一种靶向CD22同种异体通用CAR-T细胞的制备及用途制造技术

本发明专利技术公开了一种靶向CD22同种异体通用CAR

【技术实现步骤摘要】
一种靶向CD22同种异体通用CAR
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T细胞的制备及用途


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体而言，涉及一种靶向CD22同种异体通用CAR
‑
T细胞的制备及用途。

技术介绍

[0002]急性B淋巴细胞白血病(B cell
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acute lymphoblastic leukemia,B
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ALL)是急性淋巴细胞白血病(ALL)中最常见的一种类型，起源于B系淋巴前体细胞，其发病率约占ALL的85％；B
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ALL在儿童急性白血病中发病率约占80％，成人中约占20％。现有传统治疗手段可使80％的儿童长期无病生存，但成人只有30％～40％，总体仍有约50％以上患者会发生复发。靶向CD19的自体CAR
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T细胞在复发/难治性B
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ALL中的缓解率达70％～90％，但由于CAR
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T细胞自身原因、肿瘤细胞异质性及免疫抑制微环境等因素导致CAR
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T细胞治疗诱导的缓解往往不持久，复发率高达20％～70％，这可能与抗原丢失或潜在的纯合子突变存在一定关系。研究显示，在CD19 CAR
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T治疗的复发患者体内CD22仍然表达且未发生突变，因此CD22作为一个新的靶点或双靶点联合疗法对于B
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ALL复发的临床治疗具有重要意义。
[0003]CD22，又称为Siglec
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2，普遍存在于正常B细胞和B细胞来源的恶性肿瘤中。CD22的胞外段包括7个Ig样结构域和12个N
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糖基化位点；CD22属于抑制性受体，主要抑制BCR信号转导。研究显示CD22可作为治疗CD19 CAR
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T治疗后复发患者非常有前景的靶点，CD22与CD19双靶点CAR
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T可以减少因抗原丢失导致疗效降低的情况，从而提高持续缓解率。
[0004]在血液系统恶性肿瘤治疗中，自体CAR
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T细胞免疫疗法显示出良好的抗肿瘤效果，极大的提高了多种血液瘤患者的生存率，使得血液系统恶性肿瘤的治疗方式发生了革命性变化，并推动了其他免疫细胞疗法的发展。自体CAR
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T细胞输注后不会发生免疫排斥反应并在体内持续发挥作用，但是自体CAR
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T细胞疗法仍受诸多不利因素的影响而限制了应用，例如经过多线治疗的患者体内T细胞数量减少或T细胞功能受损导致质量下降，制备过程周期长、成本高等，使患者错过了最佳治疗窗口。随着CRISPR/Cas9等多种基因编辑技术的快速发展，对健康供者来源T细胞的TCR、B2M和CD52等介导个体间免疫反应的基因敲除，从而最大程度降低GvHD和HvGR，进而制备成“现货型”同种异体通用CAR
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T细胞(UCAR
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T)。UCAR
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T细胞疗法能够克服自体CAR
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T细胞诸多缺点并可通过标准化流程进行规模化制造，从而实现CAR
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T细胞治疗产品的批量化生产和产业化，同时显著降低治疗成本，使更多患者能够获益。
[0005]Nb被认为是目前发现的最小的(15kDa)具有结合完整抗原功能的抗体分子，与其他基因工程抗体相比，Nb具有高稳定性、高可溶性、高亲和力、特异性强、与不同蛋白分子偶联的灵活性和易改造以及优良的组织穿透性等特点，受到各领域的高度关注，在疾病治疗和检测等领域具有广阔的开发和应用价值。
[0006]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种靶向CD22同种异体通用CAR
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T细胞的制备及用途以解决目前CAR
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T细胞治疗B
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ALL诱导的缓解往往不持久，复发率高，疗效不佳的问题。
[0008]本专利技术是这样实现的：
