通过施用具有关联的抗原的聚合物囊泡群和具有关联的佐剂的聚合物囊泡群来引发免疫应答的方法以及包含这两种聚合物囊泡群的组合物技术

本发明专利技术涉及一种通过施用抗原和佐剂在受试者中引发免疫应答的方法，其中所述抗原与第一聚合物囊泡群关联，和其中所述佐剂与第二聚合物囊泡群关联，并且其中将两种聚合物囊泡群施用于所述受试者。本发明专利技术还涉及包含本发明专利技术的两种聚合物囊泡群的组合物(比如疫苗)，引发免疫应答的方法或用于治疗、改善、预防或诊断癌症、自身免疫性疾病或感染性疾病的方法，所述方法包括提供本发明专利技术的聚合物囊泡。方法包括提供本发明专利技术的聚合物囊泡。方法包括提供本发明专利技术的聚合物囊泡。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过施用具有关联的抗原的聚合物囊泡群和具有关联的佐剂的聚合物囊泡群来引发免疫应答的方法以及包含这两种聚合物囊泡群的组合物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年8月1日提交的欧洲专利申请no.19189549.9和2020年4月24日提交的欧洲专利申请no.20171327.8的优先权的权益，它们的内容以引用的方式全文并入本文以用于全部目的。
[0003]序列表
[0004]本申请包含计算机可读形式的序列表，其以引用的方式并入本文。


[0005]本专利技术涉及一种通过施用抗原和佐剂引发免疫应答的方法，其中所述抗原与第一聚合物囊泡群关联，并且其中所述佐剂与第二聚合物囊泡群关联，并且其中将两种聚合物囊泡群施用于受试者。本专利技术还涉及包含这两种聚合物囊泡群的组合物和这两种聚合物囊泡群的治疗用途。抗原可以是能够引发免疫应答的任何抗原，并且可以是例如多肽、碳水化合物、多核苷酸以及它们的组合。

技术介绍

[0006]虽然免疫是一个确立已久的过程，但是不同免疫原或抗原引发的应答水平存在差异。例如，膜蛋白形成一类产生低应答水平的抗原，这又意味着需要大量的膜蛋白来产生或引发所需水平的免疫应答。众所周知，膜蛋白很难合成，并且在没有去污剂的情况下膜蛋白不溶于水。这使得获得足够量的用于免疫的膜蛋白不仅昂贵而且困难。此外，膜蛋白需要适当折叠才能正常发挥其功能。通常，正确折叠的天然膜蛋白的免疫原性比不能以生理相关的方式折叠的膜蛋白的增溶形式的免疫原性要好得多。因此，即使可以使用佐剂来增强此类增溶的抗原的免疫原性，但这也是一种效率低下且没有太多优势的方法(如WO2014/077781A1)。
[0007]尽管已将转染的细胞和基于脂质的系统用来呈递膜蛋白抗原以增加分离可能在体内有效的抗体的机会，但这些系统通常是不稳定的(如，是氧化敏感的)、繁琐(tedious)且昂贵的。此外，此类膜蛋白抗原目前最先进的技术水平是将无活性的病毒样颗粒用于免疫接种。
