靶向制造技术

本发明专利技术公开了一种靶向

【技术实现步骤摘要】
靶向HER2和PD
‑
L1的双特异性抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种靶向
HER2
和
PD
‑
L1
的双特异性抗体及其制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]人表皮生长因子受体
2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)
隶属表皮生长因子受体
(Epidermal growth factor receptor
，
EGFR)
蛋白家族，可通过与
EGFR
家族其他成员的异源二聚化或由于其自身的过表达所引起的同源二聚化，使胞质结构域上的酪氨酸残基发生自磷酸化并起始细胞增殖和肿瘤发生的一系列信号途径
(Oh,D.Y.and Y.J.Bang.(2020)."HER2
‑
targeted therapies
‑
a role beyond breast cancer."Nat Rev Clin Oncol 17(1):33
‑
48.)。HER2
仅在极少数正常组织中低水平表达
。
但研究表明，
HER2
在乳腺癌
、
胃癌
、
卵巢癌和子宫内膜癌等癌症类型中过表达，且其过表达与肿瘤恶性程度和不良预后相关
(Normanno,N.,et al.(2005)."The ErbB receptors and their ligands in cancer:an overview."Curr Drug Targets 6(3):243
‑
257.)。
基于
HER2
的表达特性和在肿瘤发生发展中的生物学功能，其已成为经过广泛验证的肿瘤治疗靶点，多个靶向
HER2
的单克隆抗体药物已获批上市
。
然而，仅有不到
30
％的病人对其产生应答，而且大部分初始应答的患者会在一年内产生治疗耐受或复发
(Gu,C.L.,et al.(2021)."Bispecific antibody simultaneously targeting PD1 and HER2 inhibits tumor growth via direct tumor cell killing in combination with PD1/PDL1 blockade and HER2 inhibition."Acta Pharmacol Sin.)。
[0003]PD
‑
L1
为免疫球蛋白超家族成员，是
I
型跨膜糖蛋白，表达于巨噬细胞
、
某些激活的
T
细胞和
B
细胞
、DCs
和某些上皮细胞
(Sharpe,A.H.,et al.(2007)."The function of programmed cell death 1and its ligands in regulating autoimmunity and infection."Nat Immunol 8(3):239
‑
245.)。
此外，
PD
‑
L1
也被肿瘤细胞高表达以逃逸适应性抗肿瘤免疫应答
(Ohaegbulam,K.C.,et al.(2015)."Human cancer immunotherapy with antibodies to the PD
‑
1and PD
‑
L1 pathway."Trends Mol Med 21(1):24
‑
33.)。
在肿瘤微环境中，
PD
‑
L1
的表达上调通过
PD
‑1信号通路可直接抑制
T
细胞的抗肿瘤反应，介导肿瘤细胞的免疫逃逸
。
近年来，针对
PD
‑
1/PD
‑
L1
信号途径的阻断型抗体药物开发吸引了广泛的关注，多个靶向
PD
‑1或
PD
‑
L1
的单克隆抗体药物已获批上市并且在临床上取得了令人振奋的疗效
。
尽管如此，大部分患者对
PD
‑
1/PD
‑
L1
阻断的免疫治疗未产生应答，而且部分初始应答的患者也产生了治疗耐受
。
[0004]双特异性抗体是可以同时结合两个抗原或同一抗原的不同表位的重组抗体，不仅可以将免疫效应细胞重定向至肿瘤组织以实现免疫细胞对肿瘤的特异性杀伤，而且能够同时抑制同一肿瘤细胞上的不同促肿瘤信号途径进而发挥协同抑瘤功能
(Labrijn,A.F.,et al.(2019)."Bispecific antibodies:amechanistic review of the pipeline."Nat Rev Drug Discov 18(8):585
‑
608.)。
因此，为了提高
HER2
阳性肿瘤的治疗应答率并克服肿瘤治
疗耐受，亟需开发靶向
HER2
和
PD
‑
L1
的双特异性抗体
。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种靶向
HER2
和
PD
‑
L1
