【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请涉及包括氧化稳定的聚合物囊泡的聚合物囊泡，所述氧化稳定的聚合物囊泡包含可溶性或溶解的(solubilized)被包封抗原(例如多核苷酸，例如dna分子、rna分子和/或它们的组合)和可电离的脂质。
技术介绍
1、虽然免疫是一个确立已久的过程，但是不同免疫原或抗原之间在引发的应答水平上存在差异。例如，膜蛋白形成一类产生低应答水平的抗原，这又意味着需要大量的膜蛋白来产生或引发所需水平的免疫应答。众所周知，膜蛋白很难合成，并且在没有去污剂的情况下膜蛋白不溶于水。这使得获得足够量的用于免疫的膜蛋白不仅昂贵而且困难。此外，膜蛋白需要适当折叠才能正常发挥其功能。通常，正确折叠的天然膜蛋白的免疫原性比不能以生理相关方式折叠的膜蛋白的溶解形式的天然膜蛋白的免疫原性要好得多。因此，即使可以使用佐剂来增强此类溶解的抗原的免疫原性，这也是一种效率低下且没有太多优势的方法(例如wo2014/077781a1)。
2、尽管已将转染的细胞和基于脂质的系统用来呈递膜蛋白抗原以增加分离可能在体内有效的抗体的机会，但这些系统通常是不稳定的(例如，是氧化敏感的)、繁琐(tedious)且昂贵的。此外，此类膜蛋白抗原目前最先进的技术水平是将无活性的病毒样颗粒用于免疫接种。
3、另一方面，疫苗是预防疾病(主要是感染性疾病)最有效的方法[例如，liu等人，2016]。截至目前，大多数获得许可的疫苗均是由活病毒或灭活病毒制成的。尽管它们在产生体液应答(抗体介导的应答)以防止病毒增殖和进入细胞方面是有效的，但是此类疫苗的安全性仍然令人担忧。在过
4、此外，聚合物囊泡可作为脂质体的稳定替代物，并且已经将它们用于整合膜蛋白以引发免疫应答[例如，quer等人，2011，wo2014/077781a1]。蛋白抗原也被包封在聚合物囊泡的经过化学改变的膜中(但是，是对氧化敏感的膜)，以将抗原和佐剂释放到树突状细胞中[例如，stano等人，2013]。
5、尽管通过使用聚合物已经取得了上述进步，但是仍然需要提供有效摄取和稳定的交叉呈递递送媒介和方法，从而克服或至少缓解上述问题并具有改进的功能性，特别是它们还能够引发cd8(+)t细胞介导的免疫应答，这在治疗和/或预防感染性疾病、癌症和自身免疫性疾病中特别重要。
技术实现思路
1、本专利技术涉及包含可溶性被包封抗原的聚合物囊泡，其中所述可溶性被包封抗原为选自rna(例如mrna)分子或dna分子的多核苷酸(例如单链或双链的)，并且其中所述聚合物囊泡进一步包含可电离的脂质。
2、本专利技术还涉及一种直径为约120nm或140nm或更长的聚合物囊泡用于引发免疫应答的用途，所述聚合物囊泡包含可溶性被包封抗原，其中所述可溶性被包封抗原选自：
3、i)多肽；
4、ii)碳水化合物；
5、iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，进一步优选地，所述多核苷酸是dna或mrna分子；或
6、iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。
7、一种平均直径为约120nm或140nm或更长的聚合物囊泡的集合用于引发免疫应答的用途，所述集合的聚合物囊泡包含可溶性被包封抗原，其中所述可溶性被包封抗原选自：
8、i)多肽；
9、ii)碳水化合物；
10、iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，进一步优选地，所述多核苷酸是dna或mrna分子；或
11、iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。
12、此外，在本专利技术的过程中发现，提供本专利技术的聚合物囊泡允许可溶性(或溶解的)被包封(于所述聚合物囊泡中)的抗原产生(比具有或不具有佐剂的游离抗原)更强的体液免疫应答，以及引发cd8(+)t细胞介导的免疫应答。由此，实现了受试者中抗体产生效率的提高。无论是否使用佐剂均可实现这种效率的提高。此外，本专利技术的聚合物囊泡引发cd8(+)t细胞介导的免疫应答的能力使其作为免疫治疗性抗原递送和呈递系统的潜力显著增加。
13、由于由聚合物囊泡呈递可溶性(例如溶解的)被包封抗原，通过使用本专利技术的聚合物囊泡和方法产生的抗体不仅具有更高的产生成功率和对其相应的体外或体内靶标的更高的亲和力，并且当在各种基于溶液的抗体应用中使用时相应地提高了灵敏性，而且能够容易地针对通过使用游离抗原注射的常规方法不能触发抗体产生的困难抗原产生抗体和/或减少这种抗体产生过程所需的抗原量，从而降低此类生产的成本。此外，由本专利技术的聚合物囊泡呈递的可溶性(例如溶解的)被包封抗原还能够引发cd8(+)t细胞介导的免疫应答，这将相应的聚合物囊泡的用途扩展至细胞介导的免疫，并因此改善了所述聚合物囊泡的免疫治疗及抗原递送和呈递潜力。
14、因此，本申请通过提供改进了抗原免疫原性特性的氧化稳定的聚合物囊泡、其生产方法和包含此类聚合物囊泡的组合物来满足这种需求，所述聚合物囊泡、其生产方法和包含此类聚合物囊泡的组合物在下文描述，特征在权利要求书中表征本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种包含可溶性被包封抗原的聚合物囊泡，其中所述可溶性被包封抗原是选自RNA(例如mRNA)分子或DNA分子的多核苷酸，并且其中所述聚合物囊泡进一步包含可电离的脂质。
2.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述可电离的脂质是阳离子可电离的脂质。
