利用蛋白质水解物的蛋白质多糖类双涂层乳酸菌制备方法技术

本发明专利技术涉及利用蛋白质水解物的蛋白质多糖类双涂层乳酸菌的制备方法及由此方法制备的具有双涂层的乳酸菌。根据本发明专利技术制备的具有蛋白质多糖类双涂层的乳酸菌的冷冻干燥存活率、耐酸性及耐胆汁性非常优秀。因此，本发明专利技术的具有蛋白质多糖类双涂层的乳酸菌可在制备发酵乳、加工乳、酱类、加工食品、功能性饮料、功能性食品、普通食品等时非常有用。

【技术实现步骤摘要】
利用蛋白质水解物的蛋白质多糖类双涂层乳酸菌制备方法
本专利技术涉及利用蛋白质水解物的蛋白质多糖类双涂层乳酸菌的制备方法及由此方法制备的具有双涂层的乳酸菌。
技术介绍
乳酸菌(lacticacidbacteria)也称为乳酸菌或乳酸，它是一种生活在哺乳类的肠道内并防止由杂菌引起的异常发酵并用作理肠剂的重要细菌。例如，保加利亚乳酸菌(L.bulgaricus)是已知时间最长的乳酸菌，用于酸奶的制备，也用作制备奶酪和发酵黄油时的起子。并且，好氧性乳酸菌(L.acidophilus)存在于人类及所有哺乳类和其他动物的肠道中，用在黄油或牛奶的制备或肠道内自我中毒的治疗中。并且，乳酸乳杆菌(L.lactis)生成DL-乳酸，其总是存在于牛奶中并用于制备黄油或奶酪，作为乳酸乳杆菌最为重要的菌。如上所述的有用的乳酸菌落在肠道中，通过激活肠内运动来改善便秘或腹泻症并使排便活动顺畅，除此之外，具有免疫力提高、抗高血脂、抗过敏性皮炎、减肥效果、抗糖尿病等各种生理活性，因此广泛使用于健康功能食品、控制肠道用药品、改善皮肤用化妆品、饲料添加剂等中。但是，为了发挥上述的生理作用，需要摄取比以往通过酸奶等食品摄取量更多的乳酸菌。因此，通过仅分离乳酸菌来以粉末或胶囊形式简单食用的方法已被大众化。与主要利用发酵产物的其他产业用微生物不同，由于这些乳酸菌利用活菌本身，因此存在有效期及摄取时消化过程中存活率的保持非常重要的问题。即，乳酸菌本身是益生菌，当口服摄取时人体内pH降至3以下，并且生长被胃肠和小肠中分泌的消化酶及胆汁酸抑制，不仅导致到达大肠的活菌数量减少，而且肠道内落实率下降。因此，即使乳酸菌是在效能和价值方面非常有益的菌，但是由于非常不稳定，因此在长期保管和使用方面有很多局限性，使用它们的发酵乳产品及益生菌由于制备过程和保管期间中氧气或氧化应激而导致存活率大大降低，从而对产业应用或口服摄取时的功效发挥造成了障碍。为了解决如上所述的问题，开发了涂敷乳酸菌的多种方法，最初，有使用胶囊剂的肠溶涂敷剂和明胶、使用多糖类、胶类的微胶囊化等，但是已被指出使用昂贵的涂敷剂或添加工序的问题。为了解决该问题，竞争性地开发了制备高浓度的乳酸菌存活的双重结构的果冻的方法、通过添加具有水溶性聚合物、透明质酸、多孔颗粒的涂敷剂及蛋白质来进行四重涂敷的方法(韩国专利申请第10-2011-0134486号)、利用水溶性聚合物、功能性水合透明质酸、多孔颗粒及蛋白质进行四重涂敷的方法(韩国专利申请第10-2015-0129986号)、为了增进肠内存活率而用酪蛋白、涂敷剂、食用油脂、植物乳杆菌的细胞外聚合物(ExtracellularPolymericSubstance)及海藻酸涂敷乳酸菌的方法(韩国专利申请第10-2016-0172568号)、为了提高肠道内落实性而用丝素蛋白涂敷的方法(韩国专利申请第10-2017-0045326号)。但是，这种改进的乳酸菌涂敷技术也未能完全涂敷乳酸菌的表面，并且在冷冻干燥存活率、乳酸菌的耐热性、耐酸性及耐胆汁性、肠内落实性等仍然不够优秀，存在在保管及流通过程中存活率下降的问题。在本说明书中提及的专利文献及参照文献通过引用并入本文，如同每个文献通过引用被特定为单独且明确的。现有技术文献专利文献专利文献1：韩国专利申请第10-2011-0134486号专利文献2：韩国专利申请第10-2015-0129986号专利文献3：韩国专利申请第10-2016-0172568号专利文献4：韩国专利申请第10-2017-0045326号
技术实现思路
