本申请公开了一组新型的FN3类抗体突变体及其应用。其中，所述突变体对应原FN3类抗体包括以下突变位点：第85位A被E取代和第87位Y被M取代。原FN3类抗体的氨基酸序列如SEQ ID No：2所述；所述突变体对应原FN3类抗体包括以下突变位点：第35位Y被S取代、第56位P被L取代、第85位A被E取代和第87位Y被M取代。原FN3类抗体的氨基酸序列如SEQ ID No：2所述；所述突变体对应原FN3类抗体包括以下突变位点：第56位P被L取代、第85位A被E取代和第87位Y被M取代。原FN3类抗体的氨基酸序列如SEQ ID No：2所述。
【技术实现步骤摘要】
一组新型的FN3类抗体突变体及其应用
本专利技术是关于一个或多个新型FN3支架类抗体及其在试剂检测及医药上的应用。涉及生物蛋白及生物技术的领域。
技术介绍
FN3支架类抗体是基于人源Ⅲ型第十纤连蛋白结构域的类抗体，只有10kDa，分子量小，渗透性好，结构稳定。由高度稳定的β折叠区和三个环状可变区构成。类抗体支架蛋白的应用前景广阔，既可以在基础研究中发挥重大作用，又能应用于临床诊断与治疗。与传统的抗体药物相比，它具有很多明显的优势，包括低成本、胞内高稳定性、弱免疫效应以及口服易吸收等重要性质，已成为药物研发的热点领域之一。HA4类抗体是JohnWojcik等通过噬菌体展示技术发现的一个FN3支架类抗体，它可以特异性的与人ABL1蛋白的SH2亚基结合。(JohnWojciketal.ApotentandhighlyspecificFN3monobodyinhibitoroftheAblSH2domainNATURESTRUCTURAL&MOLECULARBIOLOGY.17，519-527(2010))费城染色体(Philadelphiachromosome,Ph(orPh')chromosome)，或称费城染色体易位(Philadelphiatranslocation)，是一种与慢性粒细胞性白血病(chronicmyelogenousleukemia,CML)相关的特殊染色体易位现象。其中细胞的9号染色体长臂与22号染色体长臂进行相互易位，具体定义为t(9；22)(q34；q11)。这一染色体易位现象与慢性粒细胞性白血病有高度的灵敏度，有95％的慢性粒细胞性白血病患者被检测有此染色体易位(剩余的人群则是或存在一种G显带染色体制备过程中的隐形易位，或是存在其他多变的染色体易位情况)。染色体易位是费城染色体中染色体缺失的主要原因。在九号染色体中长链的ABL1基因(位置q34)与二十二号染色体上长链的BCR基因(位置q11)发生并列性易位而产生一种新的融合基因(fusiongene)。根据国际人类细胞遗传学术语命名法(英语：InternationalSystemforHumanCytogeneticNomenclature)，这种染色体易位被称为“t(9；22)(q34；q11)”。这种易位产生了一种致癌的BCR-ABL1融合基因，位于因此变短的22号染色体的长链上。此基因产生出一种BCR-ABL1融合蛋白。因为该融合基因的分子重量为185至210kDa，其也被称为p185或p210。ABL1是一种酪氨酸激酶；在正常细胞中，它在细胞分化和细胞周期调控方面发挥重要作用。BCR-ABL1融合基因会导致酪氨酸激酶的组成性激活，从而导致不受控制的细胞增殖，从而产生癌变。JohnWojcik等试验证实：在细胞内的HA4类抗体通过与ABL1的SH2亚基结合从而可以抑制ABL1的磷酸化过程，并抑制STAT5的活性，抑制酪氨酸激酶的组成性激活。这表明获得HA4抗体有可能成为抗癌候选药物，或用于BCR-ABL1导致的癌症的机理的研究等等。在前人研究的基础上，我们经过不懈的科学研究和实验，用生物技术的方法筛选到HA4的突变体，分别命名为KJDL2、KJDL7、KJDL9(以下文中以KJDL指代所有的突变体)，新的突变体与ABL1蛋白有更好的亲和力，成为更好的抗癌药物或者检测试剂盒的候选。同时我们的研究也发现，A85E和Y87M是影响亲和力的两个关键性的氨基酸突变，当HA4的氨基酸序列上发生A85E和Y87M的突变后，再与其他位点的突变组合产生的新的类抗体与ABL1蛋白的亲和力均有提高。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一个或者多个突变位点和突变后的氨基酸。包括上述突变的类抗体体与ABL1蛋白有更强的亲和力，可成为抗癌药物的候选药物或者应用于其他医药等领域。本专利技术的另一目的是提供一个在氨基酸序列位点85上发生从A到E的突变和在氨基酸序列位点87上发生从Y到M的突变，突变前的氨基酸序列如SEQIDNo：2所述。包括上述突变的类抗体与ABL1蛋白有更强的亲和力，可成为抗癌药物的候选药物或者应用于其他医药等领域。优选地，所述抗体的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo：4所示。本专利技术的另一目的是提供一个在氨基酸序列位点56上发生从P到L的突变、在氨基酸序列位点85上发生从A到E的突变、和在氨基酸序列位点87上发生从Y到M的突变，突变前的氨基酸序列如SEQIDNo：2所述。包括上述突变的类抗体与ABL1蛋白有更强的亲和力，可成为抗癌药物的候选药物或者应用于其他医药等等领域。优选地，所述抗体的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo：8所示。