一种嵌合抗原受体联合抗肿瘤药物组合物及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种嵌合型抗原受体联合抗肿瘤药物组合物，所述嵌合型抗原受体包括能够识别肿瘤细胞表面磷脂酰丝氨酸的单链抗体ScFv，所述抗肿瘤药物为可以增加肿瘤细胞系或者原代肿瘤细胞表面磷脂酰丝氨酸表达的化疗药物。本发明专利技术将以磷脂酰丝氨酸为靶点的嵌合抗原受体用于修饰免疫细胞，修饰后的免疫细胞能用于表面磷脂酰丝氨酸阳性的肿瘤的治疗，尤其对尤文肉瘤、急性淋巴瘤/白血病、急性髓系白血病和乳腺癌杀瘤效果显著。病和乳腺癌杀瘤效果显著。病和乳腺癌杀瘤效果显著。

【技术实现步骤摘要】
一种嵌合抗原受体联合抗肿瘤药物组合物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种嵌合抗原受体联合抗肿瘤药物组合物及其应用。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T
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Cell)，原理为通过基因工程的方法，将能识别某种肿瘤抗原的抗体单链可变区(Scfv)与CD3
‑
ζ链的胞内区在体外偶联为一个嵌合蛋白，通过基因转导的方法转染体外培养的患者T细胞，使其表达嵌合抗体受体(CAR)。患者的T细胞被“重新编程”后，生成大量具有杀伤性的CAR
‑
T细胞，能够特异性的靶向肿瘤细胞。CAR
‑
T与传统的免疫疗法相比，具有治疗更精确、靶向更精准、杀瘤更广泛、效果更持久等显著优势。
[0003]磷脂酰丝氨酸(PS)是双层细胞膜的重要组成部分，通常存在于内部小叶中。PS自然暴露于肿瘤细胞、未成熟的肿瘤血管系统和肿瘤来源的微泡上，与树突状细胞、巨噬细胞和T细胞上的受体结合来阻止免疫反应。PS与巨噬细胞上的受体结合，促进巨噬细胞由促炎性M1样表型向原癌M2样表型分化，从而分泌抗炎细胞因子IL
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10和TGF
‑
β，通过抑制肿瘤抗原呈现达到抑制肿瘤的免疫反应；PS也可以抑制T细胞反应的激活。因此，PS暴露引起的免疫反应及其在肿瘤微环境中的免疫抑制作用具有复杂的机制。阻断肿瘤细胞的PS会抑制吞噬作用和T细胞介导的杀伤作用。因此，靶向PS被认为是一种很有前途的癌症治疗策略。/>[0004]尽管目前PS靶向治疗显示出潜在的抗肿瘤活性，但是CAR
‑
T细胞治疗肿瘤中存在肿瘤的高度异质性导致的脱靶以及靶点的单一性导致治疗效果不佳等问题，致使CAR
‑
T疗法的局限性，限制了治疗效果。PS的靶向治疗与化疗药物联合使用，使得化疗药物能够引起肿瘤细胞表面PS的过度表达，激活T细胞的抗肿瘤能力，是作为肿瘤治疗和预后很关键性的技术手段。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供一种以磷脂酰丝氨酸(PS)为靶点治疗广谱性肿瘤的嵌合抗原受体(CAR)，携带靶向PS的ScFv序列的CAR
‑
T细胞可以有效的杀伤表面表达PS的肿瘤细胞，拓展了杀伤肿瘤的广谱性，提高了化合物的杀伤能力。
[0006]本专利技术的技术方案是这样实现的：本专利技术提供了一种嵌合型抗原受体联合抗肿瘤药物组合物，所述嵌合型抗原受体包括能够识别肿瘤细胞表面磷脂酰丝氨酸的单链抗体ScFv或者蛋白序列，所述单链抗体ScFv的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述抗肿瘤药物为可以增加肿瘤细胞系或者原代肿瘤细胞表面磷脂酰丝氨酸表达的化疗药物。
[0007]在以上技术方案的基础上，优选的，所述单链抗体ScFv的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0008]在以上技术方案的基础上，优选的，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0009]在以上技术方案的基础上，优选的，所述嵌合型抗原受体从N端到C端顺次拼接信号肽磷脂酰丝氨酸、单链抗体ScFv、StrepII+G4S、CD8 hinge、CD28跨膜区、CD28胞内结构域、胞内共刺激域4
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1BB和CD3ζ链。
[0010]在以上技术方案的基础上，优选的，所述抗肿瘤药物为紫杉醇、顺铂、阿霉素和地塞米松中的一种。
[0011]在以上技术方案的基础上，优选的，还包括重组嵌合型抗原受体的基因载体，所述重组嵌合型抗原受体的基因载体以病毒载体PTK881
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EF1α为骨架，EF1α为启动子，插入上述嵌合型抗原受体编码核苷酸序列的慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体或转座子载体中的一种载体得到。
