开发用于发现治疗性抗体的高效杂交瘤平台制造技术

本技术总体上涉及用于产生抗体、抗体文库、杂交瘤、杂交瘤文库等的改进方法。例如，这些方法增加产生的抗原特异性B细胞的数量，增加杂交瘤的数量，和/或增加可在给定的产生周期中制造的单克隆抗体的数量。期中制造的单克隆抗体的数量。期中制造的单克隆抗体的数量。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】开发用于发现治疗性抗体的高效杂交瘤平台
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年8月30日提交的美国临时专利申请号62/894,660的优先权，其内容全文据此出于所有目的以引用方式并入本文。

技术介绍

[0003]数十年来，单克隆抗体一直被用作临床诊断中的关键试剂，并且它们正在成为重要的新一类治疗剂。杂交瘤技术为用于获得单克隆抗体最常用的方法。单克隆抗体是从杂交瘤细胞分泌的，是通过将产生正常抗体的脾脏B细胞与永生骨髓瘤细胞或其他永生细胞融合而产生的。
[0004]自数十年前出现以来，杂交瘤产生技术几乎没有变化(Nature 256:495
–
497(1975))。用于生成杂交瘤的典型方案涉及：(i)用抗原对动物(例如小鼠、大鼠或兔)进行免疫；(ii)收获产生抗体的B细胞，其通常来自脾脏；(iii)将B细胞与非分泌性骨髓瘤细胞系融合以形成杂交瘤；(iv)在选择培养基中培养杂交瘤细胞；(v)筛选产生所需抗体的细胞；以及(vi)克隆所需的杂交瘤以获得分泌抗体的同质细胞系。
[0005]需要生成更多数量的抗原特异性抗体并且改善单克隆抗体和抗体文库的产生。

技术实现思路

[0006]本技术一般涉及用于产生抗体、抗体文库、杂交瘤、杂交瘤文库等的改进方法，以及来自各种方法步骤的组合物。例如，这些方法可增加产生的抗原特异性B细胞的数量，增加杂交瘤的数量，和/或增加可在给定的产生周期中制造的单克隆抗体的数量。本文所述的方法可用于显著增加抗体、抗体文库、杂交瘤、杂交瘤文库等以及来自各种方法步骤的组合物的产生，以用于治疗多种疾病。例如，本文所述的方法可应用于抗体和/或杂交瘤生成，以用于治疗癌症、免疫疾病、炎性疾病和任何其他可通过抗体疗法治疗的疾病。本文所述的方法可应用于针对挑战性靶标的抗体和/或杂交瘤生成。挑战性靶标为难以生成针对该靶标的抗体的抗原，例如因为可靶向区域的大小很小，蛋白质构象很重要，和/或抗原(例如，通过翻译后修饰，诸如糖基化、磷酸化，乙酰化和甲基化)被修饰。在实施例中，靶抗原为多通道跨膜蛋白。在实施例中，多通道跨膜蛋白为G蛋白偶联受体(GPCR)。在实施例中，多通道跨膜蛋白为离子泵、离子通道或转运蛋白。
[0007]在一方面，提供了一种用于产生抗体、抗体文库、杂交瘤或杂交瘤文库的方法。在实施例中，该方法可包括以下项中的一项或多项：
[0008](a)对多只动物注射抗原；
[0009](b)从每只动物收获B细胞；
[0010](c)在B细胞与融合配偶体之间形成杂交瘤；以及
[0011](d)筛选杂交瘤对抗原的结合特异性。
[0012]在实施例中，可应用以下条件中的至少一个条件并且优选地两个条件或更多条件：
[0013](i)该动物为远交动物；
[0014](ii)在多个部位处对动物进行注射；
[0015](iii)以两次注射之间不少于每周、不少于每10天、不少于每两周的频率，或持续时间更长的其他频率对动物进行注射；
[0016](iv)对动物进行注射6周至15周；
[0017](v)使用多种佐剂，使得对每只动物注射单一佐剂，并且对至少一些动物注射不同的佐剂；
[0018](vi)在步骤(c)之前富集B细胞；和/或
[0019](vii)使用经改造以表达表面和分泌的IgG两者的融合配偶体。
[0020]在一方面，提供了一种用于产生抗体、抗体文库、杂交瘤或杂交瘤文库的方法。在实施例中，该方法可包括以下项中的一项或多项：
[0021](a)对一只或多只动物注射抗原；
[0022](b)从每只动物收获B细胞；
[0023](c)在B细胞与融合配偶体之间形成杂交瘤；以及
[0024](d)筛选杂交瘤对抗原的结合特异性。
[0025]在实施例中，可应用以下条件中的至少一个条件并且优选地两个条件或更多条件：
[0026](i)该动物为远交动物；
[0027](ii)在多个部位处对动物进行注射；
[0028](iii)以两次注射之间不少于每周、不少于每10天、不少于每两周的频率，或持续时间更长的其他频率对动物进行注射；
[0029](iv)对动物进行注射6周至15周；
[0030](v)使用多种佐剂，使得对每只动物注射单一佐剂，并且对不同动物注射不同的佐剂；
[0031](vi)在步骤(c)之前富集B细胞；和/或
[0032](vii)使用经改造以表达表面和分泌的IgG两者的融合配偶体。
[0033]在实施例中，可应用以下条件中的至少一个条件并且优选地两个条件或更多条件：
[0034](i)该动物为远交动物；
[0035](ii)在多个部位处对动物进行注射；
[0036](iii)以两次注射之间不少于每周、不少于每10天、不少于每两周的频率，或持续时间更长的其他频率对动物进行注射；
[0037](iv)对动物进行注射6周至15周；
[0038](v)使用多种佐剂，使得对每只动物注射单一佐剂，并且对不同动物注射不同的佐剂；和/或
[0039](vi)在步骤(c)之前富集B细胞。
[0040]在实施例中，可从引流淋巴结中收获B细胞。
[0041]在实施例中，该方法可包括对两只或更多只动物注射抗原。在实施例中，该方法可包括对三只或更多只动物注射抗原。在实施例中，该方法可包括对四只或更多只动物注射
抗原。在实施例中，该方法可包括对五只或更多只动物注射抗原。
[0042]在实施例中，可应用条件(i)至(vii)中的两个条件。在实施例中，可应用条件(i)至(vii)中的三个条件。在实施例中，可应用条件(i)至(vii)中的四个条件。在实施例中，可应用条件(i)至(vii)中的五个条件。在实施例中，可应用条件(i)至(vii)中的六个条件。在实施例中，可应用条件(i)至(vii)中的七个条件。在实施例中，可应用条件(i)至(vi)中的两个条件。在实施例中，可应用条件(i)至(vi)中的三个条件。在实施例中，可应用条件(i)至(vi)中的四个条件。在实施例中，可应用条件(i)至(vi)中的五个条件。在实施例中，可应用条件(i)至(vi)中的六个条件。
[0043]在实施例中，该方法可包括：
[0044](a)在每只大鼠的多个部位处对多只远交大鼠注射抗原；
[0045](b)每2周重复注射，达至少6周；
[0046](c)从每只大鼠的一个或多个引流淋巴结收获免疫细胞；
[0047](d)通过阴性选择从免疫细胞消耗非B细胞，以形成富集的B细胞样品；
[0048](e)将富集的B细胞样品与多个融合配偶体接触，以便在B细胞与融合配偶体之间形成杂交瘤；以及
[0049](f)筛选杂交瘤对抗原的特异性。
[0050]在实施例中，该方法可包括：
[0051](a)在每只大鼠的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于产生抗体文库的方法，所述方法包括：(a)对一只或多只动物注射抗原；(b)从每只动物收获包含B细胞的引流淋巴结；(c)在每个B细胞与融合配偶体之间形成杂交瘤；以及(d)针对对所述抗原的结合特异性筛选所述杂交瘤；其中应用以下条件中的至少两个条件：(i)所述动物为远交动物；(ii)在多个部位处对所述动物进行注射；(iii)每两周对所述动物进行注射；(iv)对所述动物进行注射6周至15周；(v)使用多种佐剂，使得不同的动物被注射不同的佐剂；(vi)在步骤(c)之前富集B细胞；和/或(vii)使用经改造以表达表面和分泌的IgG两者的融合配偶体。2.根据权利要求1所述的方法，其中应用条件(i)至(vii)中的两个条件。3.根据权利要求1所述的方法，其中应用条件(i)至(vii)中的三个条件。4.根据权利要求1所述的方法，其中应用条件(i)至(vii)中的四个条件。5.根据权利要求1所述的方法，其中应用条件(i)至(vii)中的五个条件。6.根据权利要求1所述的方法，其中应用条件(i)至(vii)中的六个条件。7.根据权利要求1所述的方法，其中应用条件(i)至(vii)中的七个条件。8.根据权利要求1所述的方法，其中应用条件(i)至(vi)中的至少两个条件。9.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)包括对两只或更多只动物注射抗原。10.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)包括对三只或更多只动物注射抗原。11.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)包括对四只或更多只动物注射抗原。12.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)包括对五只或更多只动物注射抗原。13.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述动物为大鼠。14.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述多个部位为引流淋巴结附近的部位。15.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述多个部位包括背部、肩部、腹膜内、尾根和跗关节中的一个部位或多个部位。16.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中在多个部位处对所述动物进行注射，并且在每个部位处注射的抗原的量介于0.1μg与300μg之间。17.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中在多个部位处对所述动物进行注射，并且在每个部位处注射的抗原的量介于0.5μg与200μg之间。18.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中不超过每周一次对所述动物进行注射。19.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中不超过每两周一次对所述动物进行注射。20.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中对所述动物进行注射6周至15周。21.根据以上权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：