一种靶向人PD-L1的融合蛋白及其用途制造技术

本申请提供了一种融合蛋白，其从N端到C端包含：第一抗PD

【技术实现步骤摘要】
一种靶向人PD
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L1的融合蛋白及其用途


[0001]本申请涉及免疫检测领域，尤其涉及一种用于PD
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1/PD
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L1阻断治疗伴随诊断的免疫组化检测技术。

技术介绍

[0002]PD
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1/PD
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L1抑制剂是一组用于治疗癌症的免疫检查点抑制剂。此类免疫检查点抑制剂正在成为几种癌症的一线治疗药物。随着越来越多的PD
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1/PD
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L1抑制剂药物获批上市，越来越多的肿瘤患者从治疗中获益。但是，通常需要进行PD
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L1免疫组化检测来预判患者能否从PD
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1/PD
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L1抑制剂获益。
[0003]FDA批准的OPDIVO伴随诊断免疫组化试剂为PD
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L1 IHC 28
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8 pharmDx，批准的KEYTRUDA伴随诊断免疫组化试剂为PD
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L1 IHC 22C3 pharmDx，批准的TECENTRIQ伴随诊断免疫组化检测试剂为VENTANA PD
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L1 (SP142) Assay。这种“一种药物一种检测”的模式，包括不同的诊断标准，对于伴随诊断在病理日常诊断工作中的应用影响很大。

