用于以高效率从植物原生质体生成基因组工程改造的植物的方法技术

本发明专利技术涉及一种通过使用Cas蛋白‑指导RNA核糖核蛋白(RNP)增加从植物原生质体再生的基因组修饰的植物的生成效率的方法。本发明专利技术的用于增加基因组修饰的植物的生成效率的方法可有效地生成具有突变的靶基因的植物，并且还可使外源DNA插入植物的情况最小化。因此，本发明专利技术可非常有用地用于多种领域，诸如农业、食品和生物技术领域。

【技术实现步骤摘要】
用于以高效率从植物原生质体生成基因组工程改造的植物的方法本申请是申请号为201680065239.4(国际申请号PCT/KR2016/011216)，申请日：2016年10月06日，优先权日：2015年10月06日的中国专利技术专利申请(专利技术名称：用于以高效率从植物原生质体生成基因组工程改造的植物的方法)的分案申请。
本专利技术涉及一种通过将Cas蛋白和指导RNA引入植物原生质体而增加从植物原生质体再生的基因组编辑的植物的生成效率的方法。
技术介绍
尚不清楚基因组编辑的植物是否将受到欧盟及其他国家通过的遗传修饰生物(GMO)立法的监管(Jones,H.D.,NaturePlants,2015,1:14011)。分子剪刀(可编程核酸酶)对染色体靶位点诱导小的插入和缺失(插入/缺失)或置换，这与自然发生的遗传变异无法区分。这种基因组编辑的植物在某些国家可能被认为是GMO，阻碍了可编程核酸酶在植物生物技术和农业中的广泛使用。例如，当使用农杆菌属(Agrobacterium)时，由此生成的基因组编辑的植物具有外源DNA序列，包括基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于增加来自植物原生质体的基因组编辑的植物的生成效率的方法，其包括以下步骤：/n(i)通过将Cas蛋白-指导RNA核糖核蛋白(PNP)引入分离的植物原生质体中以编辑植物原生质体的基因组，在所述Cas蛋白-指导RNA核糖核蛋白中Cas蛋白和裸RNA形式的指导RNA是预装配的；和/n(ii)通过再生所述植物原生质体生成基因组编辑的植物。/n

【技术特征摘要】
20151006 KR 10-2015-01403141.一种用于增加来自植物原生质体的基因组编辑的植物的生成效率的方法，其包括以下步骤：
(i)通过将Cas蛋白-指导RNA核糖核蛋白(PNP)引入分离的植物原生质体中以编辑植物原生质体的基因组，在所述Cas蛋白-指导RNA核糖核蛋白中Cas蛋白和裸RNA形式的指导RNA是预装配的；和
(ii)通过再生所述植物原生质体生成基因组编辑的植物。


2.权利要求1的方法，其中，所述指导RNA对于编码靶基因的DNA是特异性的。


3.权利要求2的方法，其中，所述靶基因为油菜素内酯不敏感2(BIN2)基因或硫代葡萄糖苷-酮戊二酸-依赖性双加氧酶同源物(GSL-ALK)基因。


4.权利要求1的方法，其中，所述基因组的编辑通过敲除或敲入进行。


5.权利要求1的方法，其中，所述指导RNA为包含crRNA和tracrRNA的双RNA的形式，或单链指导RNA(sgRNA)的形式。


6.权利要求5的方法，其中，所述单链指导RNA包含crRNA的一部分和tracrRNA的一部分。


7.权利要求1的方法，其中，所述Cas蛋白为Cas9蛋白或Cas9蛋白的变体，所述Cas9蛋白的变体中的起催化作用的天冬氨酸残基被另一氨基酸置换。


8.权利要求1的方法，其中，所述Cas蛋白识别NGG三核苷酸。

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【专利技术属性】
技术研发人员：金晋秀，金贞垠，崔圣和，禹济旭，权纯一，金惠兰，
申请(专利权)人：基础科学研究院，首尔大学校产学协力团，次世代融合技术研究院，
类型：发明
国别省市：韩国;KR