[0012]在以上技术方案的基础上，优选的，还包括嵌合型抗原受体的免疫细胞，所述嵌合型抗原受体的免疫细胞由上述的嵌合型抗原受体的编码核苷酸序列或重组嵌合型抗原受体的基因载体转染免疫细胞得到。
[0013]在以上技术方案的基础上，优选的，所述免疫细胞选自脐带血、外周血或IPSC来源的T细胞、NK细胞、NKT细胞、αβT细胞、γδT细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞中的一个。
[0014]本专利技术还提供了一种嵌合型抗原受体联合抗肿瘤药物组合物在制备治疗和预防肿瘤药物中的应用。
[0015]在以上技术方案的基础上，优选的，所述肿瘤为尤文肉瘤、急性淋巴瘤/白血病、急性髓系白血病、恶性神经胶质瘤和乳腺癌中的一种。
[0016]本专利技术的一种嵌合抗原受体联合抗肿瘤药物组合物及其应用相对于现有技术具有以下有益效果：
[0017](1)本专利技术提供的PS为靶点的嵌合抗原受体包括特定的单链抗体ScFv或者蛋白，其用于修饰免疫细胞，修饰后的免疫细胞能用于表面PS阳性的肿瘤的治疗，尤其对尤文肉瘤、急性淋巴瘤/白血病、急性髓系白血病、乳腺癌杀瘤效果显著。
[0018](2)本专利技术提供的CART细胞与抗肿瘤药物联合受用，杀瘤效率得到显著提高。其中以AnnexinA5为靶向PS的蛋白制备的嵌合型抗原受体联合紫杉醇治疗效果最佳。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020]图1为实施例中A1
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CAR、A2
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CAR、A3
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CAR的DNA片段的示意图；
[0021]图2为实施例中PTK881
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EF1α
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A1、PTK881
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EF1α
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A2、PTK881
‑
EF1α
‑
A3质粒图谱；
[0022]图3为JURKAT细胞系在经过紫杉醇处理后磷脂酰丝氨酸的表达量变化示意图；
[0023]图4为CAR
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T细胞对尤文肉瘤细胞系TC71、6647体外杀伤结果示意图；
[0024]图5为CAR
‑
T细胞对急性淋巴母细胞性淋巴瘤细胞系JURKAT、MOLT
‑
4体外杀伤结果示意图；
[0025]图6为CAR
‑
T细胞对急性髓细胞白血病细胞系和乳腺癌细胞系MOLM
‑
13、MCF
‑
7的体外杀伤裂解图；
[0026]图7为CAR
‑
T细胞与尤文肉瘤细胞系TC71、6647体外共孵育后细胞因子IFN
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嵌合型抗原受体联合抗肿瘤药物组合物，其特征在于：所述嵌合型抗原受体包括能够识别肿瘤细胞表面磷脂酰丝氨酸的单链抗体ScFv或者蛋白序列，所述单链抗体ScFv的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述抗肿瘤药物为可以增加肿瘤细胞系或者原代肿瘤细胞表面磷脂酰丝氨酸表达的化疗药物。2.如权利要求1所述的一种嵌合型抗原受体联合抗肿瘤药物组合物，其特征在于：所述单链抗体ScFv的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。3.如权利要求1所述的一种嵌合型抗原受体联合抗肿瘤药物组合物，其特征在于：所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。4.如权利要求1所述的一种嵌合型抗原受体联合抗肿瘤药物组合物，其特征在于：所述嵌合型抗原受体从N端到C端顺次拼接信号肽磷脂酰丝氨酸、单链抗体ScFv、StrepII+G4S、CD8 hinge、CD28跨膜区、CD28胞内结构域、胞内共刺激域4
‑
1BB和CD3ζ链。5.如权利要求1所述的一种嵌合型抗原受体联合抗肿瘤药物组合物，其特征在于：所述抗肿瘤药物为紫杉醇、顺铂、阿霉素和地塞米松中的一种。6.如权利要求1所述的一种嵌合型抗原受体联合抗肿瘤药物组合物，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：张同存，刘家兴，祝海川，史江舟，
申请(专利权)人：武汉科技大学，
类型：发明
国别省市：