用于分析含有血红蛋白的医学试样的方法技术

本发明专利技术涉及一种用于测定在含有游离的血红蛋白的试样中的分析物的方法，其中采用光学测量进行测定并对测出的分析物浓度值进行计算校正。本方法尤其适用于测定医学试样的，例如血清－或血浆试样的总蛋白质、铁和白蛋白等参数。为得出经校正的分析物浓度值，采用下述步骤对分析物浓度的测量值进行校正：（ａ）测量待分析的试样的空白值，（ｂ）测量不含有血红蛋白的参比试样的空白值，（ｃ）测量未经校正的分析物浓度值和（ｄ）通过与在步骤（ａ）和（ｂ）中获得的值的相关对在步骤（ｃ）中获得的值进行校正。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种测定含有游离的血红蛋白的试样中的分析物的方法，其中采用光学测量方法进行测定并对测出的分析物浓度值进行计算校正。本方法尤其适用于测定在医学试样中，例如在血清-或血浆试样中的总蛋白质、铁和白蛋白等参数。已知对多个分析物测定时在某些情况下很大程度上受到溶血的干扰。在以往公开了各种用于去除溶血干扰的方法，以便获得非虚假的测量值。如专利EP-0268025 B1中所述，为各个分析物建立溶血度与导致的测量误差间的图解关系。由此关系图推导出校正系数，采用此校正系数然后在单独测定溶血度的基础上对获得的分析结果进行计算校正。同样杰伊和普罗瓦塞克(Jay und Provasek)对通过对溶血度的测定和对校正系数的应用获得溶血试样的非虚假的值(临床化学38/6,1026页(1992)以及临床化学39/9,1804-1810页(1993)(ClinChem 38/6,1026,(1992)bzw.Clin Chem 39/9,1804-1810(1993))做了说明。在此，溶血度是通过单独测定试样中的血红蛋白的含量求出的。在专利说明书US4263512中建议，除分析物外还要测定浊度(x)、溶血度(y)和黄疸(z)并借助公式S’=S-α·X-β·Y-γ·Z校正测出的分析物值(S)。其中S’是经校正的分析物值并且α、β和γ为校正系数，所述校正系数是通过利用参比液体对浊度、溶血度和黄疸的影响的测量求出的。通过多路测量和接着在考虑到相应的其它干涉物质的分量的情况下由获得的吸收差进行的复杂计算求出x、y和z。在DE4427492 A1中描述了一种不必单独测定溶血度的校正溶血干扰的方法。在此找出一种通过溶血由红血球释放出的干扰物质的含量与在主反应前进行的前置反应间的数学关系。借助这样在前置反应期间求出的溶血度，利用找出的溶血度与干扰量间的关系，根据公式比例(Rate)物质/试样=比例总-比例前置反应-比例物质/红血球对在主反应(比例总)中获得的分析结果进行校正，其中物质系试样中的有待测定的组分。经常也可以通过对试样空白值的测量消除血红蛋白的干扰。但此点并不适用于采用缩二脲-方法对总蛋白质进行的测定(莫尔干等，微量化学44期，282-287页(1991)(Morgan et al.Microchem J44,282-287(1991)))并且也不适用于采用溴甲酚绿及溴甲酚红紫方法对白蛋白进行的测定。对铁的测定还已知，只要血红蛋白不事先通过透析从试样中分离出，就始终会出现血红蛋白造成的干扰(松塔克，临床化学临床生物化学杂志24/2,127-139页(1986年))(Sonntag,J ClinChem Clin Biochem 24/2,127-139(1986))。甚至在对铁进行测定时通过仅对试样空白值进行的测量是不能消除血红蛋白的干扰的。但上述所有去干扰的方法都具有缺点，它们都伴随要付出巨大的劳动代价(通过透析对试样进行准备或单独求出溶血度，例如通过对血红蛋白含量进行的测定)和/或复杂的数学校正算法。另外上述所有方法都涉及的是对由溶血造成的误差测量的去干扰。随着以血红蛋白为基础的血液代用剂(Blutersatzmittel)的发展，消除由天然的或合成的血红蛋白以及类似血红蛋白的化合物造成的干扰的问题比从前更为迫切。