使用盐分级沉淀分离细胞外囊泡的方法技术

本发明专利技术涉及使用分级沉淀从生物样品中分离细胞外囊泡(EV)的方法和试剂盒。根据该方法和试剂盒，可以快速分离，并且可以有效地从各种类型的生物样品中分离EV，而不管样品来源如何。与基于现有沉淀方法分离EV的方法不同，本发明专利技术可以通过洗涤容易地去除盐，因此具有能够以高产率分离高纯度EV的优点，并且可以应用于研究和诊断领域中的小规模EV分离和工业应用中的大规模EV分离两者。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本专利技术涉及一种从生物样品中分离细胞外囊泡(ev)的方法，更具体地，涉及一种包括向生物样品中加入盐的步骤的分离细胞外囊泡的方法，以及用于分离细胞外囊泡的试剂盒。

技术介绍

1、细胞外囊泡(ev)是由磷脂双分子层围成的细小颗粒，其能够转运分子，包括蛋白质、脂质和核酸，并由几乎所有类型的细胞(真核细胞和原核细胞两者)释放。它们参与多种生物物理过程，包括细胞间通信和信号转导。最初，它们被认为是细胞死亡或细胞凋亡过程中释放的细胞尘。然而，最近的研究报道了它们是细胞间信号传导的重要信使，并与癌细胞转移、免疫功能、组织再生等有关。此外，还已知它们用作与某些疾病诸如癌症的诊断相关的生物标志物。细胞外囊泡可以分为外泌体和微泡，外泌体大小为几十纳米，微泡大小为几百纳米。由于从复杂生物样品中分离细胞外囊泡可用于医学中的各种目的，诸如疾病诊断、治疗监测和通过基因或药物递送的靶向治疗，因此需要用于从生物流体中有效分离这些细胞外囊泡的技术。

2、现有若干种分离细胞外囊泡的方法。所使用的最广泛的方法是超速离心(uc)，但是这种方法需要昂贵的设备和长时间的处理，并且产量低本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种从生物流体样品中分离细胞外囊泡(EV)的方法，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(a)通过加入1至15次所述盐至范围为0.1M至饱和浓度的最终浓度来进行。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(c)包括从已经加入有1.4M至2.25M的浓度的所述盐的所述样品中分离出的细胞外囊泡级分中分离细胞外囊泡。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述盐包含多价阴离子和一价阳离子。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述多价阴离子是硫酸根、磷酸根或柠檬酸根，以及所述一价阳离子是铵离子、钾离子或钠离子。

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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种从生物流体样品中分离细胞外囊泡(ev)的方法，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(a)通过加入1至15次所述盐至范围为0.1m至饱和浓度的最终浓度来进行。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(c)包括从已经加入有1.4m至2.25m的浓度的所述盐的所述样品中分离出的细胞外囊泡级分中分离细胞外囊泡。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述盐包含多价阴离子和一价阳离子。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述多价阴离子是硫酸根、磷酸根或柠檬酸根，以及所述一价阳离子是铵离子、钾离子或钠离子。

6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述盐是硫酸铵、磷酸铵、磷酸钾、硫酸钠或柠檬酸三钠。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述盐是固体或液体形式。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(b)通过沉降、过滤或离心进行。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述脱盐使用过滤、离心、透析、反渗透或脱盐柱进行。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，超滤步骤、亲和层析步骤或密度梯度超速离心步骤进一步在所述细胞外囊泡级分上进行。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述生物流体选自由以下组成的组：血清、血浆、全血、尿液、唾液、母乳、泪液、汗液、关节液、脑脊液、精液、阴道液、痰、胸膜液、淋巴液、腹水、羊水、支气管灌洗液和取自经培养细胞的培养基。

12.一种从生物组织样品中分离细胞外囊泡(ev)的方法，所述方法包括：

13.根据权利要求12所述的方法，其中，步骤(b)通过加入1至15次所述盐至范围为0.1m至饱和浓度的最终浓度来进行。

14.根据权利要求12所述的方法，其中，步骤(d)包括从已经加入有1.4m至2.25m的浓度的所述盐的所述样品中分离出的细胞外囊泡级分中分离细胞外囊泡。

15.根据权利要求12所述的方法，其中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵允卿，维贾亚·桑卡拉，
申请(专利权)人：基础科学研究院，
类型：发明
国别省市：