与CLD18A2特异性结合的分子制造技术

本公开提供了与CLD18A2特异性结合的分子，其包含免疫球蛋白单可变结构域。本公开还提供了编码所述与CLD18A2特异性结合的分子的核酸分子，用于表达与CLD18A2特异性结合的分子的表达载体和宿主细胞。本公开进一步提供了产生所述CLD18A2特异性结合的分子的方法及其用于治疗或预防与CLD18A2相关的病症的用途。

【技术实现步骤摘要】
与CLD18A2特异性结合的分子序列表本申请包含序列表，并且其全部内容通过引用并入本文。
本申请一般而言涉及抗体。更具体地，本申请涉及与CLD18A2特异性结合的分子、其制备方法及其用途。
技术介绍
细胞连接是细胞间的联系结构，是多细胞有机体中相邻细胞之间相互联系、协同作用的重要基础。一般而言，动物细胞有四种类型的连接:紧密连接、粘着连接、间隙连接和桥粒/半桥粒。紧密连接，也称为封闭连接，是在内皮细胞或者上皮细胞间形成的结构，可以防止组织间的物质从细胞间隙中扩散，从而只能通过主动运输进入细胞。紧密连接的结构由几十种Claudin蛋白通过细胞内和细胞间的蛋白质相互作用形成，而这些蛋白质的表达具有一定的组织特异性。CLDN18就是紧密连接中存在的Claudin蛋白中的一种重要的蛋白质。CLDN18是具有四次跨膜区域的膜蛋白，含有两个胞外结构域。人体内存在两种CLDN18变体，分别是CLDN18.1和CLDN18.2(亦称为“CLD18A2”)。两者分布于不同的组织，前者主要表达在肺上皮细胞中，后者则特异性表达在胃上皮细胞中，且在胃干细胞中不表达。在蛋白序列上，CLDN18.1和CLDN18.2的序列相似度极高，两者的主要差别在N端，在第一个胞外结构域两者仅存在8个氨基酸的差别；除了N端之外，C端序列完全一致。抗体疗法正在成为治疗癌症患者的最有前途的方法之一。CLDN18.2由于其在肿瘤细胞和正常组织中的表达特异性，目前已经成为非常有潜力的一个抗体药物作用靶点。然而，由于CLDN18.1和CLDN18.2的序列相似性极高，使得开发只针对CLDN18.2而不针对CLDN18.1的抗体极其困难。针对CLDN18.2靶点研发抗体药物较早的是德国的Ganymed公司，其研制的IMAB362是一种由两条蛋白重链和两条蛋白轻链组成的单克隆抗体。但是截至目前，尚未见到有靶向CLDN18.2的单结构域抗体的临床在研药物的报道。单结构域抗体简称单域抗体(singledomainantibody，sdAb)，是由单个单体可变抗体结构域(如抗体重链可变结构域)组成的抗体。像整个抗体(如IgG)一样，它能够选择性结合特定的抗原。但单结构域抗体的分子量却远小于由两条蛋白重链和两条蛋白轻链组成的常见抗体。第一个单结构域抗体是由骆驼科动物中发现的重链抗体改造而来的(Hamers-CastermanC，AtarhouchT，MuyldermansS，RobinsonG，HamersC，SongaEB，BendahmanN，HamersR(1993)Naturallyoccurringantibodiesdevoidoflightchains.Nature363(6428):446–448.)；这些骆驼科动物中发现的重链抗体也被称为VHH片段。目前，对单结构域抗体的大多数研究基于重链可变结构域。单结构域抗体具有许多优点。例如，它们通常表现出较高的溶解度、良好的热稳定性和组织渗透性，单结构域抗体由于存在第二对分子内二硫键还可耐受木瓜蛋白酶等的降解；此外，单结构域抗体可以在酵母、植物和哺乳动物细胞等多种宿主细胞中表达，且表达量较高，使得其具有极高的成本优势。单结构域抗体的优势使其适用于各种生物技术和治疗应用。例如，它们可用于治疗疾病，包括但不限于癌症、感染性疾病、炎症性疾病和神经退行性疾病。虽然目前已经有靶向CLDN18.2靶点的临床在研单克隆抗体药物，但作为治疗剂，仍有继续开发靶向CLDN18.2靶点抗体的迫切需要。本领域希望开发新的靶向CLDN18.2的抗体，特别是只特异性识别CLDN18.2而不识别CLDN18.1的单结构域抗体。
技术实现思路
广义而言，本公开提供抗体的新型化合物、制备方法、组合物和制品。本公开提供的益处广泛地适用于抗体治疗和诊断领域。更具体而言，本公开提供了靶向CLDN18.2的单结构域抗体，以及制备所述抗体的方法、用于表达所述抗体的表达载体和宿主细胞等。本公开的抗体提供了治疗或预防与Claudin蛋白相关、特别是与CLDN18.2相关的病症的方法及其应用。本专利技术人发现了与CLDN18.2特异性结合的分子，即能够特异性结合人CLDN18.2的胞外结构域1(ECD1)的CLDN18.2结合分子(如靶向CLDN18.2的单结构域抗体)。本公开至少包括以下实施方案，其分别以“N”(其中“N”表示数字)的方式进行排序和列举。以下列举非穷尽性的，并且本领域技术人员可对不同的技术方案进行组合。1.CLDN18.2结合分子，其包含至少一个免疫球蛋白单可变结构域，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含CDR1、CDR2和CDR3，并且其中CDR1在氨基酸序列上与SEQIDNO:1、4或7所示的序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异；CDR2在氨基酸序列上与SEQIDNO:2、5或8所示的序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异；和/或CDR3在氨基酸序列上与SEQIDNO:3、6或9所示的序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异。2.实施方案1的CLDN18.2结合分子，其中所述CLDN18.2结合分子是针对CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段。3.前述实施方案中任一项的CLDN18.2结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域是VHH；例如，来自骆驼科动物(例如羊驼)的VHH。4.前述实施方案中任一项的CLDN18.2结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含:i)SEQIDNO:1、4或7所示的CDR1；ii)SEQIDNO:2、5或8所示的CDR2；和iii)SEQIDNO:3、6或9所示的CDR3。5.前述实施方案中任一项的CLDN18.2结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含:(a)SEQIDNO:1所示氨基酸序列的CDR1，SEQIDNO:2所示氨基酸序列的CDR2和SEQIDNO:3所示氨基酸序列的CDR3；(b)SEQIDNO:4所示氨基酸序列的CDR1，SEQIDNO:5所示氨基酸序列的CDR2和SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的CDR3；或(c)SEQIDNO:7所示氨基酸序列的CDR1，SEQIDNO:8所示氨基酸序列的CDR2和SEQIDNO:9所示氨基酸序列的CDR3。6.前述实施方案中任一项所述的CLDN18.2结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含或由以下序列组成:(A)SEQIDNO:10、11、12、13、14或15所示的氨基酸序列；(B)与SEQIDNO:10、11、12、13、14或15所示的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％或99％相同的氨基酸序列；或(C)与SEQIDNO:10、11、12、13、14或15相比具有一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸的添加、缺失和/或取代的氨基酸序列，优选地，所述添加、缺失和/或取代不发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CLDN18.2结合分子，其包含至少一个免疫球蛋白单可变结构域，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含CDR1、CDR2和CDR3，并且其中CDR1在氨基酸序列上与SEQ ID NO:1、4或7所示的序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异；CDR2在氨基酸序列上与SEQ ID NO:2、5或8所示的序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异；和/或CDR3在氨基酸序列上与SEQ ID NO:3、6或9所示的序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异。/n

