包含可溶性包封抗原的聚合物囊泡以及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及包含可溶性包封抗原的聚合物囊泡，其中所述可溶性包封抗原选自：多肽，碳水化合物，多核苷酸以及它们的组合。本发明专利技术进一步涉及一种用于生产其中包封抗原的聚合物囊泡的方法以及由所述方法生产的聚合物囊泡。本发明专利技术还进一步涉及包含本发明专利技术的聚合物囊泡的组合物、暴露于本发明专利技术的聚合物囊泡或组合物的分离的抗原呈递细胞或杂交瘤细胞。本发明专利技术还涉及包含本发明专利技术的聚合物囊泡的疫苗、引发免疫应答的方法或用于治疗、改善、预防或诊断癌症、自身免疫性疾病或感染性疾病的方法，此类方法包括提供本发明专利技术的聚合物囊泡。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含可溶性包封抗原的聚合物囊泡以及其制备方法和用途相关申请的交叉引用本申请要求于2018年1月25日提交的欧洲专利申请no.18153348.0的优先权的权益，该申请的内容以引用的方式全文并入本文以用于全部目的。序列表本申请包含计算机可读形式的序列表，其以引用的方式并入本文。
本申请涉及包括氧化稳定的聚合物囊泡的聚合物囊泡，所述聚合物囊泡包含可溶性或增溶的(solubilized)包封抗原，其中所述可溶性或增溶的包封抗原选自：多肽、碳水化合物、多核苷酸以及它们的组合。
技术介绍
虽然免疫是一个确立已久的过程，但是不同免疫原或抗原引发的应答水平存在差异。例如，膜蛋白形成一类产生低应答水平的抗原，这又意味着需要大量的膜蛋白来产生或引发所需水平的免疫应答。众所周知，膜蛋白很难合成，并且在没有去污剂的情况下膜蛋白不溶于水。这使得获得足够量的用于免疫的膜蛋白不仅昂贵而且困难。此外，膜蛋白需要适当折叠才能正常发挥其功能。通常，正确折叠的天然膜蛋白的免疫原性比不能以生理相关的方式折叠的膜蛋白的增溶形式的免疫原性要好得多。因此，即使可以使用佐剂来增强此类增溶的抗原的免疫原性，但这也是一种效率低下且没有太多优势的方法(如WO2014/077781A1)。尽管已将转染的细胞和基于脂质的系统用来呈递膜蛋白抗原以增加分离可能在体内有效的抗体的机会，但这些系统通常是不稳定的(如，是氧化敏感的)、繁琐(tedious)且昂贵的。此外，此类膜蛋白抗原目前最先进的技术水平是将无活性的病毒样颗粒用于免疫接种。<br>另一方面，疫苗是预防疾病(主要是感染性疾病)最有效的方法[如，Liu等人，2016]。截至目前，大多数获得许可的疫苗均是由活病毒或灭活的病毒制成的。尽管它们在产生体液应答(抗体介导的应答)以防止病毒增殖和进入细胞方面是有效的，但是此类疫苗的安全性仍然令人担忧。在过去的几十年中，科学进步已经通过使非复制型重组病毒的疫苗载体工程化从而帮助克服了这些问题。同时，将基于蛋白的抗原或亚单位抗原考察作为更安全的选择。然而，此类基于蛋白的疫苗通常会导致(illicit)较差的免疫(体液和细胞应答)。为了改善抗原的免疫原性，已经使用了若干种方法。例如，已经广泛研究了将抗原微包封到聚合物中，然而尽管这确实增强了免疫原性，但是抗原的聚集和变性问题仍然未得到解决[如，Hilbert等，1999]。此外，将佐剂(如水包油乳剂或聚合物乳剂)[如US9636397B2、US2015/0044242A1]与抗原一起使用以引发更明显的体液和细胞应答。尽管取得了这些进步，但它们在摄取和交叉呈递方面的效率较低。为了促进交叉呈递，基于免疫系统在病毒感染期间的可用信息，已经开发了模拟此类特性的病毒样颗粒。合成结构(比如具有包封的抗原的脂质体)是特别有吸引力的。脂质体是由脂质制成的单层自组装结构，并且作为递送媒介，阳离子脂质体更具吸引力和前景，因为它们能被抗原呈递细胞(APC)有效摄取[如，Maji等，2016]。此外，脂质体允许整合免疫调节剂比如单磷酰基脂质A(MPL)、CpG寡脱氧核苷酸，该免疫调节剂为可通过受体刺激免疫细胞的toll样受体(TLR)激动剂。尽管具有此类递送媒介的优势，但限制因素之一是在血清组分存在下的脂质体的稳定性。通过聚PEG化，负载高熔点的脂质，脂质体的稳定性问题得到了一定程度的解决(reduced)，其中一个充分表征的实例是通过用连接脂质的短共价交联稳定多层囊泡而形成的内双层交联多层囊泡(ICMV)[如，Moon等人，2011]。采用纳米圆盘(nanodisc)[如Kuai等人，2017]或pH敏感颗粒[如Luo等人，2017]，其它纳米颗粒结构已实现了成功免疫接种。但是，此类策略要么仍需要佐剂，要么在原型卵清蛋白(OVA)模型之外效果不佳。此外，聚合物囊泡可作为脂质体的稳定替代物，并且已经将它们用于整合膜蛋白以引发免疫应答[如，Quer等人，2011，WO2014/077781A1]。蛋白抗原也被包封在经过化学改变的聚合物囊泡的膜中(但是，是对氧化敏感的膜)，以将抗原和佐剂释放到树突状细胞中[如，Stano等，2013]。尽管通过使用聚合物已经取得了上述进步，但是仍然需要提供有效摄取和稳定的交叉呈递递送媒介和方法，从而克服或至少缓解上述问题并具有改进的功能性，特别是它们还能够引发CD8(+)T细胞介导的免疫应答，这在治疗和/或预防感染性疾病、癌症和自身免疫性疾病中特别重要。
