根据人类HIV病毒株的表型药物敏感性控制HIV阳性病人化疗的方法技术

一种控制ＨＩＶ阳性病人化疗的方法，包括用一个序列，优选来自从病人获得的ＨＩＶｐｏｌ基因的编码ＲＴ和蛋白酶的序列和已缺失该序列的ＨＩＶ－ＤＮＡ构建体转染对ＨＩＶ感染敏感的细胞系，培养转染的细胞以产生嵌合病毒的原种，评价嵌合病毒对ＨＩＶｐｏｌ基因编码的酶的抑制剂的表型敏感性并对其指定一个值，构建含有嵌合病毒敏感性值及ＨＩＶ嵌合野生型病毒株的相应值的数据组，重复至少二个其它的抑制剂的敏感性评价从而构建总共至少三个该数据组，以二维或三维图解形式表示该数据组使各数据组中嵌合型和野生型敏感性之间的区别提供嵌合原种对所述抑制剂处理的抗性的肉眼测量值，根据所测量的抗性图示选择最适抑制剂。该方法经济而快捷地得到大量不同的ＨＩＶ感染的病人的表型信息。该方法可应用于所有目前可得到的化疗方案且预期同样可应用于将来的化疗方案。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种控制HIV阳性病人化疗的方法，以及医生根据人类HIV病毒株对HIV pol基因的一种或多种酶的抑制剂的表型药物敏感性用于治疗该病人的临床控制仪器，以及同时确定HIVpol基因的二种或多种酶对其抑制剂的表型药物敏感性的方法。
技术介绍
迄今，已形成了一些化疗方案用于治疗HIV感染的病人。其中某些方案已获批准用于临床，其余的则是不断进行的临床试验的主题。可以设想将被批准的化疗方案的数目在不久的将来将稳定地增加。而且，由于在治疗期间形成了药物抗性HIV变异体而使用组合治疗或多种药物治疗的方案持续增加。尽管已显示这些化疗方案对HIV疾病的病毒学(病毒负荷)，免疫学及临床参数产生影响，但是实践经验告诉我们这些影响是短暂的。特别是，发现了感染某个病人的HIV病毒株在很短的时间后开始表现出对治疗所述病人的药物和药物组合的敏感性降低。化疗的效力丧失情况随病人，药物或药物组合的不同而变化。已公认对特定类型的化疗的效力丧失与感染病人的HIV病毒株的基因组中氨基酸改变的基因型相关。这可能使得这些HIV病毒株对化疗的敏感性降低。由于HIV感染的病人在较长的时间内接受一些化疗方案，在感染的HIV病毒株基因组中出现更复杂的氨基酸改变形式，这导致目前对感染的病人的进一步治疗的理性探索失败。正如以前的解释所暗示的，可按常规确定涉及单个或多个抗HIV药物的不同化疗方案的HIV病毒株中出现的基因型改变，但因此更证实了从这些数据信息很难使负责安排化疗的医生确定开始或持续特定的化疗方案是否合理。换句话说，在有限规模上获得的基因型信息不能按常规翻译成使负责医生能对病人应优先进行何种化疗作出关键的决定的表型信息。对于被抗药性HIV病毒株感染的未用药的病人也存在该问题。病毒负荷监测已变成HIV治疗的一个常规方面。然而，仅病毒负荷数不能用作决定单独或者结合使用何种药物的基础。结合化疗越来越多地成为化疗方案的选择。当使用结合药物的病人开始经历药物失败时，不可能确切的知道哪一种药物在结合中不再有活性。人们不可能简单地替代所有的药物，因为目前可使用的药物数有限。而且如果替换全部化疗方案，可能会失去一种或多种对特定病人有活性的药物。另外，对于对特定抑制剂表现出抗性的病毒也可能表现出对其它抑制剂不同程度的交叉抗性。因此，理想的是，每次进行病毒负荷试验并检测到病毒负荷增加时，也应进行药物敏感/抗性试验。除非形成了有疗效的治疗方案，HIV疾病的处理将仍需要这种试验。目前确实存在确定表型方法，它基于从存在供体外周血单核细胞(PBMCs)的血浆的病毒分离和在所说细胞中的随后表型(Japour,A.J.等，(1993)抗微生物试剂和化疗；Vol.37,No.5,p1095-1101)。由AIDS临床试验组(ACTG)提倡的这种共同培养方法，特别是对于确定AZT(本文与叠氮胸苷/Retrovir同义(Retrovir是商标))抗性的表型，对于在常规基础上使用则是费时，昂贵且太复杂。Kellam,P.和Larder,B.A.(抗微生物试剂和化疗，(1994)Vol.38,No.1,p23-30)已建立了表型重组病毒试验以评价HIV 1型分离株对逆转录酶(RT)抑制剂的药物敏感性。该方法允许经过将PCR产生的RT编码序列库同源重组进RT缺失的非感染性原病毒克隆，pHIVΔRTBstEII中来增殖活病毒。对两个在叠氮胸苷疗程期间的病人的分析表明该方案产生与原始感染的PBL DNA表现出完全相同的基因型和表型的病毒。然而，该方法涉及经过共同培养病人血浆或病人PBMCs与供体PBMCs分离病人病毒。这种以前的病毒培养可能改变了原始的病毒组成。而且，该方法尽管允许确定分离株对各种抑制剂的敏感性，但是不能给医生提供是继续目前的化疗方案还是改变疗法的信息。另外，当仅研究pol基因的一种酶时，该方法不容易使其产生按常规涉及使用一种蛋白酶和两种RT抑制剂的组合疗法的常规表型评价。在重组病毒试验中使用的嵌套式PCR(聚合酶链式反应)方法可产生的情况是重组病毒不能真实地反应所研究的感染病人的HIV病毒株的情况。该问题起因于DNA序列的同源性和在哺乳动物细胞中同源重组所需的最小同源量(C.Rubnitz,J.和Subramini,S.(1984)分子和细胞生物学Vol.4,No.11,p2253-2258)。因此，以重组病毒研究为基础的任何表型试验应努力保证尽可能多地扩增病人的物质且有最大的重组。因此，采用的RNA提取和嵌套式PCR方法应确保病毒的遗传物质被扩增，使扩增的物质最大地反应在调查中病人的病毒遗传多样性。因此，在目前的临床实践中迫切需要(a)迅速且按常规确定感染特定病人的HIV病毒株的表型药物敏感性，(b)把由此获得的数据处理成容易理解的信息，及(c)根据所述信息开始，继续或调整对所述病人实施的化疗。本专利技术的公开内容根据本专利技术的第一个方面，提供了一种控制HIV阳性病人HIV化疗的方法，包括用一个来自从病人获得的HIV pol基因的序列和已缺失该序列的HIV-DNA构建体转染对HIV感染敏感的细胞系，培养所述转染的细胞以创造嵌合病毒的原种，评价所述嵌合病毒对HIV pol基因编码的所述酶的抑制剂的表型敏感性并对其指定一个值，构建含有所述嵌合病毒敏感性值及HIV嵌合野生型病毒株的相应值的数据组，重复至少二个其它的抑制剂的敏感性评价从而构建总共至少三个该数据组，以二维或三维图解形式表示该数据组使各数据组中嵌合型和野生型敏感性之间的区别提供嵌合原种对所述抑制剂处理的抗性的肉眼测量值，以及根据所测量的抗性图示选择最佳抑制剂。根据本专利技术的方法经济而快捷地得到大量不同的HIV感染的病人的表型信息。该方法可应用于所有目前可用的化疗方案且预期同样可应用于将来的化疗方案。根据本专利技术的方法给医生提供了病人HIV病毒株的表型数据，该数据可立即用于确定是否应开始，继续或调整特定的化疗方案。优选的是，数据组在多边形或准圆形图上表示，该图含有(a)多个从原点放射延生的标准化轴，每个轴相应于一个数据组或抑制剂或其组合；(b)轴被标准化使野生型HIV对各种抑制剂的敏感性值在各轴上相等，任选表示野生型HIV的数据点并连接起来形成规则多边形，其顶点在轴上，其中心由原点限定；(c)在各轴上描绘出相应于所述轴的表示嵌合HIV原种对抑制剂敏感性值的数据点，任意连接嵌合数据点以形成规则或不规则的多边形，其形状表示嵌合原种对抑制剂范围的抗性。多边形或准园形图提供的优点是根据表示病人嵌合HIV原种的多边形与表示野生型病毒株的多边形之间差异程度确定病人对许多药物的抗性。多边形的面积一般在某些区域比在其它区域差别更大，表明在每种情况下对其轴通过所述区域的抑制剂的抗性程度更大或更小。因此，根据本专利技术的方法获得了嵌合HIV原种并提供了该原种对一定范围的抑制剂的抗性图谱。以这种方式该图谱或图形提供了以常规测量不能获得的该嵌合原种的一个方面的技术特征。在一个优选的实施方案中，标准化轴互相间等角。另外，优选的是，各轴具有对数刻度。进而，优选的是，在嵌合多边形中如果表示了偏心数据点，则鉴定的抑制剂可假定其对病人具有很小或没有用处，而位于野生型多边形内，其上或靠近其外侧的数据点鉴定的抑制剂可假定其对病人具有很大的用处本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种控制ＨＩＶ阳性病人ＨＩＶ化疗的方法，包括用一个来自从病人获得的ＨＩＶ ｐｏｌ基因的序列和已缺失该序列的ＨＩＶ－ＤＮＡ构建体转染对ＨＩＶ感染敏感的细胞系，培养所述转染的细胞以产生嵌合病毒的原种，评价所述嵌合病毒对ＨＩＶ ｐｏｌ基因编码的所述酶的抑制剂的表型敏感性并对其指定一个值，构建含有所述嵌合病毒敏感性值及ＨＩＶ嵌合野生型病毒株的相应值的数据组，重复至少二个其它的抑制剂的敏感性评价从而构建总共至少三个该数据组，以二维或三维图解形式表示该数据组使各数据组中嵌合型和野生型敏感性之间的区别提供嵌合原种对所述抑制剂处理的抗性的肉眼测量值，以及根据所测量的抗性图示选择最佳抑制剂。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛丽皮埃尔德贝蒂纳，库尔特赫托格斯，鲁迪保弗尔斯，
申请(专利权)人：维科公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]