[0008]另一方面，疫苗是预防疾病(主要是感染性疾病)最有效的方法[如，Liu等，2016]。截至目前，大多数获得许可的疫苗均是由活病毒或灭活的病毒制成的。尽管它们在产生体液应答(抗体介导的应答)以防止病毒增殖和进入细胞方面是有效的，但是此类疫苗的安全性仍然令人担忧。在过去的几十年中，科学进步已经通过使非复制型重组病毒的疫苗载体工程化从而帮助克服了这些问题。同时，将基于蛋白的抗原或亚单位抗原考察作为更安全的选择。然而，此类基于蛋白的疫苗通常会导致(illicit)较差的免疫(体液和细胞应答)。为了改善抗原的免疫原性，已经使用了若干种方法。例如，已经广泛研究了将抗原微包封到
聚合物中，然而尽管这确实增强了免疫原性，但是抗原的聚集和变性问题仍然未得到解决[如，Hilbert等，1999]。此外，将佐剂(如水包油乳剂或聚合物乳剂)[如US9636397B2、US2015/0044242A1]与抗原一起使用以引发更明显的体液和细胞应答。尽管取得了这些进步，但它们在摄取和交叉呈递方面的效率较低。为了促进交叉呈递，基于免疫系统在病毒感染期间的可用信息，已经开发了模拟此类特性的病毒样颗粒。合成结构(比如具有包封的抗原的脂质体)是特别有吸引力的。脂质体是由脂质制成的单层自组装结构，并且作为递送媒介，阳离子脂质体更具吸引力和前景，因为它们能被抗原呈递细胞(APC)有效摄取[如，Maji等，2016]。此外，脂质体允许整合免疫调节剂比如单磷酰基脂质A(MPL)、CpG寡脱氧核苷酸，该免疫调节剂为可通过受体刺激免疫细胞的toll样受体(TLR)激动剂。尽管具有此类递送媒介的优势，但限制因素之一是在血清组分存在下的脂质体的稳定性。通过聚PEG化，负载高熔点的脂质，脂质体的稳定性问题得到了一定程度的解决(reduced)，其中一个充分表征的实例是通过用连接脂质的短共价交联稳定多层囊泡而形成的内双层交联多层囊泡(ICMV)[如，Moon等，2011]。采用纳米圆盘(nanodisc)[如Kuai等，2017]或pH敏感颗粒[如Luo等，2017]，其它纳米颗粒结构已实现了成功免疫接种。但是，此类策略要么仍需要佐剂，要么在原型卵清蛋白(OVA)模型之外效果不佳。
[0009]此外，聚合物囊泡可作为脂质体的稳定替代物，并且已经将它们用于整合膜蛋白以引发免疫应答[如，Quer等，2011，WO2014/077781A1]。蛋白抗原也被包封在经过化学改变的聚合物囊泡的膜中(但是，是对氧化敏感的膜)，以将抗原和佐剂释放到树突状细胞中[如，Stano等，2013]。
[0010]尽管通过使用聚合物已经取得了上述进步，但是仍然需要提供引发免疫应答的替代方法，特别是用于治疗和/或预防感染性疾病、癌症和自身免疫性疾病的替代方法。

