一种淡水鱼类肝吸虫快速免疫检测试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术公开了一种淡水鱼类肝吸虫快速免疫检测试剂盒和检测方法，该试剂盒的盒体内设置酶联反应板、酶结合物、洗涤液、底物液、显色剂、稀释液、终止液；酶联反应板为从肝吸虫中提取可溶性抗原并纯化，然后包被可溶性抗原制得的酶联反应板；酶结合物为辣根过氧化酶标记抗鱼免疫球蛋白的酶结合物。通过利用快速免疫检测技术的敏感性、特异性以及实用性、经济性，建立了淡水鱼类肝吸虫快速免疫检测方法；方便实用，试剂盒为即开即用型，用户不必另行配制或稀释，操作简单易行；不仅可以用仪器定量判断结果，也可以肉眼直接判断，适合于条件受限的现场检测；安全环保，采用无害的酶联免疫显色剂四甲基联苯胺，避免了常规方法所带来的危害和污染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物;险测
，尤其涉及的是， 一种淡水鱼类肝吸虫 快速免疫检测试剂盒和检测方法。
技术介绍
肝吸虫是一种常见人体寄生虫，通过食入含有肝吸虫嚢蚴的淡水鱼类 而感染。肝吸虫成虫寄生于人体肝脏胆管内，导致肝吸虫病，引起一系列 的肝胆损害，包括胆管炎症、结石、胆汁性肝硬化，最终可以诱发肝癌。目前对人体肝吸虫病的诊断方法很多，包括病原学方法检查粪便虫卵 和免疫学方法检测病人血清中肝吸虫抗体。病原学方法准确可靠，但虫卯 小，排卯不规律，容易漏诊，而且要采集病人粪便，用清水反复沉淀并淘 洗多次，取沉渣，之后由专业技术人员用高倍显微镜检查，过程较长，—— 般需几个小时或更多，操作烦瑣不便，耗费人工，难以推广普查；免疫学 方法敏感特异，方便快速，检测血清即可，因此，得到较为广泛的应用。在免疫学方法中，酶联免疫检测技术应用最为普遍，国内在20世纪90等，华支睾吸虫病快速ELISA诊断试剂盒的建立，中国寄生虫病防治杂志， 1995年8巻4期，起止页码295-296)，每文感性达到92%以上，特异性达 到98%以上。然而，要真正切断肝吸虫流行，保障人民健康，必须从源头上对淡水 鱼肉品进行安全监^S防止含有肝吸虫嚢姆的病鱼流入市场。但目前对淡 水鱼肝吸虫检测还缺乏有效手段。传统的鱼类肝吸虫检查，是采用显微镜对鱼肉中的肝吸虫嚢坳进行观测，但这种方法要在一般重达1000克的鱼肉 中，肉眼观察到不足1毫米的嚢坳是非常困难的，不仅效率低下，而且极 易发生遗漏。因此，显微镜检查鱼肉，查肝吸虫，除了科学研究外，几乎 没有在实际中得到应用，这也是造成淡水鱼肝吸虫缺乏安全监督的重要原因。而淡水鱼肝吸虫免疫;f全测方法迄今也未建立。因此，现有技术没有检测淡水鱼类肝吸虫的有效工具。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种淡水鱼类肝吸虫快速免疫检测试剂盒和检 测方法，从而提供一种检测淡水鱼类肝吸虫的检测工具和方法。 本专利技术的技术方案如下一种淡水鱼类肝吸虫快速免疫检测试剂盒，其盒体内设置酶联反应板、 酶结合物、洗涤液、底物液、显色剂、稀释液、终止液；其中，所述酶联 反应板为从肝吸虫中提取可溶性抗原并纯化，然后包被所述可溶性抗原制 得的酶联反应板；所述酶结合物为辣根过氧化酶标记抗鱼免疫球蛋白的酶 结合物。所述的试剂盒，其中，所述酶联反应板是在通用聚苯乙烯微孔板上包 被可溶性抗原，然后在室温静置12~24小时，冷冻真空干燥后装袋封口制 成；其中，所述可溶性抗原是从感染动物中获取肝吸虫成虫，并提取得到 其可溶性抗原；包被液为含0.01%~ 1%可溶性抗原的緩冲液，所述緩沖液 是0.01 mol/L~0.15 mol/L的磷酸盐、硼酸盐或碳酸盐緩冲液，pH7.5 ~ pH9,5。所述的试剂盒，其中，所述酶结合物为采用纯化的鱼免疫球蛋白免疫 动物，分离出抗鱼免疫球蛋白，经纯化后采用辣根过氧化酶进行免疫标记 制成。所述的试剂盒，其中，所述酶结合物是含0.05%~ 1%的辣根过氧化物酶标记抗鱼免疫^求蛋白的0.01mol/L ~ 0.05 mol/L磷酸盐缓冲液，pH6 ~ 8; 并且添加含量足以抑制细菌生长的防腐剂。所述的试剂盒，其中，其还至少包括阴性对照品、阳性对照品其中之所述的试剂盒，其中，所述洗涤液为包含有0.1%~ 1%表面活性剂的 0.01mol/L-0.5mol/L磷酸盐緩冲液，pH6 ~ 8;底物液为0.1%~0.5%过氧化 氢溶液；显色剂为3,3，,5,5，-四曱基联苯胺;稀释液为0.01mol/L ~ 0.5mol/L 磷酸盐緩冲液，pH6 8;终止液为1 mol/L~2mol/L的^5危酸或氳氧化钠。