肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗及其制备方法，包括制备两亲性单体分子的步骤以及两亲性单体分子自组装成肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的步骤；两亲性单体分子包含依次连接的疏水性功能分子、环境响应性连接分子和亲水性功能分子，制备两亲性单体分子的步骤包括：连接疏水性功能分子和环境响应性连接分子，制备中间连接产物；连接中间连接产物和亲水性功能分子，制备两亲性单体分子；疏水性功能分子为疏水性佐剂分子，亲水性功能分子为亲水性化疗药物分子，或者，疏水性功能分子为疏水性化疗药物分子，亲水性功能分子为亲水性佐剂分子。本发明专利技术通过对制备工艺的整体优化，有效提升纳米原位疫苗的合成效率。有效提升纳米原位疫苗的合成效率。有效提升纳米原位疫苗的合成效率。

【技术实现步骤摘要】
肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术涉及药物制备
，特别涉及一种肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗及其制备方法。

技术介绍

[0002]免疫疫苗是当下肿瘤治疗领域最具潜力的治疗方法之一，理想的肿瘤疫苗可以诱导机体产生较强的特异性抗肿瘤免疫反应，同时具有较小的全身毒副作用。然而，由于大多数的肿瘤抗原特异性较低，抗原性较弱，由此类抗原诱导产生的抗肿瘤免疫反应较弱，而且此免疫反应也会对正常的健康组织器官造成一定的损伤。另外，在实际临床治疗中，即便针对相同类型的肿瘤，不同患者之间的抗原也存在差异，因此，特定的某种肿瘤特异性抗原无法适配所有患者。
[0003]某些化疗药可诱导肿瘤细胞免疫原性死亡，产生肿瘤特异性抗原，并由此产生特异性抗肿瘤免疫反应(也称为原位疫苗)。由纳米材料介导免疫佐剂或者其他免疫刺激剂与化疗药同时应用可以提高原位疫苗的效果，大大增强抗肿瘤免疫反应，但是纳米材料本身具有一定的安全隐患。
[0004]相对于传统的以纳米材料为载体的原位疫苗，由化疗药物和免疫佐剂自身形成的的原位纳米疫苗，不需要其它纳米材料负载，安全性高。传统的不需要其它纳米材料负载的原位纳米疫苗的制备方法，例如：
[0005]CN113318224A公开的双轮状纳米颗粒的其制备步骤包括：将PSMA
‑
MMP
‑
9多肽分子(ESWTKKSPSPEFSGMGPQGIAGQR)与1,2
‑
二氯乙烷和N
‑
羟基丁二酰亚胺按照质量比一定的比例混合，室温搅拌反应2h，再加入盐酸阿霉素，其与多肽分子的质量比为0.1
‑
1:1，室温搅拌反应24h，采用透析袋进行透析，收集分子量较大的物质，冻干，得到PSMA
‑
MMP
‑9‑
DOX；将单磷脂酰A与N,N'
‑
羰基二咪唑按照质量比1:1混合，室温搅拌反应2h，再加入单磷脂酰A 5倍质量的PSMA
‑
MMP
‑9‑
DOX，混合后，室温搅拌反应12h，采用透析袋进行透析，收集分子量较大的物质，得到MPLA
‑
PSMA
‑
MMP
‑9‑
DOX纳米颗粒。
[0006]如上举例的无需额外纳米材料负载的原位疫苗的制备工艺，合成效率有待进一步提高。