3.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述可电离的脂质：
4.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述可电离的脂质包含以下或由以下组成：
5.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述多核苷酸(例如SEQ IDNO:16)编码一种或多种多肽，优选地，所述一种或多种多肽是病毒多肽。
6.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够增加所述聚合物囊泡内的所述多核苷酸(例如mRNA)和/或由所述多核苷酸(例如mRNA)编码的一种或多种多肽的热稳定性和/或储存稳定性和/或免疫原性，优选地与相同条件下不具有可电离的脂质的另一种聚合物囊泡内或包含胆固醇的可电离的脂质纳米颗粒(LNP)内的相同多核苷酸(例如mRNA)和/或由所述相
7.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡是氧化稳定的聚合物囊泡。
8.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，所述引发为体内、离体或体外引发，进一步优选地，所述CD8(+)T细胞介导的免疫应答针对由所述多核苷酸(例如SEQ ID NO:16)编码的一种或多种多肽。
9.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发细胞免疫应答，其中所述细胞免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答，进一步优选地，所述CD8(+)T细胞介导的免疫应答针对由所述多核苷酸(例如SEQ IDNO:16)编码的一种或多种多肽。
10.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发细胞和/或体液免疫应答，其中所述细胞免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，免疫应答为体内、离体或体外免疫应答，进一步优选地，所述细胞和/或体液免疫针对由所述多核苷酸(例如SEQ ID NO:16)编码的一种或多种多肽，最优选地，所述CD8(+)T细胞介导的免疫应答针对由所述多核苷酸编码的一种或多种多肽。
11.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述体液免疫应答包含特异性抗体的产生，进一步优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答，最优选地，所述体液免疫针对由所述多核苷酸(例如SEQ ID NO:16)编码的一种或多种多肽。
12.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够增强效应CD4(+)T细胞的频率，优选地，所述增强为体内、离体或体外增强，进一步优选地，所述效应CD4(+)T细胞的频率针对由所述多核苷酸(例如SEQ ID NO:16)编码的一种或多种多肽。
13.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述细胞免疫应答包含T细胞介导的免疫应答，优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答，进一步优选地，包含T细胞介导的免疫应答的所述细胞免疫应答针对由所述多核苷酸(例如SEQ ID NO:16)编码的一种或多种多肽。
14.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中与游离抗原相比，所述聚合物囊泡能够增强抗原特异性CD8(+)T细胞的克隆扩增，优选地，所述扩增为体内、离体或体外扩增，进一步优选地，所述抗原特异性CD8(+)T细胞的克隆扩增针对由所述多核苷酸(例如SEQID NO:16)编码的一种或多种多肽。
15.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够诱导抗原特异性效应CD8(+)T细胞，优选地，所述诱导为体内、离体或体外诱导，进一步优选地，所述诱导抗原特异性效应CD8(+)T细胞针对由所述多核苷酸(例如SEQ ID NO:16)编码的一种或多种多肽。
16.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够增强抗原特异性...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种包含可溶性被包封抗原的聚合物囊泡，其中所述可溶性被包封抗原是选自rna(例如mrna)分子或dna分子的多核苷酸，并且其中所述聚合物囊泡进一步包含可电离的脂质。
2.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述可电离的脂质是阳离子可电离的脂质。
3.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述可电离的脂质：
4.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述可电离的脂质包含以下或由以下组成：
5.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述多核苷酸(例如seq idno:16)编码一种或多种多肽，优选地，所述一种或多种多肽是病毒多肽。