技术实现思路

[0004]本申请通过制备靶向PD
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L1分子上的不同表位的双特异性抗体，在一定程度上可以解决通用型PD
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L1分子免疫组化诊断的一致性问题。
[0005]在第一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其从N端到C端包含：第一抗PD
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L1抗体的VL、第一连接子、第二抗PD
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L1抗体的VH、第二连接子、Fc区、第三连接子、第二抗PD
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L1抗体的VL、第四连接子以及第一抗PD
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L1抗体的VH。
[0006]在第二方面，本申请提供了一种核酸，其编码第一方面所述的融合蛋白。
[0007]在第三方面，本申请提供了一种表达载体，其包含第二方面所述的核酸。
[0008]在第四方面，本申请提供了一种宿主细胞，其包含第二方面所述的核酸或第三方面所述的表达载体。
[0009]在第五方面，本申请提供了一种检测试剂盒，其包含第一方面所述的融合蛋白，第二方面所述的核酸，第三方面所述的表达载体或第四方面所述的宿主细胞，以及关于如何进行所述检测的说明书。
[0010]在第六方面，本申请提供了第一方面所述的融合蛋白，第二方面所述的核酸，第三方面所述的表达载体或第四方面所述的宿主细胞用于检测受试者的样品中的PD
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L1表达的用途。
[0011]在第七方面，本申请提供了第一方面所述的融合蛋白，第二方面所述的核酸，第三方面所述的表达载体或第四方面所述的宿主细胞在制备用于筛选是否适于施用PD
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1/PD
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L1抑制剂的肿瘤候选者的试剂中的用途。
[0012]使用来自不同抗体的可变区的组合，构建了一种能够特异性识别人PD
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L1两种不同表位的双特异性抗体，产生的这类双特异性抗体不仅在免疫组化反应中提高了检测的灵敏度，而且能够适应不同的抗体分子检测。
附图说明
[0013]图1显示了本申请制备的双特异性抗体IMB0601的示意性结构；图2显示了本申请制备的双特异性抗体IMB0601的SDS
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PAGE结果，其中泳道1显示了非还原条件下的电泳结果；泳道2显示了还原条件下的电泳结果；并且M显示了蛋白质Marker；图3显示了本申请制备的双特异性抗体IMB0601的免疫组化结果，其中A：阴性对照组；B：22C3组；C：双抗组(IMB0601)，并且其中A至C中的左侧图均为直肠癌，右侧图均为十二指肠癌。
专利技术的详细描述
[0014]提供以下定义和方法用以更好地界定本申请以及在本申请实践中指导本领域普通技术人员。除非另外指明，本申请中所用的术语具有本领域技术人员通常所理解的含义。本文所引用的所有专利文献、学术论文及其他公开出版物，其中的全部内容整体并入本文作为参考。
定义
[0015]本文使用的术语“融合蛋白(fusion protein)”是指有目的地把两段或更多段编码功能蛋白的基因连接在一起，进而表达所述蛋白。这种通过人工条件下将两个或更多个基因的编码区首尾连接，由调控序列控制的基因表达后所得的蛋白质产物即为融合蛋白。
[0016]本文所用的术语“连接子”在本申请的背景下是指用于连接两个功能蛋白之间的短肽，长度可以从3个氨基酸(aa)高至76个氨基酸。连接子可为融合蛋白中的各功能蛋白提供一定的柔性，使其能够发挥各自的功能。
[0017]本文所用的术语“抗体”包括典型的“四链抗体”，其属于由两条重链(HC)和两条轻链(LC)组成的免疫球蛋白；重链是指这样的多肽链，其在N端到C端的方向上由重链可变区(VH)、重链恒定区CH1结构域、铰链区(HR)、重链恒定区CH2结构域、重链恒定区CH3结构域组成；并且，当所述全长抗体为IgE同种型时，任选地还包括重链恒定区CH4结构域；轻链是在N端到C端方向上由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成的多肽链；重链与重链之间、重链与轻链之间通过二硫键连接，形成“Y”字型结构。由于免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将本文的“免疫球蛋白”分为五类，或称为免疫球蛋白的同种型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链和ε链。同一类Ig根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的亚类，如IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，IgA可分为IgA1和IgA2。轻链通过恒定区的不同分为κ链或λ链。五类Ig中第每类Ig都可以有κ链或λ链。
[0018]本文所用的术语“可变区”是指抗体重链或轻链中所包含的使抗体结合抗原的区域，“重链可变区”与“VH”、“HCVR”可互换使用，“轻链可变区”与“VL”、“LCVR”可互换使用。天然抗体的重链和轻链的可变域(分别是VH和VL)一般具有相似的结构，每个域包含四个保守的框架区(FR)和三个高变区(HVR)。参见例如Kindt等人, Kuby Immunology, 第6版, W. H. Freeman and Co.,p.91(2007)。单个VH或VL域可足以赋予抗原结合特异性。
[0019]本文所用的术语“Fc区”是指完整抗体经木瓜蛋白酶水解而成的抗体羧基端部分，
典型地，其包含抗体的CH3和CH2结构域。Fc区包括例如天然序列Fc区、重组Fc区和变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可以略微变化，但是人IgG重链的Fc区通常被定义为从Cys226位置的氨基酸残基或从Pro230延伸至其羧基末端。Fc区的C末端本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其从N端到C端包含：第一抗PD
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L1抗体的VL、第一连接子、第二抗PD
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L1抗体的VH、第二连接子、Fc区、第三连接子、第二抗PD
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L1抗体的VL、第四连接子以及第一抗PD
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L1抗体的VH。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其中所述第一抗PD
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L1抗体和所述第二抗PD
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L1抗体各自独立地选自以下单克隆抗体：阿替珠单抗、阿维单抗、度伐单抗、尼伏单抗、潘利珠单抗、替雷利珠单抗、阿得贝利单抗、贝莫苏拜单抗、柯希利单抗、Danburstotug、多塔利单抗、Garivulimab、仑卡奈单抗和玛奈利单抗，优选地，所述第一抗PD
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L1抗体是阿替珠单抗，并且所述第二抗PD
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L1抗体是阿维单抗，或者所述第一抗PD
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L1抗体是阿维单抗，并且所述第二抗PD
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L1抗体是阿替珠单抗。3.如权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述第一连接子至所述第四连接子各自独立地选自：GGGS、GGGGS、QQQG、QQQQG、SSG、SSSSG、(GGGS)2、(GGGS)3、(GGGS)4、(GGGS)5、(GGGGS)2、(GGGGS)3、(GGGGS)4和GSSSSSSSSSSSSSSSG，优选地，所述第一连接子、所述第二连接子和所述第四连接子的长度均小于所述第三连接子，优选地，所述第三连接子选自(GGGS)2、(GGGS)3、(GGGS)4、(GG...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧伦，王雪莉，谢新遥，王变珍，
申请(专利权)人：军科正源北京药物研究有限责任公司，
类型：发明
国别省市：