一种用于权利要求1所述的试剂盒的检测方法，其包括步骤Al、从感染动物中获取肝吸虫成虫，并提取得到其可溶性抗原，在通 用聚苯乙烯微孔板上包被所述可溶性抗原，然后在室温静置12~24小时， 冷冻真空干燥后制成酶联反应板，并装袋封口保存；其中，包被液是含有 0.01% 1%所述可溶性抗原的緩冲液，所述缓沖液是pH7.5 pH9.5的0.01 mol/L ~ 0.15 mol/L的磷酸盐、硼酸盐或碳酸盐緩沖液；A2、采用纯化的鱼免疫球蛋白免疫动物，分离出抗鱼免疫球蛋白，经 纯化后采用辣根过氧化酶进行免疫标记制成酶结合物；A3、所述酶联反应板每孔分别加稀释液1滴，加入待检的样本50ul， 混匀；其中，所述稀释液为0.01mol/L 0.5mol/L磷酸盐緩冲液，pH6 8;A4、充分反应后甩去孔内液体，每孔加洗涤液l滴后立即注满纯净水， 静置30秒后甩去，再用纯净水洗涤至少一次，恩去，拍干；其中，所述洗 涤液为包含有0.1% ~ 1%表面活性剂的0.01mol/L ~ 0.5mol/L磷酸盐緩冲液， pH6 8;A5、每孔加酶结合物2滴，充分反应后甩去孔内液体，每孔加洗涤液 1滴后立即注满纯净水，静置30秒后甩去，再用纯净水洗涤至少一次，甩 去，拍干；A6、加底物液和显色剂各1滴，混匀，充分显色反应后加终止液1滴，混匀，终止反应；其中，所述底物液为0.1%~0.5%过氧化氢溶液；所述显 色剂为3,3，,5,5，-四曱基联苯胺；所述终止液为1 mol/L~2mol/L的硫酸或氢 氧化钠。所述的检测方法，其中，步骤A3中，还包括步骤设置阴性孔、阳性 孔及空白对照孔，阴性孔、阳性孔分别加稀释液1滴，然后分别加入阴性 对照品、阳性对照品各50ul，空白对照孔加入稀释液2滴。所述的4企测方法，其中，所述充分反应为37。C避光反应30分钟，所述 充分显色反应为37'C避光反应IO分钟。所述的一企测方法，其中，步骤A1中，在室温静置12~24小时之后， 还包括步骤采用0.1%~5%卵清蛋白或牛血清白蛋白封闭2小时，经冷冻 真空干燥后制成所述酶联反应板。采用上述方案，本专利技术通过利用快速免疫检测技术的敏感性、特异性 以及实用性、经济性，建立了淡水鱼类肝吸虫快速免疫检测方法，同时适 用于活鱼和死鱼；方便实用，试剂盒为即开即用型，用户不必另行配制或 稀释，操作简单易行；不仅可以用仪器定量判断结果，也可以肉眼直接判 断，尤适合于条件受限的现场检测；安全环保，采用了无害的酶联免疫显 色剂四曱基联苯胺，避免了常规方法所带来的危害和污染。附图说明图l是本专利技术产品的结构示意图； 图2是本专利技术方法的流程示意图。具体实施例方式以下对本专利技术的较佳实施例加以详细说明。如图l所示，本专利技术提供了一种淡水鱼类肝吸虫快速免疫检测试剂盒， 其盒体内设置酶联反应板101和各种试剂102，各种试剂具体包括酶结合物、洗涤液、底物液、显色剂、稀释液、终止液等等；其中，所述酶联反应板 为从肝吸虫中提取可溶性抗原并纯化，然后包^^所述可溶性抗原制得的酶联反应板；所述酶结合物为辣根过氧化酶标记抗鱼免疫球蛋白的酶结合物。 以下对本专利技术试剂盒的酶联反应板和各种试剂进行详细说明。室温静置12~24小时，冷冻真空干燥后装袋封口制成。在室温静置12~24 小时之后，还可以采用0.1%~5%卵清蛋白或牛血清白蛋白封闭2小时，然 后再冷冻真空干燥后装袋封口制成所述酶联反应板。其中，通用聚苯乙烯微孔板，可以是48孔板或96孔板，或其他板；所述可溶性抗原是从感染 动物中获取肝吸虫成虫，并提取得到其可溶性抗原，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种淡水鱼类肝吸虫快速免疫检测试剂盒，其盒体内设置酶联反应板、酶结合物、洗涤液、底物液、显色剂、稀释液、终止液；其特征在于，所述酶联反应板为从肝吸虫中提取可溶性抗原并纯化，然后包被所述可溶性抗原制得的酶联反应板；所述酶结合物为辣根过氧化酶标记抗鱼免疫球蛋白的酶结合物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡绍良，饶乐，
申请(专利权)人：深圳市康百得生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]