一种棉花转化事件KJC003及其应用制造技术

本申请公开了一种棉花转化事件KJC003，其特征在于，特征基因序列包含转基因表达盒，所述转基因表达盒的核苷酸序列为SEQ ID NO:9。本发明专利技术还提供了用于检测棉花转化事件KJC003的引物对，以及检测方法。本发明专利技术的转化事件KJC003的棉花能够同时耐受草甘膦和抵抗鳞翅目害虫的侵染，且结铃、吐絮均不受影响，有利于控制田间杂草，田间害虫，同时提高耕作效率和产量。

【技术实现步骤摘要】
一种棉花转化事件KJC003及其应用
本申请本专利技术涉及植物生物
，主要涉及一种用于棉花抗草甘膦和抗鳞翅目害虫的转化事件KJC003及其在棉花育种中的应用。
技术介绍
棉花(陆地棉)在世界上许多地区是重要的经济作物，为了生产具有所需性状的棉花，已将生物技术方法应用于这种作物。一种此类所需性状是除草剂耐受性，一种此类所需性状是抗虫性。除草剂耐受性转基因在植物中的表达能够赋予植物所需的除草剂耐受性状，抗虫性转基因在植物中的表达课赋予植物所需的抗虫性状。许多不同的因素影响转基因的表达，但是转基因的表达可能受到转基因插入的染色体位置和基因组结果的影响。例如，已经在植物中观察到，在转基因的染色体插入位点方面不同但在其他方面都相同的单个事件之间，通常存在着转基因表达水平和模式的变异。在事件之间还可能存在不想要的和/或想要的表型或农学差异。因此，为了选择具有所需性状和使其适合于商业化目的所需的最适表型和农业特性两者的事件，通常需要产生并分析大量单个植物转化事件。这样的选择通常需要经过多年、在多个地点并在多种不同条件下对许多事件进行温室和田间试验，以便可以收集到大量农艺学、表型和分子数据。然后必须由科学家和农学家对得到的数据进行分析，其目的是选择商业上适合的事件。这样的事件一旦被选择，随后可能用于使用植物育种方法将所需性状渗入到其他遗传背景中，并由此产生含有所需性状并适当地适应于特定当地生长条件的大量不同作物品种，这些作物品种含有所需性状并且适当的适应特定的当地农艺条件。
技术实现思路
在研究过程中，申请人发现了一个可使棉花获得抗草甘膦性状和抗虫(鳞翅目)的转基因表达盒，转基因的棉花植株在高剂量草甘膦和鳞翅目害虫的侵染的情况下仍正常生长。本专利技术的一个方面在于提供一种棉花抗草甘膦和抗虫转化事件KJC003，其特征基因序列包含转基因表达盒，所述转基因表达盒的核苷酸序列为SEQIDNO:9。在根据本专利技术的一个实施方案中，所述特征基因序列还包含5'端连接序列，所述5'连接序列选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5或SEQIDNO:7中的任一个。在根据本专利技术的一个实施方案中,所述特征基因序列还包含3'端连接序列，所述3'端连接序列选自SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6和SEQIDNO:8中的任一个。在根据本专利技术的一个实施方案中，所述特征基因序列为核苷酸序列为SEQIDNO:10的基因序列或其互补序列。在根据本专利技术的一个实施方案中，所述特征序列位于四倍体棉花的D基因组第8组染色体上。本专利技术的另一方面在于提供用于检测上述的棉花转化事件KJC003的引物对，所述引物对包含特异性识别侧翼序列的第一引物对和/或第二引物对，所述第一引物对由SEQIDNO:11和SEQIDNO:12(P681：5’-CCAGAATCCTTGTCAGATT-3’和D08-3242F：5’-TACGGCTTATCACCCTCA-3’)组成；所述第二引物对由SEQIDNO:13和SEQIDNO:14组成。FMV1：5’-ATAAAGGCAAAGATGCTTTTGGTAGGTG-3’和D08-277R：5’-TTTCCTTGTGGTCAGTTT-3’。本专利技术进一步提供了一种鉴定棉花生物样品中棉花转化事件KJC003的方法，其包括:(a)从待鉴定的棉花生物样品提取DNA样品；(b)以提取的DNA样品为模板,使用第一引物对(SEQIDNO：11和SEQIDNO:12)和第二引物对(SEQIDNO：13和SEQIDNO:14)进行PCR扩增；(c)检测PCR扩增产物的长度与棉花转化事件KJC003中的理论核苷酸序列长度比较。若以第一引物对扩增得到的扩增产物的核苷酸序列长度为1177bp，或以第二引物扩增等到的扩增产物的核苷酸序列长度为614bp，则表明样品中存在棉花抗草甘膦抗虫转化事件KJC003。进一步的，上述用途包括具备棉花抗草甘膦抗虫转化事件KJC003的棉花植株、棉花植物细胞、种子、子代植株、杂交植株、棉油、棉花蛋白质、棉花商品产品等等。本专利技术的另一方面在于提供上述的转化事件KJC003以提高棉花对草甘膦和鳞翅目害虫的抗性，进行棉花育种或用作分子标记的用途。附图说明图1所示为棉花抗草甘膦抗虫转化事件KJC003中基因表达盒在包含事件KJC003的棉花植物的基因组中的结构。图2为棉花抗草甘膦抗虫转化事件KJC003T2代抗草甘膦的测试，其中，右侧为对照组的非转基因新陆早45，左侧为本专利技术的抗草甘膦抗虫转化事件KJC003T2代棉花。对照株和实验株在棉花4叶期分别喷施浓度1×(840gae/ha)草甘膦，喷施10天后观察，拍照，全生育期跟踪棉花生长、开花、结铃、吐絮情况。图3为棉花抗草甘膦抗虫转化事件KJC003T2代抗棉铃虫测试，其中，测试用虫为初孵的棉铃虫。左侧为对照组的非转基因新陆早45，右侧为本专利技术的抗草甘膦抗虫转化事件KJC003T2代棉花。图4为棉花抗草甘膦抗虫转化事件KJC003T2代抗小地老虎测试，其中，测试用虫为初孵的小地老虎。左侧为对照组的非转基因新陆早45，右侧为本专利技术的抗草甘膦抗虫转化事件KJC003T2代棉花。图5为棉花抗草甘膦抗虫转化事件KJC003T2代的接虫试验。左侧为对照组的非转基因新陆早45，右侧为本专利技术的抗草甘膦抗虫转化事件KJC003T2代棉花。图6为棉花抗草甘膦转化事件KJC003的检测结果图，其中，M：Trans2KplusII，分子量标准从上到下依次为8kb、5kb、3kb、2kb、1kb、750bp、500bp、250bp、100bp；泳道1和2以KJC003T2代的2个单株DNA为模板扩增产物(1177bp)，泳道3以质粒DNA为模板扩增产物，泳道4以新陆早45DNA为对照模板扩增产物，泳道5以ddH2O为模板PCR产物；图7为棉花抗草甘膦转化事件KJC003的检测结果图，其中，M：Trans2KplusII，分子量标准从上到下依次为8kb、5kb、3kb、2kb、1kb、750bp、500bp、250bp、100bp；泳道1和2以KJC003T2代的2个单株DNA为模板扩增产物(614bp)，泳道3以质粒DNA为模板扩增产物，泳道4以新陆早45DNA为对照模板扩增产物，泳道5以ddH2O为模板PCR产物；具体实施方式以下实施例用于说明本申请，但不用来限制本申请的范围。下面将更详细地描述本申请的具体实施例。提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本申请，并且能够将本申请的范围完整的传达给本领域的技术人员。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本申请的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本申请的范围。本申请的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。“引物”通常是高度纯化的分离的多核苷酸，其被设计用于涉及热本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种棉花转化事件KJC003，其特征在于，特征基因序列包含转基因表达盒，所述转基因表达盒的核苷酸序列为SEQ ID NO:9。/n