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种抗CD22的纳米抗体，纳米抗体包括如下任一项所示的包含CDR1、CDR2和CDR3的重链可变区：
[0010](1)如SEQ ID No.1～3所示；
[0011](2)如SEQ ID No.5～7所示；
[0012](3)如SEQ ID No.9～11所示；
[0013](4)如SEQ ID No.13～15所示；
[0014]和(5)如SEQ ID No.17～19所示。
[0015]在本专利技术应用较佳的实施方式中，纳米抗体还包括骨架区；
[0016]在一种可选的实施方式中，纳米抗体为单价纳米抗体、多价纳米抗体、多特异性抗体和融合型纳米抗体中的至少一种；
[0017]在一种可选的实施方式中，当纳米抗体为单价纳米抗体时，纳米抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.4、8、12、16、20、21、22、23、24和25中任意一项所示。
[0018]第二方面，本专利技术还提供了一种抗体，其包括上述抗CD22的纳米抗体或包括抗CD22的纳米抗体的重链可变区。
[0019]第三方面，本专利技术还提供了一种核酸分子或包含核酸分子的重组载体，核酸分子编码上述的抗CD22的纳米抗体；或核酸分子编码上述的抗体。
[0020]在一种可选的实施方式中，重组载体为质粒或病毒；
[0021]在一种可选的实施方式中，病毒为腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、慢病毒或溶瘤病毒。
[0022]第四方面，本专利技术还提供了一种宿主细胞，其含有上述的重组载体；
[0023]在一种可选的实施方式中，宿主细胞选自原核宿主细胞、真核宿主细胞和噬菌体中的至少一种；
[0024]在一种可选的实施方式中，原核宿主细胞为大肠杆菌、链霉菌、枯草杆菌或分枝杆菌；
[0025]在一种可选的实施方式中，真核宿主细胞为动物细胞、植物细胞或真菌；
[0026]在一种可选的实施方式中，动物细胞选自哺乳动物细胞、昆虫细胞或秀丽隐杆线虫；
[0027]哺乳动物细胞选自293细胞、293T细胞、293FT细胞、CHO细胞、COS细胞、小鼠L细胞、LNCaP细胞、633细胞、Vero、BHK细胞、CV1细胞、Hela细胞、MDCK细胞、Hep
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2细胞和Per6细胞中的任一种；
[0028]在一种可选的实施方式中，真菌选自酿酒酵母、毕赤酵母、汉森酵母、假丝酵母、乳克鲁维酵母、构巢曲霉、粟酒裂殖酵母和解脂耶罗酵母中的任一种。
[0029]第五方面，本专利技术还提供了一种抗体的制备方法，其包括：培养上述的宿主细胞，以获得抗体。
[0030]第六方面，本专利技术还提供了一种免疫缀合物或药物组合物，其包括上述的抗CD22
的纳米抗体或上述的抗体；
[0031]在一种可选的实施方式中，免疫缀合物还包括治疗剂；
[0032]在一种可选的实施方式中，治疗剂包括：免疫检查点相关制剂、毒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗CD22的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括如下任一项所示的包含CDR1、CDR2和CDR3的重链可变区：(1)如SEQ ID No.1～3所示；(2)如SEQ ID No.5～7所示；(3)如SEQ ID No.9～11所示；(4)如SEQ ID No.13～15所示；和(5)如SEQ ID No.17～19所示。2.根据权利要求1所述的抗CD22的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体还包括骨架区；优选地，所述纳米抗体为单价纳米抗体、多价纳米抗体、多特异性抗体和融合型纳米抗体中的至少一种；优选地，当所述纳米抗体为单价纳米抗体时，所述纳米抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.4、8、12、16、20、21、22、23、24和25中任意一项所示。3.一种抗体，其特征在于，其包括权利要求1或2所述的抗CD22的纳米抗体或包括权利要求1或2所述的抗CD22的纳米抗体的重链可变区。4.一种核酸分子或包含所述核酸分子的重组载体，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1或2所述的抗CD22的纳米抗体；或所述核酸分子编码权利要求3所述的抗体；优选地，所述重组载体为质粒或病毒；优选地，所述病毒为腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、慢病毒或溶瘤病毒。5.一种宿主细胞，其特征在于，其含有权利要求4所述的重组载体；优选地，所述宿主细胞选自原核宿主细胞、真核宿主细胞和噬菌体中的至少一种；优选地，所述原核宿主细胞为大肠杆菌、链霉菌、枯草杆菌或分枝杆菌；优选地，所述真核宿主细胞为动物细胞、植物细胞或真菌；优选地，所述动物细胞选自哺乳动物细胞、昆虫细胞或秀丽隐杆线虫；所述哺乳动物细胞选自293细胞、293T细胞、293FT细胞、CHO细胞、COS细胞、小鼠L细胞、LNCaP细胞、633细胞、Vero、BHK细胞、CV1细胞、Hela细胞、MDCK细胞、Hep
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2细胞和Per6细胞中的任一种；优选地，所述真菌选自酿酒酵母、毕赤酵母、汉森酵母、假丝酵母、乳克鲁维酵母、构巢曲霉、粟酒裂殖酵母和解脂耶罗酵母中的任一种。6.一种抗体的制备方法，其特征在于，其包括：培养权利要求5所述的宿主细胞，以获得抗体。7.一种免疫缀合物或药物组合物，其特征在于，其包括权利要求1或2所述的抗CD22的纳米抗体或权利要求3所述的抗体；优选地，所述免疫缀合物还包括治疗剂；优选地，所述治疗剂包括：免疫检查点相关制剂、毒素、因子、化疗药物、放射性核素、激酶抑制剂和细胞毒性剂中的至少一种；优选地，所述药物组合物包括药用赋形剂、载体和稀释剂中的至少一种。8.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域包括如权利要求1或2所述的抗CD22纳米抗体或权利要求3所述的抗体；
优选地，所述嵌合抗原受体还包括信号肽、铰链区、跨膜区和信号转导结构域；优选地...

【专利技术属性】
技术研发人员：仝爱平，路琪中，李和贤，朱志雄，虞正禹，牛挺，魏于全，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：