一种特异性识别4-1BB的抗体、其制备方法及其用途技术

本发明专利技术公开了一种靶向4

【技术实现步骤摘要】
一种特异性识别4
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1BB的抗体、其制备方法及其用途


[0001]本专利技术属于抗体领域，具体涉及一种特异性识别4
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1BB的抗体、其制备方法及其用途。

技术介绍

[0002]4‑
1BB又称为“肿瘤坏死因子受体超家族成员9”(TNFRSF9)、CD137，是在TCR激活后诱导的T细胞共刺激受体(Nam等人,2005,Curr Cancer Drug Targets 5:357
‑
363；Watts等人,2005，Annu Rev Immunol，23:23
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68)，属于肿瘤坏死因子超家族的跨膜共刺激受体蛋白。4
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1BB的配体4
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1BBL，是存在于包括B细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞在内的抗原呈递细胞上的一种激动剂分子(Watts等人,2005，《免疫学年评》23:23
‑
68)。4
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1BB蛋白发现于1989年，是由4个CRD(半胱氨酸富集结构域)所组成的三聚体细胞膜表面受体，主要通过结合其配体4
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1BBL激活T细胞，促进其增殖，参与T细胞介导的各种免疫应答过程。4
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1BB蛋白表达于胸腺、淋巴结和脾脏等免疫器官以及CD8
+
T细胞、调节性T细胞和NK细胞表面，在其他免疫细胞中也有表达。4
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1BB介导的胞内信号传递主要是通过TRAF1/2激活下游蛋白激酶，进而调控T细胞中激活增殖相关基因的转录表达。
[0003]已有多种模型证明使用各种激动剂(例如激动性抗体、重组4
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1BBL蛋白质和4
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1BB特异性适体)能够高效激活免疫系统来杀伤肿瘤细胞(Dharmadhikari等人，2016，Oncoimmunology，5(4):e1113367和其中的参考文献)。抗4
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1BB抗体通过结合T细胞表面的4
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1BB阻断或共存其配体4
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1BB
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L，激活并提高下游信号通路及其功能。激动性4
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1BB抗体Urelumab(BMS
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663513)是由百时美施贵宝公司(Bristol
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Myers Squibb)开发的一种全人IgG4抗体，其临床评价显示在药效方面表现良好，但受试者的治疗相关不良事件，包括与抗体剂量相关的严重肝毒性(ALT升高)仍有报道(Segal等人，2016，Clin Cancer Res，23(8):1929
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1936)。另一个4
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1BB弱激动剂抗体Utomilumab(PF
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05082566)是由辉瑞公司(Pfizer)开发的全人IgG2抗体，与抗PD
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1抗体Pembrolizumab的联合使用尽管不会引起任何剂量限制性毒性，但药效方面显示与单独抗PD
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1抗体疗法相当(Tolcher,A.等人，2017，Clin Cancer Res，23(18):5349
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5357)。
[0004]4‑
1BB抗体的激动作用受不同亚型Fc区的影响，目前在临床试验阶段的抗体是IgG2或IgG4型。与大多数TNFR家族成员一样，4
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1BB信号依赖于交联进行激活(Wilson等人，2011，Cancer Cell)。在APC膜上表达的4
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1BBL可以诱导受体的多重交联。抗体本身只交联两个4
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1BB受体，为了诱导更强的信号，经由其它细胞上表达的FcγRs进一步交联对于4
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1BB介导的信号激活极其关键。FcγR介导的交联是由单核细胞、巨噬细胞、DC和潜在的B细胞和其它细胞类型介导的。4
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1BB激动性抗体的激动效果可能受到以下的影响：1)诱导交联，引发更强的免疫激活，和2)诱导ADCC，其可能导致对两种效应T细胞(主要是CD8+T细胞和Tregs)的杀伤；1)和2)的净效果将可能取决于表达4
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1BB的细胞的分布、靶细胞与表达FcγR的免疫细胞结合的可能性、受体密度和亲和力，以及Teff对ADCC的敏感性与Treg对ADCC的敏感性的差异。IgG4形式的抗体在体内引发由巨噬细胞和单核细胞介导的FcγRI交联，
但使NK介导的靶向CD8
+
T细胞的ADCC效应减到最小。4
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1BB抗体的肝脏毒性也与其抗体本身的激动效果有关(Qi X等人，2019，Nat Commun 10:2141)，有研究指出，强激动型4
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1BB抗体在肝脏中非特性地激活了肝脏浸润的免疫细胞，造成不同程度的肝脏损伤；而弱激动型4
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1BB抗体由于其特定的表位，只能在免疫细胞更加富集的肿瘤组织被诱导激活，表现出更低肝脏毒性。
[0005]4‑
1BB激动剂抗体已经显示在狼疮、胶原蛋白诱发的关节炎和实验性自身免疫性脑脊髓炎的动物模型中有良好的改善效果。但是对于患有包括癌症在内适于用4
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1BB激动剂治疗的各种疾病的患者，仍需要展现足够安全且有效的新型激动性抗体。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中缺乏亲和力更好、毒副作用更小以及在体内抑制肿瘤生长效果更好的抗4
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1BB抗体药物，本领域亟需研发新的抗4
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1BB抗体药物，以解决现有相关上市药物或临床在研药物在药效方面不能与肝脏毒副作用平衡的局限性。本专利技术利用全人源天然抗体噬菌体展示文库的方法，筛选到了更有效和安全的4
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1BB激动剂。
[0007]本专利技术主要通过以下技术方案解决上述技术问题。
[0008]本专利技术的第一方面涉及一种特异性识别4
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1BB的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：
[0009]所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:38所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；或，
[0010]所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:40所示。
[0011]所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:39所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；或，
[0012]所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示，所述LC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向4
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1BB的抗体，其包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其特征在于，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:38所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:39所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；或，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:40所示，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示；优选地，SEQ ID NO:37的X1为T；SEQ ID NO:38的X2为G、X3为T和/或X4为Y；SEQ ID NO:39的X5为G、X6为S、X7为N和/或X8为P，或者X5为S且X8为R；SEQ ID NO:40的X9为G、X
10
为G、X
11
为Y和/或X
12
为S，或者X9为P且X
10
为V，或者X
11
为G且X
12
为Y。2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；或，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；或所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；或所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；或所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示；或，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:33所示，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示；或
所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:34所示，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示。3.如权利要求1或2所述的抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：李双琦，郎国竣，谭永聪，周蕴华，闫鑫甜，伏自波，
申请(专利权)人：三优生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：