【技术特征摘要】
1.一种棉花转化事件KJC003，其特征在于，特征基因序列包含转基因表达盒，所述转基因表达盒的核苷酸序列为SEQIDNO:9。


2.如权利要求1所述的棉花转化事件KJC003，其特征在于，所述特征基因序列还包含5'端连接序列，所述5'连接序列选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5或SEQIDNO:7中的任一个。


3.如权利要求1所述的棉花转化事件KJC003，其特征在于，所述特征基因序列还包含3'端连接序列，所述3'端连接序列选自SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6和SEQIDNO:8中的任一个。


4.如权利要求1所述的棉花转化事件KJC003，其特征在于，所述特征基因序列为核苷酸序列为SEQIDNO:10的基因序列或其互补序列。


5.如权利要求4所述的棉花转化事件KJC003，其特征在于，所述特征序列位于四倍体棉花的D基因组第8组染色体上。


6.如权利要求1所述的棉花转化事件KJC003可以有效的提高棉花对草甘膦的耐受性。


7.如权利要求1所述的棉花转化事件KJC003可以有效的提高棉花对害虫侵染的抵抗。


8.如权利要求7所述的害虫是鳞翅目的害虫。


9.如权利要求8所述的鳞翅目的害虫是小地老虎或者棉铃虫。


10.用于检测权利要求1-5中任一项所述的棉花转化事件KJC003的引物对，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蕾，罗祖勇，裴睿丽，祁幼林，孟钊红，杨敏，田爱菊，王琪，李莹莹，李秀影，葛玉君，黎跃进，李相敢，
申请(专利权)人：科稷达隆生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11