技术实现思路

[0007]基于以上技术问题，本专利技术的目的之一是肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法，采用该方法制备肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗，合成效率高。
[0008]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0009]一种肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法，所述制备方法包括制备两亲性单体分子的步骤以及所述两亲性单体分子自组装成肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的步骤；
[0010]所述两亲性单体分子包含依次连接的疏水性功能分子、环境响应性连接分子和亲
水性功能分子，
[0011]制备所述两亲性单体分子的步骤包括：
[0012]在连接疏水性功能分子和环境响应性连接分子，制备中间连接产物；
[0013]连接所述中间连接产物和亲水性功能分子，制备所述两亲性单体分子；
[0014]所述疏水性功能分子为疏水性佐剂分子，所述亲水性功能分子为亲水性化疗药物分子，或者，所述疏水性功能分子为疏水性化疗药物分子，所述亲水性功能分子为亲水性佐剂分子。
[0015]在其中一些实施例中，制备所述两亲性单体分子的步骤包括：
[0016]混合所述疏水性功能分子和第一活化剂进行第一活化反应，制备第一活化产物；
[0017]混合所述第一活化产物和所述环境响应性连接分子进行第一连接反应，制备所述中间连接产物；
[0018]混合所述中间连接产物和第二活化剂进行第二活化反应，制备第二活化产物；
[0019]混合所述第二活化产物和所述亲水性功能分子进行第二连接反应，制备所述两亲性单体分子。
[0020]在其中一些实施例中，所述第二活化反应的条件包括：温度为32℃
‑
42℃，时长为3.5h
‑
4.5h。
[0021]在其中一些实施例中，所述疏水性功能分子为疏水性佐剂分子，所述亲水性功能分子为亲水性化疗药物分子，则制备所述两亲性单体分子的步骤还包括：向所述第二活化产物和所述亲水性功能分子中加入催化剂再进行所述第二连接反应，所述催化剂包含4
‑
二甲氨基吡啶。
[0022]在其中一些实施例中，所述第一活化反应的条件包括：温度为22℃
‑
28℃，时长为2h
‑
4h。
[0023]在其中一些实施例中，所述第一活化剂包含N,N
’‑
羰基二咪唑；或/和，所述疏水性功能分子和所述第一活化剂的质量比为(0.75
‑
1.5):(1
‑
2)。
[0024]在其中一些实施例中，所述第一连接反应的条件包括：温度为22℃
‑
28℃，时长为24h
‑
48h。
[0025]在其中一些实施例中，所述疏水性功能分子和所述环境响应性连接分子的质量比为(0.75
‑
1.5):(2
‑
4)。
[0026]在其中一些实施例中，所述第二活化剂包含质量比为(3.3
‑
6.6):(1
‑
2)的1,2
‑
二氯乙烷和N
‑
羟基丁二酰亚胺。
[0027]在其中一些实施例中，所述第二连接反应的条件包括：温度为22℃
‑
28℃，时长为24h
‑
48h。
[0028]在其中一些实施例中，所述疏水性功能分子为疏水性化疗药物分子，所述亲水性功能分子为亲水性佐剂分子，每0.75mg
‑
1.5mg所述疏水性功能分子对应的所述亲水性功能分子的用量为5OD
‑
10OD；
[0029]所述疏水性功能分子为疏水性佐剂分子，所述亲水性功能分子为亲水性化疗药物分子，每0.75mg
‑
1.5mg所述疏水性功能分子对应的所述亲水性功能分子的用量为1.5mg
‑
3mg。
[0030]在其中一些实施例中，所述疏水性化疗药物分子包含紫杉醇、奥沙利铂、吲哚菁绿
DOX，B：NPs)比较图；
[0050]图11为本专利技术一个实施例各组处理肿瘤碎片刺激后BMDCs促成熟及活化影响比较图；
[0051]图12为本专利技术一个实施例各组处理的抗肿瘤能力(A：荷瘤小鼠肿瘤体积，B：荷瘤小鼠生存期)比较图；
[0052]图13为本专利技术一个实施例各组处理的荷瘤小鼠肿瘤体积变化比较图；
[0053]图14为本专利技术一个实施例各组处理的荷瘤小鼠生存期比较图本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括制备两亲性单体分子的步骤以及所述两亲性单体分子自组装成肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的步骤；所述两亲性单体分子包含依次连接的疏水性功能分子、环境响应性连接分子和亲水性功能分子，制备所述两亲性单体分子的步骤包括：连接所述疏水性功能分子和所述环境响应性连接分子，制备中间连接产物；连接所述中间连接产物和所述亲水性功能分子，制备所述两亲性单体分子；所述疏水性功能分子为疏水性佐剂分子，所述亲水性功能分子为亲水性化疗药物分子，或者，所述疏水性功能分子为疏水性化疗药物分子，所述亲水性功能分子为亲水性佐剂分子。2.根据权利要求1所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，制备所述两亲性单体分子的步骤包括：混合所述疏水性功能分子和第一活化剂进行第一活化反应，制备第一活化产物；混合所述第一活化产物和所述环境响应性连接分子进行第一连接反应，制备所述中间连接产物；混合所述中间连接产物和第二活化剂进行第二活化反应，制备第二活化产物；混合所述第二活化产物和所述亲水性功能分子进行第二连接反应，制备所述两亲性单体分子。3.根据权利要求2所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述第二活化反应的条件包括：温度为32℃
‑
42℃，时长为3.5h
‑
4.5h。4.根据权利要求2所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述疏水性功能分子为疏水性佐剂分子，所述亲水性功能分子为亲水性化疗药物分子，则制备所述两亲性单体分子的步骤还包括：向所述第二活化产物和所述亲水性功能分子中加入催化剂再进行所述第二连接反应，所述催化剂包含4
‑
二甲氨基吡啶。5.根据权利要求2至4任一项所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述第一活化反应的条件包括：温度为22℃
‑
28℃，时长为2h
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4h；或/和，所述第一活化剂包含N,N
’‑
羰基二咪唑；或/和，所述疏水性功能分子和所述第一活化剂的质量比为(0.75
‑
1.5):(1
‑
2)；或/和，所述第一连接反应的条件包括：温度为22℃
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘兰霞，邓博，马莹莹，
申请(专利权)人：中国医学科学院生物医学工程研究所，
类型：发明
国别省市：