靶成分测定法制造技术

一种测定样品中靶成分的改进的测定法，该方法使用了能改变比重的颗粒，该颗粒是通过将特异性抗体而附着在靶成分上的。所附着的可变换比重的颗粒最好是脂质体，当以样品在透明试管中进行离心处理后，该脂质体会把样品中的靶成分漂浮或沉降到一个恒定的水平。由于脂质体能含有多种荧光或非荧光染料分子，而且该分子对抗体的结合能力具有最小的位置干扰，因此脂质体就可以着重及更明确地显示出样品中靶成分的存在。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及样品靶成分的测定，特别是涉及到通过同时改变比重和靶的强化或标记对生物样品中的靶细胞(颗粒或有机体，以下称做“靶”)进行检测和(或)定量分析。1980年1月1日批准的S.C.Wardlaw等人的美国第4，181，609号专利公布了一项血液分析方法，该法通过增加某些血细胞(网织红细胞)的密度以使经离心处理的血样中形成清晰的细胞界面。这样，网织红细胞天然比重的改变就引出了一种改良性血液化验法。1982年1月1日批准的Allen等人的美国第4，332，785号专利也公布了一种特殊方法，该法在血样的网织红细胞定量分析中使用了荧光抗体来标记网织红细胞。1986年5月17日批准的Chang的美国第4，591，570号专利则公布了一种方法，即在免疫测定法中在载体上使用许多不同的抗体来捕获众多不同的抗原。而以前的技术未能给出一种普遍的方法，该方法乃改变许多不同样品成分的比重，以便能浓集经过离心处理的样品中的变化的成分并且标记成分使其易于识别。本专利技术涉及样品靶成分的一种改良测定法，即使观测上可区别的脂质体有选择性地附着到相应的样品靶成分上。这些脂质体是通过其表面附着的抗体与样品成分相联系的。该抗体至少包括一种对已知存在于样品靶成分表面抗原具有特异性的抗体。不同的抗体可以同时附着到单个脂质体的表面上，这样，该测定法对许多不同靶中的每一个就都具有专一性。脂质体最好通过包裹在其内部或结合在磷脂双分子层中的肉眼可见的或仪器可识别的标记物来加以辨别。可识别的标记物可以是肉眼可见的染料，可以是仪器可识别的染料、放射性物体等类物质。脂质体主要是由磷脂构成的细微、球型人造结构。脂质体可由一个或多个片层状磷脂泡囊构成，这种泡囊形成了一个负载或充满液体等物质的封闭性球型壳状结构。由于脂质体的大小为150-250nm，脂膜的平均厚度是2.5nm，显然脂质体的密度主要是由所包裹的物质(例如染料或指示剂、缓冲剂或载体介质)的密度来确定。制备及使用脂质体的方法见JamesO′Connell的“脂质体在诊断和治疗上的应用”一文，该文发表在《医疗器械和诊断行业》1988年12月期第31-36页。本专利技术涉及特制脂质体的应用，以分离及强化样品中的不同组分。这些脂质体充满或负载着标记或强化物质，例如含有肉眼可见的或仪器可识别的染料(或某些其它可察觉成分)的液体。填充物质具有预先确定的比重，该比重因而决定了脂质体的比重。脂质体的外表面与一种或多种不同抗体相联结，它对所要测试的不同样品中各种靶上的不同表面抗原都具有特异性。这样，例如，脂质体可以充满比重为1.5的荧光液体，可以与A、B、C及D抗体相联结，而这4个抗体对a、b、c及d表面抗原又具有特异性。这些表面抗原可能是要定量或定性测试的不同的样品中一个或多个靶上的抗原。这样，通过实施例，应用下述方法，可用单一的测试介质来测定各种不同的样品。使用各种脂质体A-D(每一种均有其本身的密度)来同时测定上述a-d表面抗原也是可能的。从上述一般性实施例中可以看出，本专利技术在医学领域的诊断及(或)定量化方法方面具有广泛的应用。人们只需知道要测组分的比重以及其含有何种表面抗原。一旦知道了这些事实，就可以制成脂质体来标记组分并且在其存在的样品中浓集脂质体。所使用的抗体可以是多克隆或单克隆抗体。因而，本专利技术的目的就是为测定具特殊靶组分的样品提供一种改良性方法。本专利技术的还一个目的是提供一种描述某种特性的方法，这种方法可以改变靶成分的比重并可强化靶成分以便使其在样品中得到检测。本专利技术的另一目的是提供一种靶组分强化物质，该物质可同时对许多不同靶组分具有特异性。本专利技术还具有一个目的，即为描述某种特性提供一种方法，该法可定量和(或)定性地测定样品中的靶组分。