本发明专利技术公开了一种NK细胞的应用及包括该NK细胞的药物组合物及其应用，所述应用为NK细胞在制备肿瘤微环境中PD‑1或PD‑L1由阴转阳或由低表达到高表达的药物中的应用；所述抗肿瘤的药物组合物，包括有效治疗量的上述NK细胞，以及与PD‑1或PD‑L1特异结合靶点药物，所述靶点药物通过与PD‑1或PD‑L1特异结合阻断PD‑1和PD‑L1的相互作用。本发明专利技术的有益效果为：通过将NK细胞添加在PD‑1或PD‑L1阴性或低表达的癌(肿瘤)细胞中，意外地发现能够使肿瘤细胞中PD‑1或PD‑L1由阴转阳，或由低表达到高表达，从而有效阻止肿瘤细胞中免疫逃逸的发生，提高治疗效果。
Application of NK cells and pharmaceutical compositions including NK cells and their applications
The invention discloses an application of NK cells and a pharmaceutical composition including the NK cells and its application, which is the application of NK cells in the preparation of drugs from Yin to Yang or from low expression to high expression in tumor microenvironment, and the anti-cancer pharmaceutical composition, including the NK cells with effective therapeutic dose. The target drug blockades the interaction between PD_1 and PD_L1 by specific binding with PD_1 or PD_L1. The beneficial effects of the present invention are as follows: by adding NK cells to cancer (tumor) cells with negative or low expression of PD 1 or PD L1, it is unexpectedly found that PD 1 or PD L1 in tumor cells can be changed from negative to positive, or from low expression to high expression, thus effectively preventing the occurrence of immune escape in tumor cells and improving the therapeutic effect.
【技术实现步骤摘要】
NK细胞的应用及包括该NK细胞的药物组合物及其应用
本专利技术涉及生物技术，涉及一种NK细胞的应用及包括该NK细胞的药物组合物及其应用。
技术介绍
随着肿瘤免疫治疗研究的逐步进展，程序性死亡生长因子-1(PD-1/CD279)及其配体PD-L1/2(B7-H1/CD274)作为肿瘤微环境中的重要成员获得众多研究者的青睐。PD-L1全称程序性死亡受体-配体1，英文名字programmedcelldeath-Ligand1，是大小为40kDa的第一型跨膜蛋白。PD-1全称程序性死亡受体1，英文名字为programmeddeath1，是一种重要的免疫抑制分子，为CD28超家族成员。PD-1(programmeddeath-1)主要表达于T细胞及初级B细胞表面，PD-1的两个配体(PD-L1和PD-L2)，广泛表达于抗原提呈细胞(APC)等。PD-1与其配体的相互作用，在免疫应答的负性调控方面发挥着重要作用。在许多人类肿瘤组织，如卵巢癌、膀胱癌、恶性黑色素瘤和胶质瘤中均可检测到PD-L1蛋白的表达，肿瘤部位的微环境可诱导肿瘤细胞上的PD-L1的表达，表达的PD-L1有利于肿瘤的发生和生长，诱导抗肿瘤T细胞的凋亡，进而逃避免疫系统的攻击。PD-1与配体PD-L1/2结合使ITIM和ITSM内的酪氨酸磷酸化，ITIM、ITSM与SHP-1和SHP-2结合，通过BCL·XL的下调表达和T细胞的分化传递T细胞抑制性信号，间接导致细胞死亡。PD-1PD-L1/2途径也被认为是介导免疫抑制的路径，PD-1作为一个负性调控点起作用。抑制PD-1与其配体的结合，可以使肿瘤细胞暴露于免疫系统的杀伤视野，进而达到杀伤肿瘤组织及治疗癌症的作用。2014年9月4号，美国食品及药物管理局(foodanddrugadm-inistration，FDA)批准了Keytruda(pembrolizumab)用于治疗对其它药物治疗无效的晚期或无法切除的黑色素瘤患者，成为阻断PD-1细胞通路的首款获得FDA批准的药物。在2016AACR年会上，华盛顿大学医学院皮肤病学科教授PaulT.Nghiem，MD，PhD做出报道，pembrolizumab这一具有抗PD-1作用的单克隆抗体可诱导高级别默克尔细胞癌的高反应性，中位无进展生存期PFS是9个月，传统化疗的患者PFS是3个月。近日百时美PD-1抑制剂Opdivo在临床试验方面取得新进展，发布了两组数据，其中一组显示，对当前任何药物均无治疗反应的晚期黑色素瘤的患者在使用Opdivo治疗中取得了34％五年生存率的结果。值得注意的是，IV期黑色素瘤患者的五年生存率通常只有15％到20％。另一组数据表明Opdivo和Yervoy联用治疗晚期黑色素瘤患者中取得22％的总缓解率，并且达到了69％两年总体生存率。另一项研究表明难治复发性或转移性头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)患者在使用Opdivo治疗后生存期和存活率大大提高。数据表明，与对照组相比Opdivo治疗组死亡风险显著降低30％，中位总生存期显著延长。Opdivo治疗组一年存活率为36％，对照组为16.6％。