多特异性抗体、其制备方法及其用途技术

本发明专利技术涉及一种多价多特异性抗体及其制备方法和应用。更具体地，本发明专利技术涉及包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽链从N端到C端包含:VHH1

【技术实现步骤摘要】
platform,mAbs12(1),1812210)。然而，在研究中，Lukas等人发现，尽管该平台样式在应用于形成单价双/三特异性抗体时总体的生产性能较好，但随着抗原结合位点和/或特异性的增加，该平台抗体的生产性能受到不同程度的影响，尤其是基于该平台的多价三特异性抗体，在许多情况下，表现出了显著下降的可生产性质，在表达和蛋白A纯化后一半以上测试抗体的SEC纯度甚至低于65％，这就为后期的抗体下游生产工艺带来困难。
[0006]因此，目前仍然需要易于制备、可开发成药的基于VHH的多价多特异性抗体平台。
[0007]专利技术概述
[0008]本专利技术人在针对靶向不同靶抗原的多价多特异性抗体的深入研究中，令人惊奇地发现，在以VHH替代常规可变区形成的IgG样抗体分子的Fc区C末端上增加额外的VHH结构域，可以在增加两个抗原结合位点的同时，改善抗体的可生产性能，并保持各抗原结合位点的抗原结合特异性和选择性以及良好的生物活性。基于此，本专利技术人提出了一种易于制备、可开发成药的多价多特异性抗体平台。
[0009]因此，在第一方面，本专利技术提供了基于VHH的多特异性多价抗体，所述抗体包含第一多肽和第二多肽，其中
[0010]‑
所述第一多肽从N端到C端包含:VHH1
‑
(X)p
‑
CH1
‑
Fc
‑
(Y)q
‑
VHH3；
[0011]‑
所述第二多肽从N端和C端包含：VHH2
‑
(X)p/>‑
CL；
[0012]其中，VHH1表示结合第一表位的第一VHH结构域；VHH2表示结合第二表位的第二VHH结构域；VHH3表示结合第三表位的第三VHH结构域；所述第一、第二和第三VHH结构域赋予所述抗体的抗原结合特异性，
[0013]其中，X和Y表示连接子，且p＝0或1，q＝1；
[0014]其中，Fc表示免疫球蛋白重链Fc结构域，CH1表示免疫球蛋白重链CH1结构域，CL表示免疫球蛋白轻链CL结构域，
[0015]其中，VHH1和VHH2结合互不相同的表位，并且所述VHH1
‑
(X)p
‑
CH1结构域和所述VHH2
‑
(X)p
‑
CL结构域相互配对形成Fab样结构融合在Fc结构域N端。
[0016]在一个实施方案中，所述抗体为三特异性抗体，其中所述第一、第二和第三VHH结构域结合互不相同的第一、第二和第三表位。在另一个实施方案中，所述抗体为双特异性抗体，其中所述第一和第二VHH结构域结合不同的第一和第二表位，且所述第三VHH结构域结合与第一表位和第二表位之一相同的第三表位，且优选地所述双特异性抗体包含相同的VHH1结构域与VHH3结构域，或相同的VHH2结构域与VHH3结构域。
[0017]在一个实施方案中，在所述第一多肽链中，VHH1通过其C末端，任选地经由连接子，融合在CH1
‑
Fc结构域的N末端；且VHH3通过其N末端，经由连接子，融合在CH1
‑
Fc结构域的C末端；且其中，在所述第二多肽链中，VHH2通过其C末端，任选地经由连接子，融合在CL结构域的N末端。
[0018]在一些实施方案中，p＝0，q＝1，X与Y相同，且优选地，其中所述抗体包含第一多肽和第二多肽，其中，
[0019]所述第一多肽从N末端到C末端包含：VHH1结构域、包含CH1结构域和Fc结构域的IgG1重链恒定区结构域、连接子、和VHH3结构域；
[0020]所述第二多肽从N末端到C末端包含：VHH2结构域和免疫球蛋白κ轻链CL结构域。
[0021]在另一些实施方案中，其中，p＝1，q＝1，X与Y相同，且优选地，所述抗体包含第一
多肽和第二多肽，其中，
[0022]所述第一多肽从N末端到C末端包含VHH1结构域、连接子、包含CH1结构域和Fc结构域的IgG1重链恒定区结构域、连接子、和VHH3结构域；
[0023]所述第二多肽从N末端到C末端包含VHH2结构域、连接子、和免疫球蛋白κ轻链CL结构域。
[0024]在一个实施方案中，X与Y可以相同或不同。在一个实施方案中，X和Y分别独立地为长度8
‑
30个氨基酸的连接子。在一个优选实施方案中，X和Y包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由其组成。
