点免疫结合测试苹果潜隐病毒方法技术

点免疫结合测试苹果潜隐病毒方法，把苹果叶片放入０．０２Ｍ磷酸盐缓冲液中进行研磨，然后加入等量氯仿离心提取抗原液，取免抗苹果褪绿叶斑病毒血清和兔抗苹果茎沟病毒血清用抗体缓冲液稀释制成抗血清液，辣根过氧化物酶标Ａ蛋白用０．０２Ｍ磷酸盐溶解，使用时用抗体缓冲液稀释，将硝酸纤维素膜打上圆孔状印迹，在其上滴入２μｌ抗原液，然后再加上抗血清酶标Ａ蛋白液和底物溶液，根据其斑点显色情况判断被检苹果是否带有潜隐病毒。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及
用酶联免疫技术测试苹果潜隐病毒是当前广泛应用的检测技术，由于该技术检测过程需时较长，灵敏度、准确度和稳定性还不够高，数据重复性差、抗原、抗体和试剂药品用量大，耗资高，检测标本不能保存。本专利技术的目的是专利技术一种，使检测时间缩短、灵敏度、准确度和稳定性高，重复性好，检测成本低，标本可保存。本专利技术是这样实现的把待检苹果叶片放入0.02M磷酸盐溶液中研磨，然后加入等量氯仿离心10分钟取上清液为抗原液；取兔抗苹果褪绿叶斑病毒血清和兔抗苹果茎沟病毒血清用抗体缓冲液稀释制成抗血清液，抗体缓冲液由0.02M磷酸盐溶液，0.05％吐温20,2％聚乙烯吡咯烷酮和0.2％牛血清白蛋白制成；辣根过氧化物酶标记的A蛋白用0.02M磷酸盐溶解，使用时用抗体缓冲液稀释制成酶标A蛋白液；将硝酸纤维素膜用打孔器打圆孔状印迹，在圆孔状印迹上滴入2μl抗原液，然后浸入封闭缓冲液中30分钟，封闭缓冲液由0.02M磷酸盐，0.05％吐温20,2％聚乙烯吡咯烷酮和2％牛血清白蛋白制成；然后取出硝酸纤维素膜吸干，用0.02M磷酸盐加0.05吐温20液洗涤，吸干，然后加抗血清液，每圆孔状印迹本文档来自技高网...

【技术保护点】
点免疫结合测试苹果潜隐病毒方法，其特征是：把待检苹果叶片放入０．０２Ｍ磷酸盐溶液中研磨，然后加入等量氯仿离心１０分钟取上清液为抗原液；取兔抗苹果褪绿叶斑病毒血清和兔抗苹果茎沟病毒血清用抗体缓冲液稀释制成抗血清液，抗体缓冲液由０．０２Ｍ磷酸盐溶液，０．０５％吐温２０，２％聚乙烯吡咯烷酮和０．２％牛血清白蛋白制成；辣根过氧化物酶标记的Ａ蛋白用０．０２Ｍ磷酸盐溶解，使用时用抗体缓冲液稀释制成酶标Ａ蛋白液；将硝酸纤维素膜用打孔器打圆孔状印迹，在圆孔状印迹上滴入２μ１抗原液，然后浸入封闭缓冲液中３０分钟，封闭缓冲液由０．０２Ｍ磷酸盐，０．０５％吐温２０，２％聚乙烯吡咯烷酮和２％牛血清白蛋白制成；然后取出...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：石荫萍，王强生，杨建明，孙清荣，隋从义，
申请(专利权)人：山东省果树研究所，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]