本专利技术的另一目的是提供一个在氨基酸序列位点35上发生从Y到S的突变、在氨基酸序列位点56上发生从P到L的突变、在氨基酸序列位点85上发生从A到E的突变、和在氨基酸序列位点87上发生从Y到M的突变，突变前的氨基酸序列如SEQIDNo：2所述。包括上述突变的类抗体与ABL1蛋白有更强的亲和力，可成为抗癌药物的候选药物或者应用于其他医药等等领域。优选地，所述抗体的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo：6所示。本专利技术的另一目的是提供一个人源的FN3类抗体突变体，由高度稳定的β折叠区和三个环状可变区组成，该环状可变区包括BCLoop、DELoop、和FGLoop。所述BCLoop的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO：9的第28-35位氨基酸，其中，X1选自Y和S中的任一个；所述DELoop的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO：9的第57-60位氨基酸；所述FGLoop的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO：9的第90-102位氨基酸。上述突变的类抗体与ABL1蛋白有更强的亲和力，可成为抗癌药物的候选药物或者应用于其他医药等等领域。本专利技术的另一目的是提供一个人源的FN3类抗体突变体，由高度稳定的β折叠区和三个环状可变区组成，该环状可变区包括BCLoop、DELoop、和FGLoop。所述BCLoop的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO：10的第28-35位氨基酸，其中，X1选自Y和S中的任一个；所述DELoop的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO：10的第57-60位氨基酸；所述FGLoop的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO：10的第90-102位氨基酸。上述突变的类抗体与ABL1蛋白有更强的亲和力，可成为抗癌药物的候选药物或者应用于其他医药等等领域。本专利技术的另一目的是提供一个人源的FN3类抗体突变体的氨基酸序列，氨基酸序列如SEQIDNO：4所述。此类抗体与ABL1蛋白有更强的亲和力，可成为抗癌药物的候选药物或者应用于其他医药等领域。本专利技术的另一目的是提供一个人源的FN3类抗体突变体的氨基酸序列，氨基酸序列如SEQIDNO：6所述。此类抗体与ABL1蛋白有更强的亲和力，可成为抗癌药物的候选药物或者应用于其他医药等领域。本专利技术的另一目的是提供一个人源的FN3类抗体突变体的氨基酸序列，氨基酸序列如SEQIDNO：8所述。此类抗体与ABL1蛋白有更强的亲和力，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一个人源的FN3类抗体突变体，其特征在于，所述突变体对应原FN3类抗体包括以下突变位点：第85位A被E取代和第87位Y被M取代。原FN3类抗体的氨基酸序列如SEQ ID No：2所述。/n
【技术特征摘要】
1.一个人源的FN3类抗体突变体，其特征在于，所述突变体对应原FN3类抗体包括以下突变位点：第85位A被E取代和第87位Y被M取代。原FN3类抗体的氨基酸序列如SEQIDNo：2所述。
2.一个人源的FN3类抗体突变体，其特征在于，所述突变体对应原FN3类抗体包括以下突变位点：第35位Y被S取代、第56位P被L取代、第85位A被E取代和第87位Y被M取代。原FN3类抗体的氨基酸序列如SEQIDNo：2所述。
3.一个人源的FN3类抗体突变体，其特征在于，所述突变体对应原FN3类抗体包括以下突变位点：第56位P被L取代、第85位A被E取代和第87位Y被M取代。原FN3类抗体的氨基酸序列如SEQIDNo：2所述。
4.一个人源的FN3类抗体突变体，其特征在于，所述FN3支架类抗体包括BCLoop、DELoop、和FGLoop；所述BCLoop的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO：9的第28-35位氨基酸PMSSSSVX1，其中，X1选自Y和S中的任一个；所述DELoop的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO：9的第57-60位氨基酸YSSS；所述FGLoop的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO：9的第90-102位氨基酸WGEDSEGMMFMYS。
5.一个人源的FN3类抗体突变体，其特征在于，所述FN3支架类抗体包括BCLoop、DELoop、和FGLoop；所述BCLoop的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO：10的第28-35位氨基酸PMSSSSVX1，其中，X1选自Y和S中的任一个；所述DELoop的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO：10的...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋哲，秦耀斌，祁幼林，侯丽敏，董秋平，张婷，岳飞飞，李相敢，黎跃进，
申请(专利权)人：科稷达隆生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。