【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含共价结合的抗原的聚合物囊泡以及其制备方法和用途相关申请的交叉引用本申请要求于2018年9月12日提交的欧洲专利申请no.18193946.3的优先权的权益，该申请的内容以引用的方式全文并入本文以用于全部目的。序列表本申请包含计算机可读形式的序列表，其以引用的方式并入本文。
本专利技术涉及能够引发免疫应答的聚合物囊泡(polymersome)，其包含选自如下的抗原：(a)多肽；(b)碳水化合物；(c)多核苷酸；和(d)(a)和/或(b)和/或(c)的组合；其中所述抗原经由共价键缀合(conjugated)至所述聚合物囊泡的外表面。本专利技术进一步涉及一种用于生产缀合至聚合物囊泡的抗原的方法以及涉及由所述方法生产的聚合物囊泡。本专利技术进一步涉及包含本专利技术的聚合物囊泡的组合物、暴露于本专利技术的聚合物囊泡或组合物的分离的抗原呈递细胞或杂交瘤细胞。本专利技术还涉及包含本专利技术的聚合物囊泡的疫苗、引发免疫应答的方法或用于治疗、改善、预防或诊断癌症、自身免疫性疾病或感染性疾病的方法，所述方法包括提供本专利技术的聚...
【技术保护点】
1.一种能够引发免疫应答的聚合物囊泡，其包含：/ni)选自如下的抗原：/na)多肽；/nb)碳水化合物；/nc)多核苷酸；/nd)(a)和/或(b)和/或(c)的组合；/n其中所述抗原经由共价键缀合至所述聚合物囊泡的外表面。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180912 EP 18193946.31.一种能够引发免疫应答的聚合物囊泡，其包含：
i)选自如下的抗原：
a)多肽；
b)碳水化合物；
c)多核苷酸；
d)(a)和/或(b)和/或(c)的组合；
其中所述抗原经由共价键缀合至所述聚合物囊泡的外表面。
2.根据权利要求1所述的聚合物囊泡，其中所述共价键包含：i)酰胺部分；和/或ii)仲胺部分；和/或iii)1,2,3-三唑部分，优选地所述1,2,3-三唑部分为1,4-二取代[1,2,3]三唑部分或1,5-二取代[1,2,3]三唑部分；和/或iv)吡唑啉部分，和/或vi)酯部分；和/或vii)氨基甲酸酯和/或碳酸酯部分。
3.根据权利要求2所述的聚合物囊泡，其中通过使所述聚合物囊泡的外表面上存在的反应性基团与所述抗原的反应性基团反应形成将所述抗原缀合至所述聚合物囊泡的外表面的所述共价键。
4.根据权利要求3所述的聚合物囊泡，其中所述共价键选自：i)羧胺键；ii)1,4-二取代[1,2,3]三唑或1,5-二取代[1,2,3]三唑键；iii)取代的吡唑啉键。
5.根据权利要求4所述的聚合物囊泡，其中：i)所述聚合物囊泡的外表面上存在的反应性基团为醛基以及所述抗原的反应性基团为胺基，由此形成羧胺基；或ii)所述聚合物囊泡的外表面上存在的反应性基团为炔基以及所述抗原的反应性基团为叠氮基，由此优选地通过铜或钌催化的叠氮化物-炔烃环加成反应形成1,2,3-三唑基，进一步优选地所述1,2,3-三唑为1,4-二取代的或1,5-二取代的；或iii)所述聚合物囊泡的外表面上存在的反应性基团为甲基丙烯酸酯和/或羟基以及所述抗原的反应性基团为四唑基，由此形成吡唑啉基，优选地，所述吡唑啉基的形成包括腈亚胺中间体。
6.根据权利要求5所述的聚合物囊泡，其中所述羧胺键已进一步与还原剂反应形成仲胺。
7.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中经由连接子部分形成所述共价键。
8.根据权利要求7所述的聚合物囊泡，其中所述连接子部分L为肽连接子或直链或支链的基于烃的连接子。
9.根据权利要求7或8所述的衔接分子，其中所述连接子部分包含1至约550个主链原子、1至约500个主链原子、1至约450个主链原子、1至约350个主链原子、1至约300个主链原子、1至约250个主链原子、1至约200个主链原子、1至约150个主链原子、1至约100个主链原子、1至约50个主链原子、1至约30个主链原子、1至约20个主链原子、1至约15个主链原子、或1至约12个主链原子、或1至约10个主链原子，其中所述主链原子为任选地被选自N、O、P和S的一个或多个杂原子替代的碳原子。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述连接子部分包含将所述连接子部分整合至所述聚合物囊泡的膜中的膜锚定结构域。
11.根据权利要求10所述的聚合物囊泡，其中所述膜锚定结构域包含脂质。
12.根据权利要求11所述的聚合物囊泡，其中所述脂质为磷脂或糖脂。
13.根据权利要求12所述的聚合物囊泡，其中所述糖脂包括糖磷脂酰肌醇(GPI)。
14.根据权利要求12所述的聚合物囊泡，其中所述磷脂为鞘磷脂或甘油磷脂。
15.根据权利要求12所述的聚合物囊泡，其中所述鞘磷脂包含二硬脂酰磷脂酰乙醇胺[DSPE]与聚乙二醇(PEG)的缀合物(DSPE-PEG)或基于胆固醇的缀合物。
16.根据权利要求15所述的聚合物囊泡，其中所述DSPE-PEG包含2至约500个氧化乙烯单元。
17.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中在生理条件下所述连接子为不可水解的和/或不可氧化的。
18.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述生理条件的特征在于：温度在约20-40℃的范围内，大气压为1，和pH在约6-8的范围内。
19.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡具有囊泡形态。
20.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述引发的免疫应答包括体液免疫应答和/或细胞免疫应答。
21.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡为氧化稳定的聚合物囊泡。
22.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡的直径大于70nm，优选地所述直径为约100nm至约1μm，或约100nm至约750nm，或约100nm至约500nm，或约125nm至约250nm，约140nm至约240nm，约150nm至约235nm，约170nm至约230nm，或约220nm至约180nm，或约190nm至约210nm。
23.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中在血清组分存在下所述聚合物囊泡是氧化稳定的，优选地，所述氧化稳定为体内、离体或体外氧化稳定。
24.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡在核内体内部是稳定的，优选地，所述稳定为体内、离体或体外稳定。
25.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中与脂质体或纳米颗粒的相应的氧化稳定性相比，所述聚合物囊泡具有改进的氧化稳定性，优选地，所述改进的稳定性为体内、离体或体外改进的稳定性。
26.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够以不依赖于氧化的方式释放所述抗原并触发体液免疫应答，其中，所述释放为体内、离体或体外释放。
