，本专利技术的目的在于提供一种结合人CD38的抗体或其抗原结合片段；提供编码所述结合人CD38的抗体或其抗原结合片段的核苷酸分子；提供包含所述核苷酸分子的表达载体；提供所述表达载体的宿主细胞；提供所述结合人CD38的抗体或其抗原结合片段制备方法；提供包含所述结合人CD38的抗体或其抗原结合片段药物组合物；提供所述结合人CD38的抗体或其抗原结合片段在制备药物中的应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0007]本专利技术一方面提供了一种结合人CD38的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括：
[0008](a)重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3，所述的H-CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述的H-CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述的H-CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，和
[0009](b)轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3，所述的L-CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述的L-CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述的L-CDR3的氨基酸序
列如SEQ ID NO：6所示。
[0010]本专利技术“抗体(Ab)”是约150000道尔顿的异四聚糖蛋白，其由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键数目不同。每条重链和轻链也有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一端有可变区(VH)，其后是恒定区。每条轻链的一端有可变区(VL)，另一端有恒定区；轻链的恒定区与重链的第一个恒定区相对，轻链的可变区与重链的可变区相对。本专利技术的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)等。
[0011]本专利技术“单克隆抗体”指从一类基本均一的群体获得的抗体，即该群体中包含的单个抗体是相同的，除少数可能存在的天然发生的突变外。单克隆抗体高特异性地针对单个抗原位点。而且，与常规多克隆抗体制剂(通常是具有针对不同决定簇的不同抗体)不同，各单克隆抗体是针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性外，单克隆抗体的好处还在于它们是通过杂交瘤培养来合成的，不会被其它免疫球蛋白污染。修饰语“单克隆”表示了抗体的特性，是从基本均一的抗体群中获得的，这不应被解释成需要用任何特殊方法来生产抗体。
[0012]本专利技术“抗原结合片段”是指能够与人CD38特异性结合的抗体的片段。本专利技术的抗原结合片段的例子包括Fab片段、F(ab
’
)2片段、Fv片段等。Fab片段是用木瓜蛋白酶消化抗体产生的片段。F(ab
’
)2片段是用胃蛋白酶消化抗体产生的片段。Fv片段是由抗体的重链可变区和轻链可变区紧密非共价关联的二聚物组成。
[0013]作为优选的方案，所述的抗体为鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
[0014]本专利技术“鼠源抗体”是指来源于大鼠或小鼠的抗体，优选小鼠。本专利技术的鼠源抗体为使用人CD38为抗原免疫小鼠并进行杂交瘤细胞筛选获得。
[0015]本专利技术“嵌合抗体”是指包含来源于一个物种的重和轻链可变区序列以及来源于另一个物种的恒定区序列的抗体，例如具有与人恒定区连接的鼠重和轻链可变区的抗体。优选的，本专利技术的嵌合抗体是由鼠源抗体50G12重链可变区和轻链可变区序列与人的恒定区拼接获得。更优选的，本专利技术的嵌合抗体选自50G12-Chimeric。
[0016]本专利技术“人源化抗体”是指其CDR来源于非人物种(优选小鼠)抗体，抗体分子中残余的部分(包括框架区和恒定区)来源于人抗体。此外，框架区残基可被改变以维持结合亲和性。优选的，本专利技术的人源化抗体由鼠源抗体50G12的CDR区和来源自人抗体的非CDR区重组，增加第四个框架区并对部分有重要影响的残基进行突变获得。更优选的，本专利技术的人源化抗体选自50G12-Humanized。
[0017]作为优选的方案，所述的抗原结合片段包括Fab片段、F(ab
’
)2片段、Fv片段。
[0018]作为优选的方案，所述的结合人CD38的抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。
[0019]作为优选的方案，所述的结合人CD38的抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示。
[0020]作为优选的方案，所述的结合人CD38的抗体或其抗原结合片段的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示，轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示。
[0021]本专利技术另一方面提供了一种核苷酸分子，所述核苷酸分子编码上述结合人CD38的
抗体或其抗原结合片段。
[0022]作为优选的方案，所述核苷酸分子编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO：13所示，编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO：14所示。
[0023]作为优选本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.结合人CD38的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括：(a)重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3，所述的H-CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述的H-CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述的H-CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，和(b)轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3，所述的L-CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述的L-CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述的L-CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。2.如权利要求1所述的结合人CD38的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体为鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。3.如权利要求1所述的结合人CD38的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的抗原结合片段包括Fab片段、F(ab
’
)2片段、Fv片段。4.如权利要求1所述的结合人CD38的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的结合人CD38的抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。5.如权利要求1所述的结合人CD38的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的结合人CD38的抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示。6.如权利要求1所述的结合人CD38的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的结合人CD38的抗体或其抗原结合片段的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示，轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示。7.一种核苷酸分子，其特征在于，所述核苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭伟，赵杰，赵乐，刘倾城，陈建鹤，黄浩旻，朱祯平，
申请(专利权)人：三生国健药业上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：