陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统技术方案

本发明专利技术公开了陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统，涉及基因工程技术领域。能够精准编辑单个碱基的陆地棉基因组高效转化载体GhABE7.10nCas9，该载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，该载体通过下列步骤制备获得：获得目的序列TadA‑TadA7.10‑2linker，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示，利用Ale Ⅰ和Pac Ⅰ对SEQ ID NO：1所示的GhBE3载体进行酶切，与TadA‑TadA7.10‑2linker目的序列进行连接，通过测序验证，得到如SEQ ID NO：3所示的适用于陆地棉的单碱基编辑的高效转化载体GhABE7.10n。该陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统，本发明专利技术在棉花中的编辑效率达64.86％，本发明专利技术在棉花中有较高的特异性，该方法显示出较高的编辑效率和很高的实用性，它将成为棉花功能基因组研究新的重要的技术手段。

【技术实现步骤摘要】
陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统
本专利技术涉及基因工程
，具体为陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统。
技术介绍
用RNA指导的基因编辑技术CRISPR/Cas9自诞生以来掀起一场生物技术革命，在基因敲除、敲入、碱基修复等领域得到了广泛的应用1。与其他基因工程工具相比，这种技术更容易使用，并且更有效，因此，在其发现后的短短几年内，就已经被应用于世界各地的实验室，CRISPR/Cas9基因编辑系统由一个具有核酸内切酶功能的Cas9蛋白(或其他同源蛋白)和一条单链向导RNA(singleguide,sgRNA)组成。sgRNA与Cas9蛋白结合靶向到基因组特定位点，Cas9切割产生双链断裂(doublestrandbreaks,DSB)，经过细胞自主性的非同源末端连接(non-homologousendjoining,NHEJ)或同源重组(homology-directedrepair,HR)进行修复，引入突变，NHEJ是一种错配的修复机制，DNA连接时产生碱基插入或缺失突变。HR是指有同源臂供体存在的情况下，供体中的外源基因片段通过同本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统，能够精准编辑单个碱基的陆地棉基因组高效转化载体GhABE7.10nCas9，该载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，其特征在于，该载体通过下列步骤制备获得：/nS1、获得目的序列TadA-TadA7.10-2linker，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示，具体地，该目的序列通过以下步骤制备获得：/n1)在如序列表SEQ ID NO：3所示的序列TadA-TadA7.10-2linker在棉花中进行密码子优化；/n2)优化后的序列如序列表SEQ ID NO：4，根据序列进行核苷酸合成；/nS2、利用AleⅠ和PacⅠ对SEQ ID ...

【技术特征摘要】
1.陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统，能够精准编辑单个碱基的陆地棉基因组高效转化载体GhABE7.10nCas9，该载体的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示，其特征在于，该载体通过下列步骤制备获得：
S1、获得目的序列TadA-TadA7.10-2linker，其核苷酸序列如序列表SEQIDNO：4所示，具体地，该目的序列通过以下步骤制备获得：
1)在如序列表SEQIDNO：3所示的序列TadA-TadA7.10-2linker在棉花中进行密码子优化；
2)优化后的序列如序列表SEQIDNO：4，根据序列进行核苷酸合成；
S2、利用AleⅠ和PacⅠ对SEQIDNO：1所示的GhBE3载体进行酶切，与TadA-TadA7.10-2linker目的序列进行连接，通过测序验证，得到如SEQIDNO：3所示的适用于陆地棉的单碱基编辑的高效转化载体GhABE7.10n。


2.根据权利要求1所述的陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统，其特征在于，所述的载体GhAB...

【专利技术属性】
技术研发人员：金双侠，张献龙，王冠英，许忠平，王福秋，孙琳，李波，王琼琼，斯欢，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42