【技术特征摘要】
1.CLDN18.2结合分子，其包含至少一个免疫球蛋白单可变结构域，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含CDR1、CDR2和CDR3，并且其中CDR1在氨基酸序列上与SEQIDNO:1、4或7所示的序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异；CDR2在氨基酸序列上与SEQIDNO:2、5或8所示的序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异；和/或CDR3在氨基酸序列上与SEQIDNO:3、6或9所示的序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异。


2.权利要求1所述的CLDN18.2结合分子，其中所述CLDN18.2结合分子是针对CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段。


3.前述权利要求中任一项所述的CLDN18.2结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域是VHH；例如，来自骆驼科动物(例如羊驼)的VHH。


4.前述权利要求中任一项所述的CLDN18.2结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含:
i)SEQIDNO:1、4或7所示氨基酸序列的CDR1；
ii)SEQIDNO:2、5或8所示氨基酸序列的CDR2；和
iii)SEQIDNO:3、6或9所示氨基酸序列的CDR3。


5.前述权利要求中任一项所述的CLDN18.2结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含:
(a)SEQIDNO:1所示的CDR1，SEQIDNO:2所示的CDR2和SEQIDNO:3所示的CDR3；
(b)SEQIDNO:4所示的CDR1，SEQIDNO:5所示的CDR2和SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的CDR3；或
(c)SEQIDNO:7所示的CDR1，SEQIDNO:8所示的CDR2和SEQIDNO:9所示的CDR3。


6.前述权利要求中任一项所述的CLDN18.2结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含或由以下序列组成:
(A)SEQIDNO:10、11、12、13、14或15所示的氨基酸序列；
(B)与SEQIDNO:10、11、12、13、14或15所示的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％或99％相同的氨基酸序列；或
(C)与SEQIDNO:10、11、12、13、14或15相比具有一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸的添加、缺失和/或取代的氨基酸序列，优选地，所述添加、缺...

【专利技术属性】
技术研发人员：郎国竣，谭永聪，刘婵娟，孔超，孙敏敏，沈青山，王素琼，
申请(专利权)人：三优生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31