本专利技术分为开发可提高乳酸菌的冷冻干燥存活率、储存稳定性、耐酸性及耐胆汁性的乳酸菌涂敷方法而进行研究努力的结果，通过实验确认，若在水解蛋白质后利用其与多糖类及冷冻保护剂一起双重涂敷乳酸菌，则可大大提高乳酸菌的冷冻干燥存活率、耐酸性、耐胆汁，从而完成了本专利技术。因此，本专利技术的目的在于，通过利用以提高提供乳酸菌的冷冻干燥存活率、储存稳定性、耐酸性及耐胆汁性的方式水解的蛋白质来有效地双重涂敷乳酸菌的方法。本专利技术的再一目的在于，提供因形成双重涂敷而乳酸菌的冷冻干燥存活率、储存稳定性、耐酸性及耐胆汁性得以提高的乳酸菌。本专利技术的另一目的在于，提供包含上述双重涂敷的乳酸菌的食品组合物。通过下述专利技术的详细说明专利技术要求保护范围及附图来进一步示出本专利技术的其他目的及技术特征。在本专利技术的一实施方式中，提供具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，包括：步骤(a)，通过对蛋白质水溶液处理蛋白质水解酶来制备蛋白质的水解率为45～95％的蛋白质水解水溶液；步骤(b)，向所制备的上述蛋白质水解水溶液中添加用于培养乳酸菌的的糖成分及氮源成分并进行杀菌后，通过接种乳酸菌来进行培养；步骤(c)，从经过培养获得的上述乳酸菌的发酵培养液回收乳酸菌的菌体；步骤(d)，通过向所回收的上述乳酸菌的菌体中添加冷冻保护剂水溶液及多糖类水溶液来进行混合及均质化；以及步骤(e)，冷冻干燥所均质化的上述乳酸菌菌体水溶液。蛋白质水解物的制备在本专利技术中，使用于乳酸菌的涂敷的蛋白质通过水解处理后使用。在本专利技术的一实例中，蛋白质的水解处理可通过向包含蛋白质的蛋白质水溶液中添加蛋白质水解酶后进行水解反应来进行。在本专利技术的一实例中，优选地，上述蛋白质的水解率范围在45～95％。在本专利技术中，蛋白质的水解率是指蛋白质被酶水解的程度，可通过使用i)测定用酶水解处理之前和之后的蛋白质水溶液的吸光度差异的方法；ii)测定通过离心分离用酶水解处理之前和之后的蛋白质水溶液来得到的沉淀物的重量的差异的方法；或者iii)通过使用上述两种方法来测定的值的平均值来计算。在本专利技术的一实例中，在本专利技术中，上述蛋白质的水解率为作为处理蛋白质水解酶之前的蛋白质水溶液的吸光度(OD，OpticalDensity)测定值(“起点OD”)与处理蛋白质水解酶之后的蛋白质水溶液的吸光度测定值(“终点OD”)之差的ΔOD值除以上述起点OD值的百分比(％)。即，上述蛋白质的水解率可通过如下公式来计算：水解率(％)＝[ΔOD]/[起点OD]×100。在本专利技术的再一实例中，在本专利技术中，上述蛋白质的水解率为作为通过离心分离处理蛋白质水解酶之前的蛋白质水溶液来得到的沉淀物的重量测定值(“起点ppt”)与通过离心分离处理蛋白质水解酶之后的蛋白质水溶液来得到的沉淀物的重量测定值(“终点ppt”)之差的Δppt除以上述起点ppt值的百分比(％)。即，上述蛋白质的水解率可通过如下公式来计算：水解率(％)＝[Δppt]/[起点ppt]×100。在本专利技术的另一实例中，可使用通过上述两种方法测定的水解率的平均值。在本专利技术的一实例中，使用于乳酸菌涂敷的蛋白质可以为脱脂奶粉、大豆分离蛋白(ISP)或脱脂奶粉及大豆分离蛋白的混合物。在本专利技术的一实例中，在本专利技术中，脱脂奶粉的水解率可以为59～93％，优选地可以为75～92％，更优选地可以为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，其特征在于，包括：/n步骤(a)，通过对蛋白质水溶液处理蛋白质水解酶来制备蛋白质的水解率为45～95％的蛋白质水解水溶液；/n步骤(b)，向所制备的上述蛋白质水解水溶液中添加用于培养乳酸菌的糖成分及氮源成分并进行杀菌后，通过接种乳酸菌来进行培养；/n步骤(c)，从经过培养获得的上述乳酸菌的发酵培养液回收乳酸菌的菌体；/n步骤(d)，通过向所回收的上述乳酸菌的菌体中添加冷冻保护剂水溶液及多糖类水溶液来进行混合及均质化；以及/n步骤(e)，冷冻干燥所均质化的上述乳酸菌菌体水溶液。/n

