检测人泪液中的神经生长因子的方法及其泪液的处理方法技术

本申请提供了检测人泪液中的神经生长因子

【技术实现步骤摘要】
检测人泪液中的神经生长因子的方法及其泪液的处理方法


[0001]本申请涉及检测领域，具体而言，涉及检测人泪液中的神经生长因子的方法及其泪液样品的处理方法
。

技术介绍

[0002]神经营养性角膜炎
(NK)
是因三叉神经受损，引起角膜神经感觉和支配功能障碍从而导致的一种罕见病和疑难病，角膜神经是皮肤神经末梢的
300~400
倍，来源于三叉神经眼支的睫状长和短神经
。
角膜敏感性强的主要原因是角膜上皮有大量的脱髓鞘的三叉神经末梢
。
本病特征是角膜知觉减退或缺失，出现干眼
、
角膜上皮缺损和角膜溃疡，最终引起角膜基质溶解
、
穿孔
。NK
常见于病毒性角膜炎反复发作
、
手术损伤
、
颅脑肿瘤
、
颅脑外伤以及糖尿病等患者
。
[0003]NGF
是一种神经营养因子，主要通过高亲和力受体
TrkA
促进感觉神经元和交感神经元生长和存活，并恢复神经元功能，故可促进
NK
的角膜损伤愈合，改善角膜知觉和泪液生成
。
[0004]新药研发过程中，
NK
整体的治疗目标是阻止疾病的进展和避免严重损伤
。
其治疗方法包括使用自体血清
、
脐带血清与神经生长因子
。
神经生长因子具有促进角膜神经纤维再生
、
促进角膜上皮生长分化
、
促进泪液分泌及减轻炎症的作用
。
[0005]目前尚没有任何一种方法可以检测眼部在给予神经生长因子滴眼液后，泪液中
NGF
的浓度
。
而人在给予神经生长因子滴眼液后，血药浓度非常低，基本检测不到
。
因此，迫切需要建立一种通用的在人泪液中检测
NGF
的浓度的方法，这样的方法不仅可以提供
NGF
药物在局部靶器官中的浓度数据，而且还有助于研究
NGF
在泪液中的药代动力学
。

技术实现思路

[0006]本申请的专利技术人发现了通过特定的方法对泪液样品进行预处理，之后再对预处理后的泪液样品中的
NGF
进行测量，可以很好地解决泪液基质对
NGF
检测的干扰，进而实现对泪液中
NGF
的浓度的精确测量
。
[0007]具体地，本申请提供了如下技术方案
。
[0008]在第一方面，本申请提供了一种用于检测神经营养因子
NGF
的泪液样品的处理方法，其包括：
a)
将用于
NGF
检测的泪液样品提供在基质材料上；以及
b)
利用提取液提取提供在所述基质材料上的泪液样品中的
NGF。
[0009]在第二方面，本申请提供了一种用于检测泪液样品中的
NGF
浓度的方法，其包括：
a)
提供通过第一方面所述的方法处理后的泪液样品；以及
b)
测量所述处理后的泪液样品中
NGF
的浓度
。
[0010]本申请首次建立了
NGF
在人泪液中的检测方法，该方法特异性好
、
灵敏度高
(
可以达到
100 pg/mL)
，回收率高，操作简单，重复性好；泪液中的生物基质对
NGF
检测的干扰大，
基质效应强，但是采用本申请中的样品提取方法可以很好地解决泪液基质对
NGF
检测的干扰
。
具体实施方式
[0011]本申请的专利技术人发现了通过特定的方法对泪液样品进行预处理，之后再对预处理后的泪液样品中的
NGF
进行测量，可以很好地解决泪液基质对
NGF
检测的干扰，进而实现对泪液中
NGF
的浓度的精确测量
。
这样的方法不仅可以提供
NGF
药物在局部靶器官中的浓度数据，而且还有助于研究
NGF
在泪液中的药代动力学
。
[0012]具体地，本申请提供了如下技术方案
。
[0013]在第一方面，本申请提供了一种用于检测神经营养因子
NGF
的泪液样品的处理方法，其包括：
a)
将用于
NGF
检测的泪液样品提供在基质材料上；以及
b)
利用提取液提取提供在所述基质材料上的泪液样品中的
NGF。
[0014]神经生长因子
(nerve growth factor
，
NGF)
能促进中枢和外周神经元的生长
、
发育
、
分化
、
成熟，维持神经系统的正常功能，加快神经系统损伤后的修复
。NGF
广泛分布于机体各组织器官中
(
包括脑
)
，在靶组织中的浓度与交感神经和感觉神经在靶区分支的密度和
mRNA
的含量有关
。
神经生长因子家族包括：神经生长因子
、
脑源性神经营养因子
、
神经营养素
‑
3、
神经营养素
‑
4/5、
神经营养素
‑6和神经营养素
‑7等，主要为前4种
。NGF
为神经生长因子家族中最主要的一类，在组织中主要以前体的形式存在，在颌下腺中加工形成成熟的
NGF。
神经生长因子的生物学作用主要包括营养神经
、
保护神经
、
促进神经再生长等作用
。
[0015]本申请中的“基质材料”通常是指用于支撑收集的泪液样品的固体支持物，例如滤纸
、
纸巾
、
泪液提取试纸等，优选
Schimer
试纸
。
[0016]在具体的实施方案中，用于提取提供在所述基质材料上的泪液样品中的
NGF
的提取液可以为体液，例如血液，血浆，血清，尿液，阴道液，来自阴囊
(
例如睾丸的腹水
)
的液体，阴道冲洗液，胸腔液，腹水，脑脊液，唾液，汗液，泪液，痰液，支气管肺泡灌洗液，来自乳头的排出液体，来自身体的不同部分
(
例如，甲状腺，乳房
)
的吸出液体，眼内液体
(
例如房水
)
等
。
所述体液可以用缓冲液稀释成体液稀释物
。
[0017]优选地，提取液为血液，血浆或血清
。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于处理泪液样品以检测所述泪液样品中神经营养因子
NGF
的方法，其包括：
a)
将所述泪液样品提供在基质材料上；以及
b)
利用提取液提取提供在所述基质材料上的泪液样品中的
NGF。2.
如权利要求1所述的方法，其中所述基质材料为滤纸
、
纸巾和泪液提取试纸
。3.
如权利要求1或2所述的方法，其中所述提取液为体液
。4.
如权利要求3所述的方法，其中所述体液用
1.25
‑
20
倍体积，优选2‑
18
，更优选4‑
16
，最优选约5倍体积的缓冲液稀释
。5.
如权利要求4所述的方法，其中所述缓冲液为
PBS
缓冲液或含有
1%BSA
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雪莉，张红梅，李弯弯，王变珍，
申请(专利权)人：军科正源北京药物研究有限责任公司，
类型：发明
国别省市：