EB病毒阴性的NK-92细胞及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种EB病毒阴性的NK‑92细胞及其制备方法，通过基因编辑技术成功去除了NK‑92细胞中携带的EB病毒，获得了EB病毒阴性的NK‑92细胞株；提高了NK‑92细胞的安全性，为后续以NK‑92为基础的免疫细胞药物治疗奠定基础。

Epstein Barr virus negative NK-92 cells and its preparation

【技术实现步骤摘要】
EB病毒阴性的NK-92细胞及其制备方法
本专利技术涉及技术生物医药
，尤其是一种EB病毒阴性的NK-92细胞及其制备方法。
技术介绍
自然杀伤(NK)细胞是先天性免疫系统的重要组成部分,具有抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节作用。NK细胞一直被认为是杀死癌细胞和治疗感染的绝佳武器。与T淋巴细胞不同，NK细胞无需肿瘤特异性抗原识别便可以直接杀伤肿瘤细胞,是肿瘤免疫治疗的重要效应细胞。人类NK细胞约占全血淋巴细胞的10％～15％。目前研究认为NK细胞特异性表达CD56，而缺乏T细胞抗原CD3。由于NK细胞纯化和体外大量扩增存在一定的技术难度。因此科学家试图建立细胞系，用同种异体NK细胞进行肿瘤生物治疗，目前国内外科学家在NK抗肿瘤研究中已先后建立HANK、KHYG-1、NK-92、NKL、PLT、MOTN、IMC-1、NK-YS、KAI3、SNK-1、SNK6以及YT、NK3.3等，还有通过稳定转染IL-2获得的NK-92MI、IL-2/NKL、IL-2/NK3.3等转基因NK细胞系。而NK-92细胞是1992年建立的来自非何杰金淋巴瘤患者的NK本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于EB病毒敲除的sgRNA，包括与Cas9配合使用的至少一个sgRNA，所述sgRNA用于敲除EB病毒中的基因片段，所述基因片段包括EBNA1、OriP、EphA2、BALF4和LMP中的一个或多个。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于EB病毒敲除的sgRNA，包括与Cas9配合使用的至少一个sgRNA，所述sgRNA用于敲除EB病毒中的基因片段，所述基因片段包括EBNA1、OriP、EphA2、BALF4和LMP中的一个或多个。


2.根据权利要求1所述的用于EB病毒敲除的sgRNA，当所述sgRNA为两个sgRNA时，所述两个sgRNA分别为sgRNA1或sgRNA2，所述sgRNA1的序列如SEQIDNO:1所示或其同源序列；所述sgRNA2的序列如SEQIDNO:2所示或其同源序列；优选地，所述sgRNA1或sgRNA2的同源序列与原序列的同源性均为95％或以上、96％或以上、97％或以上、98％或以上、99％或以上、99.1％或以上、99.2％或以上、99.3％或以上、99.4％或以上、99.5％或以上、99.6％或以上、99.7％或以上、99.8％或以上、或99.9％或以上。


3.一种用于EB病毒敲除的系统，其特征在于，包括权利要求1或2所述的sgRNA及与其配合使用的Cas9，所述Cas9与sgRNA相配合，构成用于阻断EB病毒复制的复合物。


4.根据权利要求3所述的用于EB病毒敲除的系统，其特征在于，所述系统还包括质粒载体，所述Cas9设在所述载体上。


5.根据权利要求3或4所述的用于EB病毒敲除的系统，其特征在于，所述Cas9的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示或其同源序列，所述同源序列与原序列的同源性为95％或以上、96％或以上、97％或以上、98％或以上、99％或以上、99.1％或以上、99.2％或以上、99.3％或以上、99.4％或以上、99.5％或以上、99.6％或以上、99.7％或以上、99.8％或以上、或99.9％或以上；
优选地，所述系统为CRISPR-Cas9系统。


6.一种EB病毒阴性的NK-92细胞的制备方法，包括以下步骤：
1)设计用于EB敲除的至少一个sgRNA，再将其扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：栗凤鹏，曹青，李华顺，
申请(专利权)人：阿思科力苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32