【技术特征摘要】
20190415 KR 10-2019-00436101.一种具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，其特征在于，包括：
步骤(a)，通过对蛋白质水溶液处理蛋白质水解酶来制备蛋白质的水解率为45～95％的蛋白质水解水溶液；
步骤(b)，向所制备的上述蛋白质水解水溶液中添加用于培养乳酸菌的糖成分及氮源成分并进行杀菌后，通过接种乳酸菌来进行培养；
步骤(c)，从经过培养获得的上述乳酸菌的发酵培养液回收乳酸菌的菌体；
步骤(d)，通过向所回收的上述乳酸菌的菌体中添加冷冻保护剂水溶液及多糖类水溶液来进行混合及均质化；以及
步骤(e)，冷冻干燥所均质化的上述乳酸菌菌体水溶液。


2.根据权利要求1所述的具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，其特征在于，上述步骤(a)中的蛋白质为脱脂奶粉、大豆分离蛋白或脱脂奶粉及大豆分离蛋白的混合物。


3.根据权利要求2所述的具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，其特征在于，上述脱脂奶粉的水解率为59～93％。


4.根据权利要求2所述的具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，其特征在于，上述脱脂奶粉的水解率为75～92％。


5.根据权利要求2所述的具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，其特征在于，上述脱脂奶粉的水解率为80～90％。


6.根据权利要求2所述的具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，其特征在于，上述大豆分离蛋白的水解率为45～86％。


7.根据权利要求2所述的具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，其特征在于，上述大豆分离蛋白的水解率为61～80％。


8.根据权利要求2所述的具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，其特征在于，上述大豆分离蛋白的水解率为70～80％。


9.根据权利要求2所述的具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，其特征在于，上述脱脂奶粉及大豆分离蛋白的混合物的水解率为75～93％。


10.根据权利要求2所述的具有蛋白质多糖类涂层的双涂层的乳酸菌的制备方法，其特征在于，上述脱脂奶粉及大豆分离蛋白的混合物的水解率为76～85％。


11.根据权利要求2所述的具有蛋白质多糖类涂层的双涂层...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑明俊，
申请(专利权)人：细胞生物技术公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR