白血球分析用试剂制造技术

本发明专利技术涉及白血球分析用试剂，它是由（ａ）可溶解红血球并使白血球细胞膜的一部分损伤的足够量的至少一种离子性表面活性剂和，（ｂ）具有与白血球内的阳离子荷电成分相结合以致在白血球间给予形态差异的足够量的至少一种阴离子基团的有机化合物和，（ｃ）非离子性表面活性剂和，（ｄ）ｐＨ调整用缓冲剂组成。由于基本上是由１种水溶液组成，该试剂组合物可以调制成只需要将本发明专利技术试剂和血液试料混合的简单工序就能进行白血球分类计数，因此只需测定２种散射光信号就能使白血球分类，从而可采用构造简单的装置。而且不使用醛之类的危险试剂，可安全操作进行分类计数。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在临床检查领域中，使用白血球分类装置将白血球分类计数时所需的白血球分析用试剂。临床检查领域中，用患者的全血对白血球分类计数的工作，在诊断各种疾病时是很重要的。鉴于这种目的，已发表了许多装置和方法。这些装置是根据，例如RF信号强度(高频电阻的变化)、DC信号强度(悬浮粒子和将其悬浮的流体介质之间的电导率不同而引起电流变化)、萤光强度、散射强度、吸光度、偏振光解消散射光等的差异，将白血球按细分类集团(淋巴球，单核细胞，嗜中性白细胞，嗜酸性白细胞、嗜碱细胞)进行分类。在白血球分类计数时，必须溶解红血球，并对白血球进行前处理，以致可以用上述那些参数检测出各种白血球的差异。因此，例如用溶血剂将白血球收缩成适当大小，同时将特定的细胞染色。作为使用溶血剂将白血球收缩成适当大小的方法，可例举使用有机羧酸、有机磺酸、酚类的方法(特表平1—502931号公报)、和使用阳离子性表面活性剂的方法(WO 84/02777号)等。此外，作为溶解红血球以使特定的细胞染色方法，已知有用皂角苷和/或十二烷基硫酸钠、叔或季铵盐、乙醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯、戊二烷醛或甲醛，亚烷基乙二醇，生理学的盐和氯唑黑(Chlorazolblack)的组合物(特开平3—266999号公报)，十二烷基硫酸钠、甲醛、糖(或糖醇)及缓冲剂组合起来的试剂处理血液后，进行过氧化酶染色的方法(特开昭62—71857号公报)。在上述的WO 84/03771号和WO84/02777号中，白血球的分类计数是根据DC信号强度的不同进行测量，虽然简便，但仍有只能将白血球分成3类的问题。此外，可以将白血球分成4类以上的细分类集团的方法中，特开昭62—71857号公报，特开平3—2366999号公报中提出，需要高温处理和用具有毒性的醛进行固定处理。在特表平1—502937号公报中公开了，根据RF信号，DC信号、散射光强度来检测白血球的方法，但检测器复杂且装置大型化，具有价格昂贵的问题本专利技术是鉴于以上课题做出的专利技术，其目的是提供，不用醛那样的有毒药剂，并且，使用价格低廉且构造简单的装置就能将白血球分类成至少为4种细分类集团的试剂。按照本专利技术的白血球分析用试剂，则可提供由(a)可以溶解红血球并能使白红球细胞膜的一部分损伤的足够量的至少一种离子性表面活性剂和，(b)与白血球内的阳离子荷电成分相结合从而能在白血球间给予足够形态差异的至少一种具有阴离子基团的有机化合物和，(c)非离子表面活性剂和，(d)pH调整用的缓冲剂组成的白血球分析用试剂。本专利技术的白血球分析用试剂中的离子性表面活性剂，含有阳离子性表面活性剂及两性表面活性剂中的至少一种。作为阳离子性表面活性剂，优选是季铵盐型表面活性剂或吡啶嗡盐型表面活性剂，季铵盐型及吡啶嗡盐型表面活性剂，可例举下式表示的总碳数为9～30的表面活性剂， 或 (式中，R1是碳数为6～18的烷基或链烯基，R2和R3是碳数为1～4的烷基或链烯基，R4是碳素为1～4的烷基及链烯基或苄基，X是卤原子)，作为R1的碳数为6～18的烷基或链烯基，可例举己基，辛基，癸基，月桂基、十四烷基等，尤其优选辛基，癸基、月桂基等直链的烷基。作为R2和R3的碳数为1～4的烷基，链烯基，可例举甲基，乙基，丙基，丁基等，尤其优选甲基，乙基，丙基等碳数为1～3的烷基。作为R4的碳数为1～4的烷基及链烯基，可例举甲基，乙基，丙基，丁基等，尤其优选甲基，乙基，丙基等碳数为13的烷基。此外，作为两性表面活性剂，可例举下式表示的总碳数为9～30的两性表面活性剂， (式中，R1、R2和R3与上述定义相同)。上述离子性表面活性剂的使用量，应该是能溶解红血球而且能使白血球细胞膜的一部分充分地损伤。具体说，使用量约为30～5000mg/l，较好约为50～3000mg/l，更好约为100～2000mg/l，可以通过表面活性剂的种类来适当调整。各种表面活性剂的适宜使用量示于表1中。这些表面活性剂可以1种单独使用，也可1种以上组合使用。表1 也就是，离子性表面活性剂，是相对于白血球能使那些允许后述的有机化物通过程度的细孔打开的溶血力就行，而不需要将细胞裸核化那样的强溶血力。因此，通常用的阳离子性表面活性剂(例如LTAC，MTAB，CTAC)都可以使用，但为了抑制溶血力，通常是，比使白血球裸核化时所用量少得多的量为适宜。此外，由于仅去除细胞膜的一部分就可以，因此也可使用溶血力小的表面活性剂。表面活性剂的溶血作用在于与疏水基团的碳数成比例关系，碳数越多溶血力越强，因此最好使用溶血力低的，例如DTAB，OTAB等阳离子性表面活性剂或两性表面活性剂。本专利技术的白血球分析用试剂，除离子性表面活性外，还包括具有与白血球内的阳离子荷电成分相结合从而在白血球间，提供形态差异的阴离子基团的有机化合物，即可例举具有疏水性官能团和酸性官能团(阳离子基团羧基、磺酸基)、而且在水溶液中带阴电荷，碳数至少是6以上，通过与白血球结合而使白血球的形态变化的物质。关于它的种类，没有特别的限定，几乎全部的酸性色素都可以使用。此外，由于没有必要测定吸光度和萤光强度，还可使用色素以外的有机化合物。作为酸性色素的例子，可以是从下列酸性色素选出的至少一种色素酰胺黑(Amido Black，色号20470)、茜素花青绿F(Alizalin cyanine Green F，色号61570)、酸性绿27(Acid Green27，色号61580)、酸性蓝62(Acid Blue 62，色号62045)、直接红31(Diret Red 31，色号29100)、亮硫化黄素(Brilliant Sulphaflarine，色号56205)、茜素黄R(Allzaline Yellow R，色号14030)、酸性蓝129(Acid Blue 129，色号62058)、酸性绿25(Acid Green 25，色号61570)、铬变素2R(Chromotrope 2R，色号16570)、考马斯亮蓝R—250(Coomassie Brilliant Blue R—250，色号42660)、胭脂红酸(CarmineAcid色号75470)、考马斯亮蓝G—250(Coomassie Brilliant Blue G—250，色号42655)、淡红B(Carmoisine B，色号14720)、直接蓝86(Direct Blue 86，色号74180)、乙基红(Ethyl Red即，色号不明)、副品红(Para Rosaniline，色号42500)、紫胺R(Violaminc R，色号45190)、酸性黄34(AcidYellow 34，色号18890)、酸性橙51(Acid Orange 51，色号26550)、亮藏花精MOO(Brilliant Crocein MOO，色号27290)、尼基绿(GuineaGreen B，色号42085)、酸性蓝29(Acid Blue 29，色号20460)、若丹明B(Rhodamine B，色号45170)、硫氰酸胺B(Sulforhodamine，B，色号45100)、丽丝胺绿B(Lissamine Greem B，色号44090)、酸性蓝9(Acid Blue 9，色号42090)、坚牢绿FCF(Fa本文档来自技高网...

【技术保护点】
白血球分析用试剂，它由以下物质组成： （ａ）能溶解红血球并使白血球的细胞膜的一部分损伤的足够量的至少一种离子性表面活性剂；和 （ｂ）具有与白血球内的阳离子荷电成分相结合以致在白血球间给予形态差异的足够量的至少一种阴离子基团的有机化合物，和 （ｃ）非离子性表面活性剂，和 （ｄ）ｐＨ调整用缓冲剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：坂田孝，森川隆，内桥欣也，桥本智美，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]