本发明专利技术涉及新的结合物，其制备方法以及该结合物作为抗原在免疫学的检证法中或ＤＮＡ－诊断中的应用。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及新的结合物，它的制备方法以及这些结合物作为抗原在免疫学的检证方法中或对于DNA-诊断的应用。在体液，特别是在人血清中免疫球旦白的检证是应用于微生物，特别是病素，如HIV(Human lmmunodeficiency virus，人类免疫缺陷病毒即艾滋病病素)，肝炎病毒等的感染的诊断。特异的免疫球旦白在被检查样品中的存在一般是通过一个或多个与这种特异免疫球旦白起反应的抗原来证实，在试样液体中测定特异免疫球旦白的方法必须是敏感的、可靠的、简单和迅速。另一个免疫学的方法是竞争免疫测定法，在这种方法中一个分析物的定性和定量的检测可通过下述方法作到，即一个与这个分析物在免疫学上类似的半抗原和这个分析物来竞争在一个受体上的，例如在一个抗体上的结合部位，分析物类似物在此一般是以标志的形式或者是以在一个固体相上结合的形式来使用。最近几年日益增多地发展了以非放射性的标志基团为基础的检证系统，在这些方法中分析物，例如一种特异抗体在被检查试样中的存在可以借助光学的(例如发光或荧光)，核磁共振-活性的或金属-沉淀的检测系统来确定。EP-A-O307149公开了对于一个抗体的一个免疫试验，在这个试验中应用两个重组的多肽作为抗原，其中的一个是固定在一个固体相上，和另外一个携带一个标志基团，为了提高检证的特异性两个重组抗原是挤压在不同的生物体上。EP-A-366673公开了在一个试样中检证抗体的一个方法，在此方法中一个抗体通过与一个提纯的标志抗原和与相同的提纯抗原以一种固体相结合的形式反应来证实。并公开了例如以人的IgG作为抗原。EP-A-0386713说明了一个抗HIV抗体的一个检证方法，是应用两个固相载体，在两个固相载体上固定了不同的HIV-抗原，分别与一个等分的试样和一个标志的HIV-抗原接触，抗体的存在是通过在这些试验中至少有一个是阳性反应来验证的。并公开了以重组制出的多肽作为HIV-抗原。EP-A-0507586说明了一个特异免疫球旦白免疫学试验的实施方法，即一个试样与两个能结合这个免疫球旦白的抗原接触，其中一个抗原携带着一个能结合在一个固相载体上的基团，另一个抗原携带着一个标志基团。标志基团可以是一个直接的标志基团，例如一个酶，一个色素原，一个金属粒子，或者也可以是一个间接的标志基团，亦即带在抗原上的标志基团可以与一个该标志基团的受体起反应，这个受体又携带着一个产生信号的基团。例如荧光素衍生物便是这样一个间接的标志基团，它的受体是一个抗体，该抗体又与一个酶相结合。公开的抗原有多肽，例如肝炎B-表面抗原，向这种抗原通过衍生化导入SH-基，荧光素便是与这些基团相结合的。EP-A-0 507 587公开了一个专门用以检证IgM抗体的方法，即将试样与一个针对待检抗体的标志抗原和与另一个同样针对待检抗体并可结合在一个固相上的抗原一起孵育。EP-A-0 199 804和EP-A-0 580 979公开了一个免疫学检证方法，是应用用发光的金属螯合物基团，特别是用钌螯合物基团和锇螯合物基团标志的抗原。用免疫球旦白作为抗原，这些免疫球旦白是通过与活性金属络合物反应随机标志的。EP-A-0 178 450公开了金属螯合物，特别是钌络合物，在它上面可以结合上一个免疫活性物质，例如抗体，这个结合是通过免疫反应物质与金属螯合物的统计反应来实现。EP-A-0 255 534公开了一个发光免疫测定法，是应用一个结合了金属螯合物的抗原或抗体。这种结合是通过例如一个金属螯合物-活性酯衍生物与一个抗体的随机反应来进行的。WO 90/05301公开了一个通过电化学发光的方法来检证和定量测量分析物，是应用发光的金属螯合物结合在(i)一个加入的分析物，(ii)分析物的一个结合伙伴或(iii)一个反应部分上，后者可以与(i)或(ii)结合。发光测量通过将金属螯合物结合在激活的和必要时磁性的微粒上来完成的。根据现有技术水平已知的对于抗体的免疫学检证方法通常是应用多肽-抗原，这种多肽-抗原大多数是通过重组的DNA-方法来制备。然而在使用这种多肽-抗原时会出现问题。常常有可能是重组多肽只产生一种融合多肽的形式，它的融合部分在试验中可以导致错误的阳性结果。再者通过重组压榨法产生的多肽的试样液体中常常只有较小的稳定性并且倾向于聚集。另一个缺点是标志的基团向这种多肽的导入常常是没有选择和再复制的可能。此外重组的多肽抗原的制备代价高，并且免疫学反应在不同价格的重组多肽中可以出现较大的偏差。当利用已知的抗原，应用对敏感性和精确性要求极高的竞争免疫测定法来检证浓度极小的分析物如雌(甾)二醇或睾(甾)醇时，尤其是当应用以电化学发光为基础的检证系统时，很难以达到所要求的检证下限值。因此本专利技术所要解决的问题是提供一个能够用简单的和高效率的方式制备用于免疫试验的抗原的方法，使在现有技术状况下所制备的已知抗原的缺点至少可以部分地排除。此外这种方法应该能够使标志基团选择性地和可复制性地导入抗原中这个问题通过结合物得到解决，它包含一个具有最多100个单体单元的聚合物载体，这个载体含有结合在反应侧基上的1-10个半抗原分子和1-10个标志基团或固体相结合基团，其中单体单元是由氨基酸，核甙酸和肽的核酸选出。通过将本专利技术的结合物(含有1-10个半抗原分子和一定数目的标志基团或固体相结合基团)作为抗原应用在一个免疫学检证方法中，使人惊异的是在与已知的单体和多体的抗原相比较，检证下限值降低的同时可以达到一个明显提高的敏感性和精确性。除此之外本专利技术的结合物可以很简单的方式通过固相合成。例如肽-固相合成而获得。对此，单体单元，例如氨基酸衍生物，总是可以装在预定的位置上，单体单元是与一个半抗原分子或与一个标志基团或者与一个固体相结合基团衍化出来的。此外在固相合成结束后在存在有带有自由官能团的单体的载体链部位可以附加选择性的引入半抗原或标志基团或者是固体相结合基团。因此将半抗原分子和标志基团或者是固体相结合基团准确而又可复制地引入结合物已成为可能。在结合物上的单个基团之间的距离可以准确的确定和必需时也可以变化。通过对结合物上标志基团的距离的选择可以使信号熄灭保持在极小。从而使信号的强度与标志基团的数目成正比增加。并且标志基团的一个确定的空间方向，例如在螺旋形的载体，有助于改善信号的强度。尤其是在螺旋载体，例如单股的或特别是双股的核酸中，标志基团之间的距离则总计为3-6或/和13-16个单体单元。构成结合物主链的聚合载体分子其长度最大为100个单体单元优选3-80个单体单元，特别优选是5-60个单体单元。单体单元是由氨基酸，核甙酸和肽的核酸选出。优选的是聚合载体包含一个由氨基酸构成的肽链，优选是一个直线的肽链。载体也可以包含一个由核甙酸或核甙酸类似物构成的核酸链，在其反应的侧基上结合有半抗原分子和标志基团或者固体相结合基团。这种核酸链可以是单股的或者是双股的。在双股的核酸载体常常发现标志基团的信号强度提高，例如在荧光标志基团中量子收率改善。此外聚合载体可以由肽核酸(PNA)构成。肽核酸包含一个聚酰胺主链，它由相同或不相同的下式单体单元构成。(CH2)k-CHR-NCH2-(CH2)m-NH-CO-，其中L是由氢，苯基，自然存在的核硷和非自然存在的核硷构成的组中选出，R’是由氢和自本文档来自技高网...
【技术保护点】
结合物，含有一个具有最多至１００个单体单元的聚合载体，此载体含有结合在反应侧基上的１－１０个半抗原分子和１－１０个标志基团或固体相结合基团，其中单体单元是由氨基酸，核苷酸，核苷酸类似物和肽的核酸选出。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：HP约瑟尔，A芬克，R赫尔曼，E霍斯，A马莎尔，C塞德尔，
申请(专利权)人：罗切诊断学有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]
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