【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物检测领域，具体涉及用于检测样品的预处理方法，尤其是用于检测地诺单抗抗药性抗体的样品预处理方法及其应用。
技术介绍
1、随着生物技术的发展，单克隆抗体(mab)已成为现代医学中重要的治疗药物。mab具有治疗多种疾病和病症的潜力，但是mab的重复使用可能引起高度的免疫原性。药物免疫原性体现在刺激生成抗药性抗体(anit-drug antibodies，ada)。ada可以改变药物的药代动力学和药效，从而降低药物疗效，甚至有可能会抵消药物的治疗效果或对患者造成严重的不良事件。因此，准确的ada检测是必要的。
2、地诺单抗(denosumab，又称为amc-162)是一种对nf-κb受体活化剂配体(receptoractivator of nf-κb ligand, rankl)具有高亲和力的人源化igg2单克隆抗体，其作为具有特殊作用机制的骨吸收抑制剂，能够抑制破骨细胞活化和发展，减少骨吸收并增加骨密度。
3、在地诺单抗ada检测的过程中，面临的一个主要挑战在于游离靶点rankl的干扰。这是因为在ada检测过程中需要采用酸解等方式将ada-药物复合物解离开，形成游离的ada以便于检测；然而，在解离的同时也会释放药物结合的rankl，造成样品中游离rankl水平显著升高，rankl可以以三聚体形式存在，因而在反应体系中该rankl三聚体会直接与捕获试剂和检测试剂桥连而出现假阳性信号。
4、现有解决上述问题的技术方法主要是采用抗rankl的抗体来进行干扰的解除。但该技术存在较大的技术缺陷和
5、因此，仍然需要开发能够有效降低待检测样品中游离rankl干扰的地诺单抗抗药性抗体的方法。
技术实现思路
1、针对上述问题，经过反复摸索，本申请的专利技术人开发了一种用于检测动物的体液样品(例如，人的体液样品，如血液、血浆、血清等)中地诺单抗抗药性抗体的样品预处理方法，由此开发了可降低性样品中游离rankl干扰的用于检测地诺单抗抗药性抗体的方法。此外，本申请还提供了所由此制备的相关产品及其应用。
2、具体地，本申请提供了如下技术方案：
3、第一方面，本申请提供了一种用于检测地诺单抗抗药性抗体的样品预处理方法，其包括采用含0.5wt.%至3 wt.%的无脂肪酸牛血清白蛋白的缓冲液对样品进行预处理的步骤。
4、第二方面，本申请提供了用于检测地诺单抗抗药性抗体的方法，其包括采用第一方面所提供的样品预处理方法对样品进行预处理的步骤。
5、第三方面，本申请提供了含0.5wt.%至3 wt.%的无脂肪酸牛血清白蛋白的缓冲液在制备用于检测地诺单抗抗药性抗体的试剂或试剂盒中的应用。
6、第四方面，本申请提供了一种用于检测地诺单抗抗药性抗体的试剂或试剂盒，其包括含0.5wt.%至3 wt.%的无脂肪酸牛血清白蛋白的缓冲液。
7、此外，本申请还提供了第四方面所提供的试剂或试剂盒在用于检测地诺单抗抗药性抗体中的应用。
8、结合其他临床研究的经验与相关报道，在地诺单抗抗药性抗体检测过程中，对样品进行酸解会释放药物结合的rankl分子，进而出现假阳性信号。然而，本申请采用避免酸解的方式，通过例如含1 wt.%无脂肪酸牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液以一定的体积比对待检测地诺单抗抗药性抗体的样品进行预处理，可以有效降低样品中游离rankl的存在，由此有效降低游离rankl的干扰，很好地解决了游离rankl影响地诺单抗药物免疫原性检测的问题。
9、此外，本申请提供的样品预处理方法，操作简便，试剂易获取。经预处理后的样品(如，人血清样品)可采用桥联式电化学发光技术(bridging-eclia)定性检测其中的地诺单抗抗药性抗体，并且不会对后续分析方法的表现造成影响。也就是说，本申请提供的用于检测地诺单抗抗药性抗体的方法，可以有效降低游离rankl分子的干扰，灵敏准确地定性检测样品中的地诺单抗抗药性抗体。基于本申请提供的方法，可以形成相关的检测产品，例如用于检测地诺单抗抗药性抗体的试剂或试剂盒，方便快速地定性检测地诺单抗抗药性抗体。
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1.一种用于检测地诺单抗抗药性抗体的样品预处理方法，其包括采用含0.5wt.%至3wt.%的无脂肪酸牛血清白蛋白的缓冲液对样品进行预处理的步骤，其中所述样品与所述缓冲液的体积比为1:10至1:50。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述预处理条件如下：于20 ℃至30 ℃的温度和500rpm至700 rpm的转速下振荡温育样品20 min至40 min。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述缓冲液选自：磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液和HEPES缓冲液中的一种或多种。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述样品为动物的体液样品，例如血液、血清或血浆。
5.一种用于检测地诺单抗抗药性抗体的方法，其包括采用权利要求1至3中任一项所述的样品预处理方法对样品进行预处理的步骤。
6.如权利要求5所述的方法，其还包括采用桥联式电化学发光免疫分析定性检测样品中地诺单抗抗药性抗体的步骤。
7.如权利要求5或6所述的方法，其中所述样品为动物的体液，例如血液、血清或血浆。
8.含0.5wt.%至3 wt.%的无
9.一种用于检测地诺单抗抗药性抗体的试剂或试剂盒，其包括含0.5 wt.%至3 wt.%的无脂肪酸牛血清白蛋白的缓冲液。
10.权利要求9所述的试剂或试剂盒在检测地诺单抗抗药性抗体中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测地诺单抗抗药性抗体的样品预处理方法，其包括采用含0.5wt.%至3wt.%的无脂肪酸牛血清白蛋白的缓冲液对样品进行预处理的步骤，其中所述样品与所述缓冲液的体积比为1:10至1:50。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述预处理条件如下：于20 ℃至30 ℃的温度和500rpm至700 rpm的转速下振荡温育样品20 min至40 min。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述缓冲液选自：磷酸盐缓冲液、tris缓冲液和hepes缓冲液中的一种或多种。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述样品为动物的体液样品，例如血液、血清或血浆。
5.一种用于检测地诺单抗抗药性抗体...
【专利技术属性】
技术研发人员：兰鑫，刘洋洋，王雪莉，谢新遥，
申请(专利权)人：军科正源北京药物研究有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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