此外，该研究还通过口咽部肿瘤HPV状态及PD-L1表达状态评估了Opdivo相对于对照方案的疗效。近期，Keytruda获FDA治疗复发性或难治性(R/R)经典型霍奇金淋巴瘤(cHL)的突破性药物资格。自然杀伤(NK)细胞是用于过继癌症免疫治疗的重要效应细胞类型。类似于T细胞，NK细胞可修饰以表达嵌合抗原受体(CARs)，以增强抗肿瘤活性。CD19CAR-T细胞在CD19阳性恶性肿瘤患者的成功应用，证明这种方法用于癌症免疫治疗(seee.g.Gruppetal,2013)的可行性。CAR-T细胞靶向多种不同的肿瘤抗原正在积极的进行临床开发(Kalosetal.,2013)。NK细胞在癌症免疫监视中起重要作用，并且代表用于过继癌症免疫疗法的重要效应细胞类型。与T细胞相比，它们不需要事先活化和识别复合体MHC分子呈递的肽抗原。相反，通过编码的细胞表面受体偶联CD3ζ分子，在适当的刺激下，NK细胞可表现出杀伤活性。但是目前用PD-1抗体或PD-L1抗体治疗癌症的过程中发现，有很大一部分患者用药后效果不明显，可能是患者体内存在某些与PD-1或PD-L1结合的保护因子，或者这些肿瘤患者体内PD-1或PD-L1为阴性或低表达，使PD-1抗体或PD-L1抗体无法与PD-1或PD-L1结合，从而无法通过PD-1抗体或PD-L1抗体抑制肿瘤细胞内的免疫逃逸现象，进而无法杀伤和治疗肿瘤。如何能够有效地解决这一问题，成为当前通过PD-1抗体或PD-L1抗体有效治疗癌症急需解决的问题。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术的一个目的是提供一种NK细胞，本专利技术的另一个目的是提供一种包括NK细胞的抗肿瘤药物组合物，本专利技术的又一个目的是提供一种上述药物组合物的应用，通过添加NK细胞使肿瘤细胞中PD-1或PD-L1由阴转阳，或由低表达到高表达，从而通过PD-1抗体或PD-L1抗体抑制肿瘤细胞内的免疫逃逸现象，使NK细胞与PD-1或PD-L1抗体联合使用的情况下，有效地治疗癌症。本专利技术提供一种NK细胞在制备肿瘤微环境中PD-1或PD-L1由阴转阳或由低表达到高表达的药物中的应用。在本专利技术的一个优选实施例中，所述NK细胞为CAR-NK细胞。在本专利技术的一个优选实施例中，所述CAR-NK细胞为ROBO1CAR-NK细胞。在本专利技术的一个优选实施例中，所述肿瘤为肿瘤细胞中PD-1或PD-L1呈阴性或低表达的肿瘤。在本专利技术的一个优选实施例中，所述肿瘤为胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾细胞癌、头颈部及食管鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。本专利技术还提供一种抗肿瘤药物组合物，包括有效治疗量的上述NK细胞，以及与PD-1或PD-L1特异结合靶点药物，所述靶点药物通过与PD-1或PD-L1特异结合阻断PD-1和PD-L1的相互作用。在本专利技术的一个优选实施例中，所述NK细胞与肿瘤细胞的效靶比为(0.1～5)：1：1；所述靶点药物的浓度为0～10mg/ml。在本专利技术的一个优选实施例中，所述靶点药物的浓度为10μg/ml。在本专利技术的一个优选实施例中，所述靶点药物为PD-1或PD-L1抗体或抗原结合片段。在本专利技术的一个优选实施例中，所述PD-1或PD-L1抗体为PD-1或PD-L1单抗药物。在本专利技术的一个优选实施例中，所述靶点药物为PD-L1CAR-T细胞药物或PD-L1CAR-NK细胞药物。在本专利技术的一个优选实施例中，所述靶点药物为PD-1或PD-L1分子抑制剂。在本专利技术的一个优选实施例中，所述药物组合物还包括药学上可接受的盐、载体、赋型剂和辅料。按照本专利技术所属
的一些通用方法，本专利技术的药物可制成药学上可接受的各种剂型，如片剂、胶囊剂、口服液剂、锭剂、注射剂、软膏剂、颗粒剂或各种缓控释制剂等。优选为注射剂，可经皮下注射给药。本专利技术药物的载体可以是药学领域中可得到的常见类型，包括：黏合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂或基质等。在本专利技术的一个优选实施例中，所述肿瘤为肿瘤中PD-1或PD-L1呈阴性或低表达的肿瘤。在本专利技术的一个优选实施例中，所述肿瘤为胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.NK细胞在制备肿瘤微环境中PD‑1或PD‑L1由阴转阳或由低表达到高表达的药物中的应用。
【技术特征摘要】
2018.06.13 CN 20181060602161.NK细胞在制备肿瘤微环境中PD-1或PD-L1由阴转阳或由低表达到高表达的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述NK细胞为CAR-NK细胞；优选地，所述CAR-NK细胞为ROBO1CAR-NK细胞。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为肿瘤细胞中PD-1或PD-L1呈阴性或低表达的肿瘤；优选地，所述肿瘤为胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾细胞癌、头颈部及食管鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。4.一种抗肿瘤的药物组合物，包括有效治疗量的权利要求1至3中任一项中所述的NK细胞，以及与PD-1或PD-L1特异结合的靶点药物，所述靶点药物通过与PD-1或PD-L1特异结合阻断PD-1和PD-L1的相互作用。5.根据权利要求4所述的抗肿瘤的...
【专利技术属性】
技术研发人员：李华顺，孙启鸿，韩昆昆，
申请(专利权)人：阿思科力苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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