特异性结合c-Met的抗体、嵌合抗原受体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物与医药技术领域，特别涉及一种特异性结合c

【技术实现步骤摘要】
ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
[0008]进一步地，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO：4所示的重链可变区和如SEQ ID NO：9所示的轻链可变区。进一步地，所述抗体或其抗原结合片段为单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、全人源抗体、Fab、Fab
’
、Fv片段、F(ab
’
)2、scFv或di
‑
scFv。进一步地，所述抗体或其抗原结合片段为scFv。进一步地，所述抗体或其抗原结合片段还包含连接所述重链可变区和所述轻链可变区的接头。进一步地，所述接头具有如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。进一步地，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列。
[0009]在另一个方面，本专利技术提供了一种嵌合抗原受体，其包含c
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Met抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。
[0010]进一步地，所述c
‑
Met抗原结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。进一步地，所述c
‑
Met抗原结合结构域包含如SEQ ID NO：4所示的重链可变区和如SEQ ID NO：9所示的轻链可变区。进一步地，所述c
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Met抗原结合结构域还包含连接所述重链可变区和所述轻链可变区的接头。进一步地，所述接头具有如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。进一步地，所述c
‑
Met抗原结合结构域包含如SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列。进一步地，所述跨膜结构域具有如SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。进一步地，所述胞内信号传导结构域包含4
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1BB共刺激信号分子和人CD3ζ信号传导结构域。进一步地，所述4
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1BB共刺激信号分子具有如SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列。进一步地，所述人CD3ζ信号传导结构域具有如SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列。进一步地，所述嵌合抗原受体还包含连接所述c
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Met抗原结合结构域和跨膜结构域的铰链区。进一步地，所述铰链区具有如SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列。进一步地，所述嵌合抗原受体在其N端还包含信号肽。进一步地，所述信号肽具有如SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列。进一步地，所述嵌合抗原受体具有如SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列。进一步地，所述嵌合抗原受体在其C端还包含hIL7和hIL21的氨基酸序列。进一步地，所述嵌合抗原受体具有如SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列。
[0011]在另一个方面，本专利技术提供了一种分离的核酸分子，其编码如本文所述的抗体或其抗原结合片段或嵌合抗原受体。
[0012]在另一个方面，本专利技术提供了一种表达载体，其包含如本文所述的核酸分子。
[0013]在另一个方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，其包含如本文所述的表达载体。进一步地，所述宿主细胞包括免疫细胞，进一步地，所述免疫细胞包括T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、巨噬细胞或树突状细胞或其任意组合。
[0014]在另一个方面，本专利技术提供了一种药物组合物，其包含如本文所述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、表达载体或宿主细胞，以及任选地药学上可接受的载体和/或赋形剂。
[0015]在另一个方面，本专利技术提供了一种试剂盒，其包含如本文所述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、表达载体或宿主细胞。
[0016]在另一个方面，本专利技术提供了如本文所述的抗体或其抗原结合片段、嵌合抗原受
体、核酸分子、表达载体、宿主细胞、药物组合物或试剂盒在制备用于预防和/或治疗过表达c
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MET的癌症的药物中的用途。进一步地，所述过表达c
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MET的癌症包括胃癌。
[0017]定义
[0018]如本文中所使用的，术语“抗体”指能够通过位于免疫球蛋白分子可变区的至少一个抗原识别位点特异性结合靶(如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等)的免疫球蛋白分子。如本文所用，该术语不仅包括完整的多克隆或单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、全人源抗体，而且包括其抗原结合片段(例如Fab、Fab'、F(ab
’
)2、Fv片段、单链(例如scFv，di
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scFv，(scFv)2)和结构域抗体(包括例如鲨鱼和骆驼抗体)、以及包括抗体的融合蛋白、以及包括抗原识别位点的任何其它修饰构型的免疫球蛋白分子。本专利技术的抗体不受任何特定的产生抗体的方法限制。
[0019]如本文中所使用的，“抗原结合片段”此用语包括这些抗体的抗原化合物结合片段，包括Fab、F(ab
’
)2、Fd、Fv、scFv、抗体最小识别单位，以及这些抗体和片段的单链衍生物，例如scFv
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Fc等，优选地为scFv。
[0020]术语“scFv”意指包含通过接头连接的抗体重链可变结构域(或区域；VH)和抗体轻链可变结构域(或区域；VL)的分子，其保留结合抗原的能力。此类scFv分子可具有一般结构：NH2‑
VL
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接头
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VH
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COOH或NH2‑
VH
‑
接头
‑
VL
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COOH。如本文中所使用的，在scFv中使用的接头不受限制，其可以是本领域熟知用于在scFv中连接VH和VL的任何接头。作为一个实例，跨膜结构域可以具有如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列。
[0021]如本文中所使用的，术语“嵌合抗原受体”或“CAR”通常是指一组多肽，在最简单的实施方案中通常有两种，其当在免疫效应细胞中时，提供细胞对靶细胞(通常为癌细胞)的特异性，并产生胞内信号。在一些实施方案中，CAR包含至少一个胞外抗原结合结构域(如VHH、scFv或其部分)，跨膜结构域和胞质信号传导结构域(本文中也称为“胞内信号传导结构域”)，其包含衍生自刺激分子和/或共刺激分子的功能性信号传导结构域。
[0022]如本文中所使用的，在嵌合抗原受体中使用的跨膜结构域不受限制，其可以是本领域熟知用于构建嵌合抗原受体的任何跨膜结构域。作为一个实例，跨膜结构域可以具有如SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。如本文中所使用的，在嵌合抗原受体中使用的胞内信号传导结构域不受限制，其可以是本领域熟知用于构建嵌合抗原受体的任何胞内信号传导结构域。作为一个实例，胞内信号传导结构域可以包含4
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1BB共刺激信号分子和人CD3ζ信号传导结构域。进一步地，所述4
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合c
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Met的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO：4所示的重链可变区和如SEQ ID NO：9所示的轻链可变区，优选地，所述抗体或其抗原结合片段为单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、全人源抗体、Fab、Fab
’
、Fv片段、F(ab
’
)2、scFv或di
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scFv，优选地，所述抗体或其抗原结合片段为scFv，优选地，所述抗体或其抗原结合片段还包含连接所述重链可变区和所述轻链可变区的接头，优选地，所述接头具有如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列，优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列。3.一种嵌合抗原受体，其包含c
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Met抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，其中所述c
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Met抗原结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含分别如SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。4.根据权利要求3所述的嵌合抗原受体，其中所述c
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Met抗原结合结构域包含如SEQ ID NO：4所示的重链可变区和如SEQ ID NO：9所示的轻链可变区，优选地，所述c
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Met抗原结合结构域还包含连接所述重链可变区和所述轻链可变区的接头，优选地，所述接头具有如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列，优选地，所述c
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Met抗原结合结构域包含如SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列，优选地，所述跨膜结构域具有如SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列，优选地，所述胞内信号传导结构域...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉民，张正潮，滕牧洲，周文策，赵阳，唐富天，
申请(专利权)人：兰州大学第二医院，
类型：发明
国别省市：