的双特异性抗体及其制备方法和应用
。
本专利技术的双特异性抗体的理化性质较佳，具有较好的纯度和热稳定性；能够保留针对双靶点的功能活性，对两个靶点的结合活性均与其相对应的单抗接近
(
即结合
PD
‑
L1
又结合
HER2
且与单独单抗结合能力相当或更佳
)
，阻断
PD
‑
1/PD
‑
L1
的活性与对应的单抗相当，且抑制
SK
‑
BR
‑3细胞增殖活性与对应的单抗相当；同时表现出很好的
ADCC
活性，显著优于其对应的单抗
。
[0006]本专利技术一方面提供一种双特异性抗体，其包含靶向
HER2
的第一蛋白功能区和靶向
PD
‑
L1
的第二蛋白功能区；其中，所述第一蛋白功能区包含轻链可变区
(VL)
和重链可变区
(VH)
，且所述
VL
包含如
SEQ ID NO:3
所示序列中所含的三本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种双特异性抗体，其包含靶向
HER2
的第一蛋白功能区和靶向
PD
‑
L1
的第二蛋白功能区；其中：所述第一蛋白功能区包含
VL
和
VH
，其中，所述
VL
包含如
SEQ ID NO:3
所示序列中所含的三个互补决定区
LCDR1、LCDR2
和
LCDR3
，所述
VH
包含如
SEQ ID NO:4
所示序列中所含的三个互补决定区
HCDR1、HCDR2
和
HCDR3
；所述第二蛋白功能区包含
VHH
，其中，所述
VHH
包含如
SEQ ID NO:2
所示序列中所含的三个互补决定区
CDR1、CDR2
和
CDR3。2.
如权利要求1所述的双特异性抗体，所述
VL
包含如
SEQ ID NO:3
所示的氨基酸序列，或与其具有至少
90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％序列同一性的氨基酸序列；且所述
VH
包含如
SEQ ID NO:4
所示的氨基酸序列，或与其具有至少
90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％序列同一性的氨基酸序列；和
/
或，所述
VHH
包含如
SEQ ID NO:2
所示的氨基酸序列，或与其具有至少
90
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％序列同一性的氨基酸序列
。3.
如权利要求2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一蛋白功能区包含
Fab
；其中，所述
Fab
与所述
VHH
可操作地连接，所述
VHH
优选连接于所述
Fab
中轻链可变区或重链可变区的
N
端
、
或轻链恒定区的
C
端；或，所述
Fab
与所述
VHH
分别可操作地连接于
Fc
区的两个铰链区的
N
端
。4.
如权利要求2所述的双特异性抗体，所述第一蛋白功能区为
IgG
；所述
VHH
可操作地连接于所述
IgG
重链恒定区的
C
端
。5.
如权利要求1‑4任一项所述的双特异性抗体，其满足以下条件中的任意一种：
(i)
所述的双特异性抗体含有两条第一多肽链和两条第二多肽链，其中：所述第一多肽链如下式所示：
VH
‑
CH1
‑
铰链区
‑
CH2
‑
CH3
，优选包含如
SEQ ID NO:9
所示的序列，且所述第二多肽链如下式所示：
VHH
‑
连接子
‑
VL
‑
CL
，优选包含如
SEQ ID NO:10
所示的序列；或，所述第一多肽链如下式所示：
VH
‑
CH1
‑
铰链区
‑
CH2
‑
CH3
‑
连接子
‑
VHH
，优选包含如
SEQ ID NO:6
所示的序列，且所述第二多肽链如下式所示：
VL
‑
CL
，优选包含如
SEQ ID NO:7
所示的序列；或，所述第一多肽链如下式所示：
VHH
‑
连接子
‑
VH
‑
CH1
‑
铰链区
‑
CH2
‑
CH3
，优选包含如
SEQ ID NO:8
所示的序列，且所述第二多肽链如下式所示：
VL
‑
CL
，优选包含如
SEQ ID NO:7
所示的序列；或，所述第一多肽链如下式所示：
VH
‑
CH1
‑
铰链区
‑
CH2
‑
CH3
，优选包含如
SEQ ID NO:9
所示的序列，且所述第二多肽链如下式所示：
VL
‑
CL
‑
连接子
‑
VHH
，优选包含如
SEQ ID NO:11
所示的序列；
(ii)
所述的双特异性抗体含有第一多肽链
、
第二多肽链和第三多肽链，所述第一多肽链如下式所示：
VHH
‑
铰链区
‑
CH2
‑
CH3
；

【专利技术属性】
技术研发人员：刘婵娟，郎国竣，符智祥，许彩云，司远青，曹静丽，张震，闫闰，
申请(专利权)人：三优生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：