6.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够增加所述聚合物囊泡内的所述多核苷酸(例如mrna)和/或由所述多核苷酸(例如mrna)编码的一种或多种多肽的热稳定性和/或储存稳定性和/或免疫原性，优选地与相同条件下不具有可电离的脂质的另一种聚合物囊泡内或包含胆固醇的可电离的脂质纳米颗粒(lnp)内的相同多核苷酸(例如mrna)和/或由所述相同多核苷酸(例如mrna)编码的一种或多种多肽的热稳定性和/或储存稳定性和/或免疫原性相比，进一步优选地，所述热稳定性和/或储存稳定性在约-80℃至约4℃的温度范围中(例如在-80℃、-20℃或4℃下，优选在-80℃下)增加，最优选地，所述免疫原性在约36.5℃至约37.5℃的温度范围中增加；进一步最优选地，所述增加为约至少5％(例如至少10％、至少20％或至少30％)。
7.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡是氧化稳定的聚合物囊泡。
8.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发cd8(+)t细胞介导的免疫应答，优选地，所述引发为体内、离体或体外引发，进一步优选地，所述cd8(+)t细胞介导的免疫应答针对由所述多核苷酸(例如seq id no:16)编码的一种或多种多肽。
9.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发细胞免疫应答，其中所述细胞免疫应答包含cd8(+)t细胞介导的免疫应答，优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答，进一步优选地，所述cd8(+)t细胞介导的免疫应答针对由所述多核苷酸(例如seq idno:16)编码的一种或多种多肽。
10.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发细胞和/或体液免疫应答，其中所述细胞免疫应答包含cd8(+)t细胞介导的免疫应答，优选地，免疫应答为体内、离体或体外免疫应答，进一步优选地，所述细胞和/或体液免疫针对由所述多核苷酸(例如seq id no:16)编码的一种或多种多肽，最优选地，所述cd8(+)t细胞介导的免疫应答针对由所述多核苷酸编码的一种或多种多肽。
11.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述体液免疫应答包含特异性抗体的产生，进一步优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答，最优选地，所述体液免疫针对由所述多核苷酸(例如seq id no:16)编码的一种或多种多肽。
12.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够增强效应cd4(+)t细胞的频率，优选地，所述增强为体内、离体或体外增强，进一步优选地，所述效应cd4(+)t细胞的频率针对由所述多核苷酸(例如seq id no:16)编码的一种或多种多肽。
13.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述细胞免疫应答包含t细胞介导的免疫应答，优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答，进一步优选地，包含t细胞介导的免疫应答的所述细胞免疫应答针对由所述多核苷酸(例如seq id no:16)编码的一种或多种多肽。
14.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中与游离抗原相比，所述聚合物囊泡能够增强抗原特异性cd8(+)t细胞的克隆扩增，优选地，所述扩增为体内、离体或体外扩增，进一步优选地，所述抗原特异性cd8(+)t细胞的克隆扩增针对由所述多核苷酸(例如seqid no:16)编码的一种或多种多肽。
15.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够诱导抗原特异性效应cd8(+)t细胞，优选地，所述诱导为体内、离体或体外诱导，进一步优选地，所述诱导抗原特异性效应cd8(+)t细胞针对由所述多核苷酸(例如seq id no:16)编码的一种或多种多肽。
16.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够增强抗原特异性cd8(+)t细胞的细胞毒性表型，优选地，所述增强为体内、离体或体外增强，进一步优选地，所述增强抗原特异性cd8(+)t细胞的细胞毒性表型针对由所述多核苷酸(例如seqid no:16)编码的一种或多种多肽。
17.根据前述权利要求中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够靶向淋巴结驻留性巨噬细胞和/或b细胞，优选地，所述靶向为体内、离体或体外靶向，进一步优选地，所述靶向淋巴结驻留性巨噬细胞和/或b细胞针对由所述多核苷酸(例如seq id no:1...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·纳兰尼，J·H·拉姆，L·马丁，S·文卡塔拉曼，T·W·奇亚，
申请(专利权)人：ACM生物实验室私人有限公司，
类型：发明
国别省市：
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