[0025]在一个实施方案中，所述Fc结构域为IgG Fc结构域，例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc结构域，优选人IgG1的Fc结构域，更优选所述Fc由铰链区、CH2结构域和CH3结构域组成。在一个优选实施方案中，所述Fc结构域包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由其组成。
[0026]在一个实施方案中，所述CH1结构域为IgG，尤其是人IgG，例如人IgG1的CH1结构域，且优选地包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述CL结构域为免疫球蛋白κ或λ轻链恒定区，且优选地包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或由其组成。
[0027]在一个实施方案中，所述包含CH1结构域和Fc结构域的IgG1重链恒定区结构域包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，或由其组成。
[0028]在一个实施方案中，所述第一、第二和第三VHH结构域为嵌合或人源化VHH结构域，优选人源化VHH结构域。
[0029]在一个实施方案中，所述第一、第二和第三VHH结构域结合相同或不同抗原上的表位，其中优选地，所述抗原选自：免疫检查点分子、肿瘤相关抗原、血管生成因子、或其组合。可用于本专利技术的免疫检查点分子包括但不限于：PD
‑
L1,PD
‑
1,PD
‑
L2,CTLA
‑
4,B7
‑
H3,TIM3,LAG
‑
3,VISTA,ICOS,4
‑
1BB,OX40,GITR和CD40。可用于本专利技术的肿瘤相关抗原包括但不限于：CLDN18.2,HER2,BRAF,EGFR,CD20,CD38和CD52。可用于本专利技术的血管生成因子包括但不限于：碱性FGF,HGF,sTIE
‑
2,sVEGFR
‑
1,sVEGFR
‑
2,EGF,IL
‑
6,IL
‑
8,PLGF,VEGF,PDGF
‑
bb,ANG1,ANG2,SDF
‑
1α,MDC,Galectin,TSP
‑
1,Endocan,eNOS,HIF
‑
1α。
[0030]在一些实施方案中，本专利技术的多特异抗体能够结合选自以下的抗原组合：
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多特异性抗体，其中所述抗体包含第一多肽和第二多肽，其中
‑
所述第一多肽链从N端到C端包含:VHH1
‑
(X)p
‑
CH1
‑
Fc
‑
(Y)q
‑
VHH3；
‑
所述第二多肽链从N端和C端包含：VHH2
‑
(X)p
‑
CL；其中，VHH1、VHH2和VHH3分别表示特异性结合第一表位的第一VHH结构域、特异性结合第二表位的第二VHH结构域；和特异性结合第三表位的第三VHH结构域；其中，X和Y表示连接子，且p＝0或1，q＝1；其中，Fc表示免疫球蛋白重链Fc结构域，CH1表示免疫球蛋白重链CH1结构域，CL表示免疫球蛋白轻链CL结构域，其中，VHH1和VHH2结合互不相同的表位，并且所述VHH1
‑
(X)p
‑
CH1结构域和所述VHH2
‑
(X)p
‑
CL结构域相互配对形成Fab样结构融合在Fc结构域N端。2.根据权利要求1的多特异性抗体，其中，X与Y分别独立地为长度8
‑
30个氨基酸的连接子，优选地，包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由其组成。3.根据权利要求1
‑
2任一项的多特异性抗体，其中，所述Fc结构域为IgG的Fc结构域，例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc结构域，优选人IgG1的Fc结构域。4.根据权利要求1
‑
3任一项的多特异性抗体，其中，所述第一、第二和第三VHH结构域结合相同或不同抗原上的表位，其中优选地，所述抗原选自：免疫检查点分子、肿瘤相关抗原、血管生成因子、或其组合。5.根据权利要求1
‑
4任一项的多特异性抗体，其中，所述多特异性抗体是三特异性抗体，所述第一、第二和第三VHH结构域分别结合互不相同的第一、第二和第三表位。6.根据权利要求1
‑
4任一项的多特异性抗体，其中，所述多特异性抗体是双特异性抗体，所述第一和第二VHH结构域分别结合不同的第一和第二表位，且所述第三VHH结构域结合与第一表位和第二表位之一相同的第三表位。7.根据权利要求1
‑