27.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述体液免疫应答包含特异性抗体的产生，进一步优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。
28.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够增强效应CD4(+)T细胞和/或CD8(+)T细胞的频率，优选地，所述增强为体内、离体或体外增强。
29.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够在核内体内部释放所述抗原，优选地，所述核内体为晚期核内体，进一步优选地，所述释放为体内、离体或体外释放。
30.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原为包括新抗原的自身抗原或非自身抗原。
31.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原选自：
i)多肽，所述多肽与病毒多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；优选地，所述病毒多肽序列为流感血凝素或猪流感血凝素；
ii)多肽，所述多肽与细菌多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iii)多肽，所述多肽与哺乳动物或禽类多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；优选地，所述哺乳动物或禽类多肽序列为卵清蛋白(OVA)。
32.根据权利要求31所述的聚合物囊泡，其中所述哺乳动物多肽序列选自：人、啮齿类动物、兔和马多肽序列。
33.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡选自阳离子、阴离子和非离子聚合物囊泡。
34.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡具有(由)一种两亲性聚合物(形成)的周向膜或由两种或更多种两亲性聚合物的混合物形成的周向膜。
35.根据权利要求34所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为基本上非免疫原性的或基本上非抗原性的。
36.根据权利要求34或35所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物既非免疫刺激剂也非佐剂。
37.根据权利要求34至36中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物包含二嵌段或三嵌段(A-B-A或A-B-C)共聚物。
38.根据权利要求34至37中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物包含共聚物聚(N-乙烯吡咯烷酮)-b-PLA。
39.根据权利要求34至38中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物包含羧酸、酰胺、胺、烯属烃、二烷基硅氧烷、醚或亚烷基硫化物的至少一个单体单元。
40.根据权利要求34至39中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为选自如下的聚醚嵌段：低聚(氧乙烯)嵌段、聚(氧乙烯)嵌段、低聚(氧丙烯)嵌段、聚(氧丙烯)嵌段、低聚(氧丁烯)嵌段、聚(氧丁烯)嵌段、共聚物聚(2-甲基-2-噁唑啉)-嵌段-聚(二甲基硅氧烷)-嵌段-聚(2-甲基-2-噁唑啉)、甲基丙烯酸酯封端的ABA嵌段共聚物聚(2-甲基-2-噁唑啉)-嵌段-聚(二甲基硅氧烷)-嵌段-聚(2-甲基-2-噁唑啉)(MA-ABA)以及它们的混合物。
41.根据权利要求34至40中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PB-PEO)二嵌段共聚物。
42.根据权利要求41所述的聚合物囊泡，其中所述PB-PEO二嵌段共聚物包含5-50个PB嵌段和5-50个PEO嵌段。
43.根据权利要求34至42中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚(丙交酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PLA-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PLA-PEO/POPC具有75:25(如75/25)的PLA-PEO与POPC(如PLA-PEO/POPC)的比率。
44.根据权利要求34至43中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚(己内酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PCL-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PCL-PEO/POPC具有75:25(如75/25)的PCL-PEO与POPC(如PCL-PEO/POPC)的比率。
45.根据权利要求34至44中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚丁二烯-聚氧化乙烯(BD)。
46.根据权利要求34至45中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡包含二嵌段共聚物PBD21-PEO14(BD21)、PBD37-PEO14(BD21)和/或三嵌段共聚物PMOXA12-PDMS55-PMOXA12。
47.根据权利要求1至46中任一项所述的聚合物囊泡，其中：i)所述抗原为可溶的或增溶的；和/或ii)所述聚合物囊泡进一步包含包封的抗原。
48.根据权利要求34至47中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两种或更多种两亲性聚合物具有不同的嵌段长度。
49.根据权利要求48所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡包含两种不同的聚丁二烯-聚氧化乙烯(BD)聚合物，例如BD21和BD37或所述聚合物囊泡，或包含PS-PEG嵌段共聚物与其他不同嵌段长度的PS-PIAT或PS-PEG嵌段的混合物。
50.根据权利要求48或49所述的聚合物囊泡，其中所述抗原缀合至具有更长嵌段长度的两亲性聚合物。
51.一种用于生产能够引发免疫应答的聚合物囊泡的方法，所述方法包括：
使选自如下的抗原：
a)多肽；
b)碳水化合物；
c)多核苷酸；
d)(a)和/或(b)和/或(c)的组合；
经由共价键缀合至所述聚合物囊泡的外表面。
52.一种由权利要求51所述的方法生产的具有与外表面缀合的抗原的聚合物囊泡。
53.一种组合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡。
54....
【专利技术属性】
技术研发人员：M·纳兰妮，F·德卡约，T·A·康奈尔，A·K·汗，
申请(专利权)人：ACM生物实验室私人有限公司，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG
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