技术实现思路

[0011]本专利技术涉及一种通过施用抗原和佐剂在受试者中引发免疫应答的方法，其中所述抗原与第一聚合物囊泡群关联，和其中所述佐剂与第二聚合物囊泡群关联，并且其中将两种聚合物囊泡群施用于所述受试者。
[0012]在此类方法中，通过将所述抗原包封在所述第一聚合物囊泡群中、通过将所述抗原整合到所述第一聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内、通过将所述抗原经由共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面和/或通过将所述抗原经由非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面使所述抗原与所述第一聚合物囊泡群关联。
[0013]在此类方法中，同样通过将所述佐剂包封在所述第二聚合物囊泡群中、通过将所述佐剂整合到所述第二聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内、通过将所述佐剂经由共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面和/或通过将所述佐剂经由非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面使所述佐剂与所述第二聚合物囊泡群关联。
[0014]在所述方法的实施方案中，所述抗原可以选自：多肽、碳水化合物、多核苷酸以及它们的组合。
[0015]本专利技术进一步涉及一种用于生产所述两种聚合物囊泡群的方法。本专利技术再进一步涉及包含本专利技术的两种聚合物囊泡群的组合物，暴露至本专利技术的聚合物囊泡或组合物的分离的抗原呈递细胞和杂交瘤细胞。本专利技术还涉及包含本专利技术的两种聚合物囊泡群的疫苗，
引发免疫应答的方法或用于治疗、改善、预防或诊断癌症、自身免疫性疾病或感染性疾病的方法，此类方法包括向有此需要的受试者提供本专利技术的聚合物囊泡。
[0016]本专利技术还涉及所述两种聚合物囊泡群用于引发免疫应答的用途，其中至少一种聚合物囊泡群具有或两种群具有约120nm或140nm或更大的平均直径，其中所述聚合物囊泡群具有与聚合物囊泡关联的抗原或佐剂，例如可溶性包封抗原或包封佐剂，其中所述抗原可以选自：
[0017]i)多肽；
[0018]ii)碳水化合物；
[0019]iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，进一步优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子。
[0020]iv)脂质或
[0021]v)i)至iv)中任意的组合。
[0022]本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种通过施用抗原和佐剂在受试者中引发免疫应答的方法，其中所述抗原与第一聚合物囊泡群关联，和其中所述佐剂与第二聚合物囊泡群关联，并且其中将两种聚合物囊泡群施用于所述受试者。2.根据权利要求1所述的方法，(a)其中，通过将所述抗原包封在所述第一聚合物囊泡群中、通过将所述抗原整合到所述第一聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内、通过将所述抗原经由共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面和/或通过将所述抗原经由非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面使所述抗原与所述第一聚合物囊泡群关联；和/或(b)通过将所述佐剂包封在所述第二聚合物囊泡群中、通过将所述佐剂整合到所述第二聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内、通过将所述佐剂经由共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面和/或通过将所述佐剂经由非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面使所述佐剂与所述第二聚合物囊泡群关联。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一聚合物囊泡群具有包封在所述聚合物囊泡内的抗原，并且所述第二聚合物囊泡群具有包封在所述聚合物囊泡内的佐剂。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述两种聚合物囊泡群通过选自如下的施用途径施用：口服施用、经鼻腔施用、施用至黏膜表面、吸入、皮内施用、腹膜内施用、皮下施用、静脉内施用和肌肉内施用。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者是包括人的哺乳动物，或非哺乳动物。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物并且针对选自癌症、病毒感染和细菌感染的疾病进行疫苗接种，其中所述受试者优选地是人并且优选地针对冠状病毒感染进行疫苗接种，其中所述冠状病毒优选地为MERS
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CoV、SARS
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CoV
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2或SARS
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CoV
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1。7.根据权利要求5所述的方法，(a)其中所述受试者是非哺乳动物并且针对选自病毒感染和细菌感染的疾病进行疫苗接种；或(b)其中所述哺乳动物是山羊、绵羊、牛或猪，其中所述动物优选地为(i)猪并且针对猪流行性腹泻病毒进行疫苗接种；或(ii)有蹄动物并且针对口蹄疫病毒进行疫苗接种。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包封抗原是可溶性或增溶的抗原。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗原，优选地所述可溶性或增溶的包封抗原选自：i)多肽；ii)碳水化合物；iii)多核苷酸，其中所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群是氧化稳定的。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包封抗原包含膜蛋白(MP)或膜相关肽(MAP)的可溶性部分，优选地所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS
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CoV SPIKE蛋白、SARS
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CoV
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2SPIKE蛋白或SARS
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CoV
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1SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述抗原包含多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:43
‑
46、SEQ ID NO:34
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41、SEQ ID NO:48
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51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群具有以下性质中的一种或多种：i)所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含氧化稳定的膜；和/或ii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群是合成的；和/或iii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群不含未包封的抗原或与未包封的抗原混合；和/或iv)所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含两亲性聚合物的膜；和/或v)所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含形成囊泡膜的两亲性合成嵌段共聚物；和/或vi)所述第一和/或第二聚合物囊泡群的直径大于70nm，优选地，所述直径范围为约100nm至约1μm，或约100nm至约750nm，或约100nm至约500nm，或约125nm至约250nm，约140nm至约240nm，约150nm至约235nm，约170nm至约230nm，或约220nm至约180nm，或约190nm至约210nm，最优选地，所述直径为约200nm；和/或vii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群具有囊泡形态；viii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群是自组装的；ix)所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为基本上非免疫原性的或基本上非抗原性的，优选地，所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为非免疫原性的或非抗原性的。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含两亲性聚合物或由两亲性聚合物形成，所述两亲性聚合物包含二嵌段或三嵌段(A
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B
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A或A
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B
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C)共聚物或由二嵌段或三嵌段(A
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B
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A或A
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B
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C)共聚物组成。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中(a)所述两亲性聚合物包含共聚物聚(N
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乙烯吡咯烷酮)
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b
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PLA；(b)所述两亲性聚合物为聚(丁二烯)
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...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：ACM生物实验室私人有限公司，
类型：发明
国别省市：