6任一项的多特异性抗体，其中，p＝0，q＝1，X与Y相同，且优选地，其中所述抗体包含第一多肽和第二多肽，其中，所述第一多肽从N末端到C末端包含：VHH1结构域、包含CH1结构域和Fc结构域的IgG1重链恒定区结构域、连接子、和VHH3结构域；所述第二多肽从N末端到C末端包含：VHH2结构域和免疫球蛋白κ轻链CL结构域。8.根据权利要求1
‑
6任一项的多特异性抗体，其中，p＝1，q＝1，X与Y相同，且优选地，所述抗体包含第一多肽和第二多肽，其中，所述第一多肽从N末端到C末端包含VHH1结构域、连接子、包含CH1结构域和Fc结构域的IgG1重链恒定区结构域、连接子、和VHH3结构域；所述第二多肽从N末端到C末端包含VHH2结构域、连接子、和免疫球蛋白κ轻链CL结构域。9.根据权利要求1
‑
8任一项的多特异性抗体，其中，所述抗体包含特异性结合选自如下的抗原的VHH结构域：CLDN18.2、PD
‑
L1、VEGF、ANG2、或其任意两者或三者的组合；优选地，所述特异性结合CLDN18.2的VHH结构域包含SEQ ID NOs:35
‑
37所示的CDR1
‑
3序列，更优选地，包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成；优选地，所述特异性结合PD
‑
L1的VHH结构域包含SEQ ID NOs:38
‑
40或41
‑
43所示的CDR1
‑
3序列，更优选地，包含SEQ ID NO:2或3的氨基酸序列或由其组成；
优选地，所述特异性结合VEGF的VHH结构域包含SEQ ID NOs:44
‑
46或47
‑
49所示的CDR1
‑
3序列，更优选地，包含SEQ ID NO:4或5的氨基酸序列或由其组成；优选地，所述特异性结合ANG2的VHH结构域包含SEQ ID NOs:50
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52所示的CDR1
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3序列，更优选地，包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或由其组成。10.根据权利要求1
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9任一项的多特异性抗体，其中，所述抗体为三特异性抗体，能够结合选自如下的抗原组合：(i)VEGF、Ang2和PD
‑
L1；和(ii)CLDN18.2、PD
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L1和VEGF。11.根据权利要求1
‑
9任一项的多特异性抗体，其中，所述抗体为双特异性抗体，能够结合选自如下的抗原组合：(i)VEGF和Ang2,(ii)VEGF和PD
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L1,(iii)Ang2和PD
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L1；和(iv)CLDN18.2和PD
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L1。12.根据权利要求1
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10任一项的多特异性抗体，其中所述抗体为三特异性抗体，其包含：
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包含SEQ ID NO:13或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的第一多肽，和包含SEQ ID NO:14或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的第二多肽；或
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包含SEQ ID NO:15或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：郎国竣，刘婵娟，赵倩倩，
申请(专利权)人：三优生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：