一种csf1ra基因缺失斑马鱼突变体的制备及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种csf1ra基因缺失斑马鱼突变体的制备及其应用，本发明专利技术利用CRISPR/Cas9技术设计csf1ra基因敲除sgRNA靶点，首次成功构建了csf1ra基因缺失斑马鱼突变体，此外，本发明专利技术的突变体生物模型可用于csf1ra基因功能机制的深入研究，包括csf1ra基因在神经系统发育中的作用研究。

Preparation and application of a csf1ra gene deleted zebrafish mutant

【技术实现步骤摘要】
一种csf1ra基因缺失斑马鱼突变体的制备及其应用
本专利技术涉及基因敲除
，更具体地，涉及csf1ra基因缺失斑马鱼突变体的制备和应用。
技术介绍
集落刺激因子受体(colonystimulatingfactor1receptor，CSF1R)是III型受体型酪氨酸激酶血小板衍生生长因子(platelet-derivedgrowthfactorreceptor，PDGFR)家族的一员，存在于人类、小鼠、大鼠、斑马鱼等物种中。生理情况下，CSF1R通过与配体IL-34的结合影响单核/巨噬细胞的增殖、分化及存活等行为。病理情况下，CSF1R的异常表达与多种疾病密切相关。在造血系统中，CSF1R的突变可引发骨髓增生异常综合征和急性巨核细胞白血病等疾病；在非造血系统中，CSF1R过表达可见于多种实体肿瘤，参与恶性肿瘤的增殖、转移和微环境调控等。因此，拓展对CSF1R功能的认识，对于深入理解其在相关疾病发生发展中的作用具有重要的意义。成簇规律间隔短回文重复系统(clusteredregularlyinterspacedshortpalin本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.靶向斑马鱼csf1ra基因的sgRNA，所述的sgRNA的序列包括SEQ ID NO.1～5所示的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.靶向斑马鱼csf1ra基因的sgRNA，所述的sgRNA的序列包括SEQIDNO.1～5所示的核苷酸序列。


2.一种csf1ra基因缺失斑马鱼突变体的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：
1)设计并合成识别csf1ra基因靶位点的sgRNA序列，所述的sgRNA序列包括SEQIDNO.1～5所示的核苷酸系列；
2)将所述的sgRNA序列和Cas9mRNA共同注射到斑马鱼受精卵中，培养获得稳定遗传的csf1ra基因缺失斑马鱼突变体。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)具体包括：查询斑马鱼csf1ra基因序列及功能结构域，结合CRISPR/Cas9敲除原理，设计并合成sgRNA序列，在sgRNA识别序列前添加T7启动子，后方添加sgRNA骨架，以此为模板，用T7RNA聚合酶进行sgRNA体外转录。


4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述的Cas9mRNA是按照以下步骤获得的：以T7驱动的人源化Cas9编码序列为模板，用T7RNA聚合酶进行Cas9体外转录，然后戴帽并加polyA尾。


5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述的斑马鱼受精卵为1-4细胞期受精卵，显微注射剂量为1nL，其中sgRNA的注射浓度为50...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉皓，尚悦，孟慧玲，崔建林，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津;12