配合应用本专利技术的脂质体附图，从下述一系列优选的具体实例的详细叙述中可以更加容易理解本专利技术的这些目的和优点。如图所示，数字2通常代表单层泡囊脂质体。泡囊2的膜4非常薄，其厚度约为40埃而包围的体积较大。泡囊内部含有标记物液体6(例如染料等等)，它可在流动载体中分散。抗体8附着在膜4的外部。例如，膜4的外界面上有4种不同的抗体A、B、C和D。如同上面指出的那样，如果需要，每一个泡囊实际上可附着数百(或数千)个不同的抗体。抗体相信可在泡囊2的外界面上移动，这样在所需的靶组分标记示踪中就不须泡囊的特异定向作用。应指出的是，由于泡囊中被包围的标记物6与膜4的差比很大，标记物6及(或)其载体的比重就决定了泡囊2的比重。如同上述O′Connell文献中叙述的那样，泡囊2可通过在其产生时所包围的标记物6的任何常规方法而生产出来。Szoka和Pa-pahadjopoulos在其文章中曾叙述过使抗体附着到脂质体上的许多方法，该文题目为《脂质体制备和特性》见1981年Elsevier/NorthHolland生物医学出版社《从物理结构到医疗应用》一书的69-82页。例如，脂质体可通过把5mM荧光素磺酸标记物溶围在5mM乙二胺四醋酸缓冲液载体(pH值4.5)中而得到。抗体可通过西佛碱偶联到完整的脂质体上，依据Eiddler和Gray叙述的氰代硼氢化钠法(见《分析生物化学》第86卷716-724页)，西佛碱在中性或碱性pH值下能还原成稳定性的酰胺。本方法应用了含10%(摩尔)的乳糖基脑苷脂或混合性脑神经节苷脂的脂质体，经高碘酸盐氧化作用。该氧化步骤是在酸性(pH值5.5)或碱性高碘酸盐氧化时间必须小心加以控制以防止高碘酸盐进入脂质体中。后来的使用氰代硼氢化钠的还原步骤是在中性pH值条件下进行的。反应中泡囊保持了完整性，这可由所截留的内容物未从脂质体中泄出且所截留的可被高碘酸裂解的成分未氧化的事实说明。应用上述技术的蛋白质偶联是有效率的。运用上述技术的蛋白质与蛋白质的交联或脂质体聚集作用不会发生严重问题。本专利技术可应用于全血样品中网织红细胞的定量分析。网织红细胞是新特殊性红血球。对血样中网织红细胞的定量测定可用于确定身体中红细胞的生成速度。网织红细胞定量分析在确定贫血症原因方面是重要的，它还可以用于确定“代偿性血液损失”(即仅仅由于红血球异常性高速率生成才存在的正常量的红血球)的存在。这种代偿性血液损失可能是因恶性肿瘤或其它原因而造成的胃肠道出血的一个早期迹象。网织红细胞含有抗转铁蛋白抗体能结合的表面抗原转铁蛋白。因此，全血样品中网织红细胞可通过使抗铁转铁蛋白抗体附着到脂质体膜上来进行定量分析，该脂质体含有液体染剂(如染料或荧光染料)，具有不同于网织红细胞和成熟红细胞的比重。标记性脂质体随后与血样相混合使达到将血样中所有网织红血胞都结合时的程度。然后将混合物放到S.C.Warklaw等人的美国专利4，027，660号中专利技术的血液分析试管理，并依据该专利中叙述的方法进行定量分析。本专利技术还可用于检测和定量分析病人血液中的T-淋巴细胞及其亚型。T-淋巴细胞是作为细胞免疫介体的淋巴细胞亚辟，B-淋巴细胞是体液免疫的介体(抗体生产者)。血液中淋巴细胞对特异抗原的反应性的讨论可见RobertA.Levine和StephenC.Wardlaw1989年4月19日的美国专利申请07/340，248号。活化的淋巴细胞(淋巴母细胞)具有表面活化抗原，如转铁蛋白受体、HLA-Dr、Leu-23等等。为了检本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于测定生物液体样品中的靶成分的可变换比重的标记颗粒，该颗粒包括：ａ）脂质体泡囊；ｂ）附着在该泡囊外表面的一种抗体，该抗体对所述靶成分上表面抗原具有特异性；ｃ）掺入该泡囊中的标记物质，该标记物质使泡囊在生物液体样品中得到检测 ，该标记物质及（或）其载体使泡囊形成了不同于靶成分比重的比重。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特A莱维，SC瓦德劳，R罗德里古兹，J布里茨，TJ莫阔里诺，
申请(专利权)人：罗伯特A莱维，SC瓦德劳，贝克顿狄金森公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]