技术实现思路
本申请涉及聚合物囊泡(polymersome)，包括氧化稳定的聚合物囊泡(作为有效摄取和稳定交叉呈递递送媒介)，所述聚合物囊泡包含可溶性包封抗原，其中所述可溶性包封抗原选自：多肽、碳水化合物、多核苷酸以及它们的组合。本专利技术进一步涉及一种用于生产其中包封抗原的聚合物囊泡的方法以及由所述方法生产的聚合物囊泡。本专利技术再进一步涉及包含本专利技术的聚合物囊泡的组合物，暴露至本专利技术的聚合物囊泡或组合物的分离的抗原呈递细胞和杂交瘤细胞。本专利技术还涉及包含本专利技术的聚合物囊泡的疫苗，引发免疫应答的方法或用于治疗、改善、预防或诊断癌症、自身免疫性疾病或感染性疾病的方法，此类方法包括向有此需要的受试者提供本专利技术的聚合物囊泡。本专利技术还涉及一种直径为约120nm或140nm或更长的聚合物囊泡用于引发免疫应答的用途，所述聚合物囊泡包含可溶性包封抗原，其中所述可溶性包封抗原选自：i)多肽；ii)碳水化合物；iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，进一步优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；或iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。一种平均直径为约120nm或140nm或更长的聚合物囊泡的集合用于引发免疫应答的用途，所述集合的聚合物囊泡包含可溶性包封抗原，其中所述可溶性包封抗原选自：i)多肽；ii)碳水化合物；iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，进一步优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；或iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。此外，在本专利技术的过程中发现，提供本专利技术的聚合物囊泡允许可溶性(增溶的)包封(位于所述聚合物囊泡中)抗原产生(比具有或不具有佐剂的游离抗原)更强的体液免疫应答，以及引发CD8(+)T细胞介导的免疫应答。由此，实现了受试者中抗体产生效率的提高。无论是否使用佐剂均可实现这种效率的提高。此外，本专利技术的聚合物囊泡引发CD8(+)T细胞介导的免疫应答的能力使其作为免疫治疗性抗原递送和呈递系统的潜力显著增加。由于由聚合物囊泡呈递可溶性(如增溶的)包封抗原，通过使用本专利技术的聚合物囊泡和方法产生的抗体不仅具有更高的产生成功率和对其相应的体外或体内靶标的更高的亲和力，并且当在各种基于溶液的抗体应用中使用时相应地提高了灵敏性，而且能够容易地针对通过使用游离抗原注射的常规方法不能触发抗体产生的困难抗原产生抗体和/或减少这种抗体产生过程所需的抗原量，从而降低此类生产的成本。此外，由本专利技术的聚合物囊泡呈递的可溶性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种氧化稳定的聚合物囊泡，所述聚合物囊泡包含可溶性包封抗原，其中所述可溶性包封抗原选自：/ni)多肽；/nii)碳水化合物；/niii)多核苷酸，其中所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；/niv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180125 EP 18153348.01.一种氧化稳定的聚合物囊泡，所述聚合物囊泡包含可溶性包封抗原，其中所述可溶性包封抗原选自：
i)多肽；
ii)碳水化合物；
iii)多核苷酸，其中所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；
iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。


2.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，所述引发为体内、离体或体外引发。


3.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原包含膜蛋白(MP)或膜相关肽(MAP)的可溶性部分，优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述抗原包含多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13和SEQIDNO:14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性。


4.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中在血清组分存在下所述聚合物囊泡是氧化稳定的，优选地，所述氧化稳定为体内、离体或体外氧化稳定。


5.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡在核内体内部是稳定的，优选地，所述稳定为体内、离体或体外稳定。


6.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中与脂质体的相应的氧化稳定性相比，所述聚合物囊泡具有改进的氧化稳定性，优选地，所述改进的稳定性为体内、离体或体外改进的稳定性。


7.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够以不依赖于氧化的方式释放其包含所述可溶性包封抗原的内容物并触发CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，所述释放为体内、离体或体外释放。


8.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发细胞免疫应答，其中所述细胞免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。


9.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发细胞和/或体液免疫应答，其中所述细胞免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。


10.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述体液免疫应答包含特异性抗体的产生，进一步优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。


11.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够增强效应CD4(+)T细胞的频率，优选地，所述增强为体内、离体或体外增强。


12.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述细胞免疫应答包含T细胞介导的免疫应答，优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。


13.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中与游离抗原相比，所述聚合物囊泡能够增强抗原特异性CD8(+)T细胞的克隆扩增，优选地，所述扩增为体内、离体或体外扩增。


14.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够诱导抗原特异性效应CD8(+)T细胞，优选地，所述诱导为体内、离体或体外诱导。


15.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够增强抗原特异性CD8(+)T细胞的细胞毒性表型，优选地，所述增强为体内、离体或体外增强。


16.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够靶向淋巴结驻留性巨噬细胞和/或B细胞，优选地，所述靶向为体内、离体或体外靶向。


17.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡为还原稳定的，优选地，在血清组分存在下所述聚合物囊泡是还原稳定的，进一步优选地，所述还原稳定为体内、离体或体外还原稳定。


18.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡具有降低的渗透性，优选地，所述降低的渗透性是与脂质体的相应的渗透性相比较的，进一步优选地，所述渗透性为体内、离体或体外渗透性。


19.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够在核内体内部释放其内容物，优选地，所述核内体为晚期核内体，进一步优选地，所述释放为体内、离体或体外释放。


20.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够进行如下的一种或多种：
i)引发细胞免疫应答，优选地，所述细胞免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答；进一步优选地，所述细胞免疫应答为CD8(+)T细胞介导的免疫应答；最优选地，所述细胞免疫应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步最优选地，所述细胞免疫应答针对多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12-14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
ii)在核内体内部释放聚合物囊泡内容物，优选地，所述核内体为晚期核内体；进一步优选地，所述内容物包含流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，最优选地，所述内容物包含多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12-14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iii)以不依赖于氧化的方式释放聚合物囊泡内容物并触发CD8(+)T细胞介导的免疫应答；优选地，所述内容物包含流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述内容物包含多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12-14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iv)刺激对所述抗原的免疫应答；优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述抗原包含多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12-14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
v)触发由CD8(+)T细胞介导的免疫应答诱导的交叉保护；优选地，所述应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述应答针对多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12、13和14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
vi)将肽或蛋白递送至抗原呈递细胞(APC)；优选地，所述肽或蛋白包含或衍生自流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述肽或蛋白包含或衍生自多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12、13和14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
vii)触发免疫应答，所述免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答和/或CD4(+)T细胞介导的免疫应答；优选地，所述应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述应答针对多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12、13和14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
viii)在受试者中刺激免疫应答；优选地，所述应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述应答针对多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12、13和14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
ix)免疫非人动物；优选地，所述免疫针对流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述免疫针对多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12、SEQIDNO:13和SEQIDNO:14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
x)与在不具有所述聚合物囊泡的情况下所述抗原的相应的抗原性相比，所述聚合物囊泡具有改变的抗原性；优选地，所述抗原为流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述抗原为多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12、13和14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
xi)与在不具有所述聚合物囊泡的情况下所述抗原的相应的免疫原性相比，所述聚合物囊泡具有改变的免疫原性；优选地，所述免疫原为流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述免疫原为多肽，所述多肽与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11和SEQIDNO:12、SEQIDNO:13和SEQIDNO:14的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性。


21.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡具有以下性质的一种或多种：
i)所述聚合物囊泡包含氧化稳定的膜；和/或
ii)所述聚合物囊泡是合成的；和/或
iii)所述聚合物囊泡不含未包封的抗原或与未包封的抗原混合；和/或
iv)所述聚合物囊泡包含两亲性聚合物的膜；和/或
v)所述聚合物囊泡包含形成囊泡膜的两亲性合成嵌段共聚物；和/或
vi)所述聚合物囊泡的直径大于70nm，优选地，所述直径的范围为约100nm至约1μm、或约100nm至约750nm、或约100nm至约500nm、或约125nm至约250nm、约140nm至约240nm、约150nm至约235nm、约170nm至约230nm、或约220nm至约180nm、或约190nm至约210nm，最优选地，所述直径为约200nm；和/或
vii)所述聚合物囊泡具有囊泡形态；
viii)所述聚合物囊泡是自组装的。


22.根据权利要求21所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡为聚合物囊泡的集合的形式，其中所述聚合物囊泡的集合的平均直径在约100nm至约1μm、或约100nm至约750nm、或约100nm至约500nm、或约125nm至约250nm、约140nm至约240nm、约150nm至约235nm、约170nm至约230nm、或约220nm至约180nm、或约190nm至约210nm的范围内。


23.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原为免疫原。


24.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原选自：i)自身抗原，ii)非自身抗原，iii)非自身免疫原和iv)自身免疫原。


25.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原选自：
i)多肽，所述多肽与病毒多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；优选地，所述病毒多肽序列为流感血凝素、猪流感血凝素或猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白，进一步优选地，所述病毒多肽序列选自：SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8和SEQIDNO:12、13和14；
ii)多肽，所述多肽与细菌多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iii)多肽，所述多肽与哺乳动物或禽类多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；优选地，所述哺乳动物或禽类多肽序列为卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽，进一步优选地，所述哺乳动物或禽类多肽序列选自：SEQIDNO:4、SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10和SEQIDNO:11。


26.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述哺乳动物多肽序列选自人、啮齿类动物、兔和马多肽序列。


27.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原为抗体或其片段。


28.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原选自：
i)流感血凝素(HA)，优选地，选自：SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7和SEQIDNO:8；
ii)猪流感血凝素(HA)，优选地，为SEQIDNO:6；
iii)卵清蛋白(OVA)，优选地，为SEQIDNO:4；
iv)B16肽，优选地，选自：SEQIDNO:9、SEQIDNO:10和SEQIDNO:11；
v)MC38肽，优选地，选自：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3；
vi)B16和MC38肽，优选地，所述肽独立地选自：i)SEQIDNO:1-3和ii)SEQIDNO:9-11；
vii)猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白及其可溶性片段，优选地，为SEQIDNO:12、13或14的片段。


29.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡选自阳离子聚合物囊泡、阴离子聚合物囊泡、非离子聚合物囊泡及它们的混合物。


30.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为基本上非免疫原性的或基本上非抗原性的；优选地，所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为非免疫原性的或非抗原性的。


31.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述嵌段共聚物或所述两亲性聚合物既非免疫刺激剂也非佐剂。


32.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物包含二嵌段或三嵌段(A-B-A或A-B-C)共聚物。


33.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物包含共聚物聚(N-乙烯吡咯烷酮)-b-PLA。


34.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物包含羧酸、酰胺、胺、烯属烃、二烷基硅氧烷、醚或亚烷基硫化物的至少一个单体单元。


35.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为选自如下的聚醚嵌段：低聚(氧乙烯)嵌段、聚(氧乙烯)嵌段、低聚(氧丙烯)嵌段、聚(氧丙烯)嵌段、低聚(氧丁烯)嵌段和聚(氧丁烯)嵌段。


36.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PB-PEO)二嵌段共聚物，或其中所述两亲性聚合物为聚(二甲基硅氧烷)-聚(氧化乙烯)(PDMS-PEO)二嵌段共聚物。


37.根据权利要求36所述的聚合物囊泡，其中所述PB-PEO二嵌段共聚物包含5-50个嵌段PB和5-50个嵌段PEO，或其中所述PB-PEO二嵌段共聚物优选包含5-100个嵌段PDMS和5-100个嵌段PEO。


38.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚(丙交酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PLA-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PLA-PEO/POPC具有75:25(如75/25)的PLA-PEO与POPC(如PLA-PEO/POPC)的比率。


39.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚(己内酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PCL-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PCL-PEO/POPC具有75:25(如75/25)的PCL-PEO与POPC(如PCL-PEO/POPC)的比率。


40.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚丁二烯-聚氧化乙烯(BD)。


41.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡包含二嵌段共聚物PBD21-PEO14(BD21)和三嵌段共聚物PMOXA12-PDMS55-PMOXA12。


42.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡包含一个或多个隔室。


43.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡包含一个或多个隔室，其中所述一个或多个隔室中的每一个均包封至少一种肽、蛋白和核酸，优选地，所述肽、蛋白和核酸中的所述至少一种为免疫原性或抗原性的，进一步优选地，所述一个或多个隔室中的所述每一个均由相同或不同的两亲性聚合物组成。


44.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡包含多于一个隔室，其中所述隔室包含外部嵌段共聚物囊泡和至少一个内部嵌段共聚物囊泡，其中所述至少一个内部嵌段共聚物囊泡被包封在所述外部嵌段共聚物囊泡的内部，优选地，所述外部嵌段共聚物囊泡为由独立地选自以下的共聚物形成的聚合物囊泡：
i)聚[苯乙烯-b-聚(L-异氰基丙氨酸(2-噻吩-3-基-乙基)酰胺)](PS-PIAT)，
ii)聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PBD-PEO)，
iii)聚(氧化乙烯)-聚(己内酯)(PEO-PCL)，
iv)聚(乙基乙烯)-聚(氧化乙烯)(PEE-PEO)，
v)聚(氧化乙烯)-聚(乳酸)(PEO-PLA)，
vi)聚(异戊二烯)-聚(氧化乙烯)(PI-PEO)，
vii)聚(2-乙烯基吡啶)-聚(氧化乙烯)(P2VP-PEO)，
viii)聚(氧化乙烯)-聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PEO-PNIPAm)，
ix)聚(苯乙烯)-聚(丙烯酸)(PS-PAA)，
x)聚(乙二醇)-聚(硫化丙烯)(PEG-PPS)，
xi)聚(2-甲基噁唑啉)-聚(二甲基硅氧烷)-聚(2-甲基噁唑啉)(PMOXA-PDMS-PMOXA)，
xii)聚(氧化乙烯)-聚(二甲基硅氧烷)-聚(2-甲基噁唑啉)(PEO-PDMS-PMOXA)，和
xiii)聚(甲基苯基硅烷)-聚(氧化乙烯)(PMPS-PEO-PMPS-PEO-PMPS)；
进一步优选地，所述至少一种内嵌段共聚物囊泡为由独立地选自以下的共聚物形成的聚合物囊泡：
i)聚[苯乙烯-b-聚(L-异氰基丙氨酸(2-噻吩-3-基-乙基)酰胺)](PS-PIAT)，
ii)聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PBD-PEO)，
iii)聚(氧化乙烯)-聚(己内酯)(PEO-PCL)，
iv)聚(乙基乙烯)-聚(氧化乙烯)(PEE-PEO)，
v)聚(氧化乙烯)-聚(乳酸)(PEO-PLA)，
vi)聚(异戊二烯)-聚(氧化乙烯)(PI-PEO)，
vii)聚(2-乙烯基吡啶)-聚(氧化乙烯)(P2VP-PEO)，
viii)聚(氧化乙烯)-聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PEO-PNIPAm)，
ix)聚(苯乙烯...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·纳拉尼，F·德卡约，T·A·康奈尔，A·K·汗，
申请(专利权)人：ACM生物实验室私人有限公司，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG