靶向制造技术

本发明专利技术涉及一种靶向

【技术实现步骤摘要】
靶向HER2
，
PD
‑
L1和VEGF的三特异性抗体


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种靶向
HER2
，
PD
‑
L1
和
VEGF
的三特异性抗体及其制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]面对涉及多种信号通路的复杂疾病，针对单一靶点的单克隆抗体治疗方法通常疗效有限
。
因此，开发能够同时结合多个不同靶点的多特异性抗体成为抗体药物发展的新趋势
。
这些多特异性抗体提供了新的治疗策略，例如在免疫疗法背景下的多种细胞受体的协同靶向，因而提供了更好的治疗控制的希望
。
例如，美国公开号
2006/0193852
描述了一种抗
CD3
×
CD19
双特异性抗体，其通过
T
细胞标志物和肿瘤细胞标志物的双特异性结合来靶向并杀死特异性肿瘤细胞群体
。
[0003]HER2(
也称为
Neu、ErbB
‑
2、CD340
或
p185)
属于人表皮生长因子受体酪氨酸激酶家族成员，自身无胞外配体，可通过自身二聚化或与其他人表皮生长因子受体家族成员发生异源二聚化而激活胞内信号途径，促进细胞的增殖
(Wang,Z.(2017)
，“ErbB Receptors and Cancer”，
Methods Mol Biol 1652:3
‑
35)。
在包括乳腺癌和胃癌在内的多种实体肿瘤中，
HER2
存在基因扩增
、
蛋白质表达水平升高等情况，导致肿瘤细胞恶性程度增加
。
因此，
HER2
已成为
HER2+
实体瘤治疗的重要靶点，多款靶向
HER2
的单抗药物已获批上市，包括罗氏制药和基因泰克联合开发的曲妥珠单抗
(Trastuzumab)、
基因泰克开发的帕妥珠单抗
(Pertuzumab)
以及靶向
HER2
的
ADC
药物
T
‑
DM1
和
DS
‑
8201(Oh,D.Y.
和
Y.J.Bang(2020)
，“HER2
‑
targeted therapies
‑
a role beyond breast cancer”，
Nat Rev Clin Oncol 17(1):33
‑
48)。
此外，国内外多款靶向
HER2
的生物类似药也已获批上市
。
但是靶向
HER2
的单克隆抗体往往反应率低且容易产生耐药性，例如
90
％的患者会在1年内对曲妥珠单抗产生耐药性
。
[0004]血管内皮生长因子
(VEGF)
为血管生成的关键调控因子，能够促进血管出芽及新生血管形成
。VEGF
的表达受缺氧及炎症等多种因子控制，当
VEGF
表达上调时，血管出现异常增生
。VEGF
是存在病理性血管生成相关疾病的重要药物靶点，如实体肿瘤和眼病
(
包括糖尿病眼病
、
年龄相关黄斑变性等
)(Apte,R.S.
等人
(2019)
，“VEGF in Signaling and Disease:Beyond Discovery and Development”，
Cell 176(6):1248
‑
1264)。
[0005]程序细胞死亡1配体1蛋白
(PD
‑
L1)
是重要的免疫检查点
PD
‑1的配体，
PD
‑
1/PD
‑
L1
的结合能够促进
T
细胞的凋亡，同时抑制
T
细胞发挥抗肿瘤活性，多种肿瘤细胞通过表达
PD
‑
L1
来逃避免疫系统的监视
(Jiang,Y.
等人
(2020)
，“Progress and Challenges in Precise Treatment of Tumors With PD
‑
1/PD
‑
L1Blockade”，
Front Immunol 11:339)。
因此，阻断
PD
‑
L1
与
PD
‑1相互作用的抗体可激活适应性免疫系统来对抗肿瘤，在肿瘤治疗中具有非常广泛的适应性
。
[0006]目前，国内外已有多款针对
HER2、PD
‑
L1
和
VEGF
的单克隆抗体药物获批上市
。
然而，由于肿瘤的异质性，这些药物在临床治疗中存在应答率偏低，治疗耐受和易复发等现象
。
多
特异性抗体可以同时靶向多个抗原，在提高抗肿瘤药物安全性和解决现有单克隆抗体药物应答不足及耐药方面具有非常大的潜力
(Zhang,J.
等人
(2020)
，“Development of bispecific antibodies in China:overview and prospects”，
Antib Ther 3(2):126
‑
145)。
因此，开发新的具有多重抗肿瘤活性的双特异性抗体或多特异性抗体以提高治疗应答率或克服治疗耐受在肿瘤的临床治疗中具有重要的意义
。
[0007]尽管多特异性抗体具有前景，但它们的生产和使用受到许多实际因素的限制
。
例如目前制备多特异性抗体的平台
/
方法常面临相关联重链和轻链对之间的高保真配对难题
、
组装的抗体稳定性较差
、
抗体链的表达和折叠不良
、
亲和力降低
、
产生免疫原性肽
、
脱靶效应和
/
或复杂的体外组装反应或纯化方法等问题
。
这些问题限制了多特异性抗体的开发和应用
。
此外，不同抗体组件的组合和排布方式对于抗体平台的可生产性具有影响，并且与简单分子不同，这种影响常常难于进行理论预测
。
不仅如此，超出两链的抗体分子的制备也常常会对表达系统和下游工艺提出额外的要求
。
[0008]目前制备的多特异性抗体，由于其抗原结合位点本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种靶向
HER2、PD
‑
L1
和
VEGF
的三特异性抗体，所述抗体包含两条相同的第一多肽和两条相同的第二多肽，其中所述三特异性抗体包含以下结构：
1)
第一多肽从
N
端到
C
端包含：
VHH1
‑
(X)n
‑
VH
‑
CH1
‑
Hinge
‑
Fc
‑
(Y)m
‑
VHH2
；第二多肽从
N
端和
C
端包含：
VL
‑
CL
；或
2)
第一多肽从
N
端到
C
端包含：
VHH1
‑
(X)n
‑
VH
‑
CH1
‑
Hinge
‑
Fc
；第二多肽从
N
端和
C
端包含：
VHH2
‑
(Y)m
‑
VL
‑
CL
；其中，
VHH1
表示结合第一靶点的第一
VHH
结构域
、VHH2
表示结合第二靶点的第二
VHH
结构域
、VH
和
VL
组合结合第三靶点；其中，
X
和
Y
表示连接子，且
n
＝0或1，
m
＝0或1；其中，
Fc
表示免疫球蛋白重链
Fc
结构域，
CH1
表示免疫球蛋白重链
CH1
结构域，
CL
表示免疫球蛋白轻链
CL
结构域，其中，两条第一多肽的
Fc
结构域相互配对同二聚化，
VH
‑
CH1
和
VL
‑
CL
相互配对形成
Fab
，由此形成类似天然
IgG
免疫球蛋白的4聚体结构；其中，
VHH1
和
VHH2
分别结合选自
PD
‑
L1
或
VEGF
的不同靶点，
VH
和
VL
配对结合
HER2。2.
权利要求1所述的三特异性抗体，其中所述
VHH1
包含如
SEQ ID NO:12
‑
14
所示的3个
CDR
，
VHH2
包含如
SEQ ID NO:15
‑
17
所示的3个
CDR
，
VH
包含如
SEQ ID NO:18
‑
20
所示的3个重链
CDR
，
VL
包含如
SEQ ID NO:21
‑
23
所示的3个轻链
CDR
，或所述
VHH1
包含如
SEQ ID NO:15
‑
17
所示的3个
CDR
，
VHH2
包含如
SEQ ID NO:12
‑
14
所示的3个
CDR
，
VH
包含如
SEQ ID NO:18
‑
20
所示的3个重链
CDR
，
VL
包含如
SEQ ID NO:21
‑
23
所示的3个轻链
CDR。3.
权利要求1或2所述的三特异性抗体，其中
VHH1
包含如
SEQ ID NO:1
所示的序列或由其组成，
VHH2
包含如
SEQ ID NO:4
所示的序列或由其组成，
VH
包含如
SEQ ID NO:2
所示的序列或由其组成，
VL
包含如
SEQ ID NO:3
所示的序列或由其组成，或
V...

【专利技术属性】
技术研发人员：符智祥，刘婵娟，郎国竣，
申请(专利权)人：三优生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：