由于在用血液代用剂治疗时血清或血浆中的血红蛋白的含量可多于1000mg/dl，故这类干扰一方面在非溶血的试样材料中也会出现，另一方面干扰程度大大高于自然溶血。本专利技术的任务在于提出一种消除干扰的方法，所述干扰是由天然血红蛋白或以合成的血红蛋白及类似血红蛋白的化合物为基础的血液代用剂造成的并且采用简单的试样空白值测量并不能消除此类干扰。另外与惯用的方法相比，本方法的采用将伴随所付出的工作代价的大幅度的降低并保证了直至最少1000mg/dl血红蛋白的去干扰。本专利技术任务的解决方案在于，以意想不到的方式找出了试样空白值的高度与由游离的血红蛋白造成的测量结果虚假程度的关系。因而甚至在血红蛋白的含量很高时借助简单的数学校正公式也可以精确地求出分析浓度的正确的值。与已有技术相比，本专利技术的方法的优点在于，为对含有血红蛋白的医学试样的测量值进行校正，既不需要单独求出血红蛋白的含量，也不需要确定前置反应程度。因此本专利技术的主题是一种通过光学测量测定在含有游离的血红蛋白的试样中分析物的方法，其中校正分析物浓度的测量值的步骤如下(a)测量待分析试样的空白值，(b)测量不含血红蛋白的参比试样的空白值，(c)测量未经校正的分析物浓度值和(d)为获得经校正的分析物浓度值，通过与在步骤(a)和(b)中获得的值相关来对步骤(c)中获得的值进行校正。在本专利技术方法的步骤(d)中优选根据下述关系式求出经校正的分析物浓度值C’试样=C试样-F·E1试样+F·E1参比其中C’试样表示经校正的分析物浓度值，C试样表示试样中未经校正的分析物浓度的测量值，F表示试验专用校正系数，E1试样表示测量出的试样的空白值和E1参比表示测量出的参比试样的空白值。本专利技术的校正方法适用于通过光学测量，尤其是通过采用由于在试样中游离存在的血红蛋白会出现干扰的波长的光学测量对分析物进行测定的方法。光学测量尤其优选在500-750nm范围内进行。本专利技术方法适用于测定任意的含有游离的血红蛋白的试样。例如这些试样是溶血的血清-或血浆试样或含有血液代用剂的试样。例如就本专利技术而言，落入“游离的血红蛋白”概念下的血液代用剂是血红蛋白，尤其是人体血红蛋白或牛血红蛋白的衍生的、聚合的、改性的或交联的衍生物，以及重组制得的血红蛋白。根据本专利技术方法的一种优选的实施方式将对试样的总蛋白质含量进行测定。优选按照缩二脲方法进行此测定。根据本专利技术的另外一种特别优选的实施方式将对试样的铁含量进行测定。优选按照Ferrozin方法进行铁含量的测定。根据本专利技术的另外一种特别优选的实施方式对试样的白蛋白含量进行测定。优选按照溴甲酚绿-或溴甲酚红紫方法进行白蛋白含量的测定。在测定这些参数时，迄今尚未有对含有血红蛋白的试样进行测定的简单的去干扰方法，采用本专利技术的方法将以意想不到的方式实现对测量过程的大大简化。另外本专利技术的优点还在于，甚至可以对胆红素含量很高，至少达20mg/dl的黄疸试样也可以毫无问题地进行检测。可以采用相应的澄清剂(Aufhellmittel)，例如添加入试剂中，消除由脂血试样造成的干扰。优选采用血清-或血浆试样，尤其是人体的血清-或血浆试样作为本专利技术方法的试样。作为参比试样宜采用临床健康的受检者的血清-或血浆试样。尤其优选采用临床健康的受检者的不含血红蛋白的血清-或血浆库(pool)作为参比试样。本专利技术方法的一个特别的优点是，该方法可以在自动分析仪上，例如在伯伦格曼海姆/日立704或717型(Boehringer Mannheim/Hitachi704 oder 717)自动分析仪上进行。根据简单的数学校正公式可对自动分析仪进行编程，使输出的已经是经校正的分析物浓度值并且不再需要附加的计算校正。为对分析物浓度进行校正的一个主要的参数是试验专用的校正系数F。该校正系数F优选采用一种具有如下步骤的方法求出(a)准备至少由三个具有相同的分析物含量的试样构成的系列，其中至少有一个试样不含本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于采用光学测量对含有游离的血红蛋白的试样中的分析物进行测定的方法，其中采用下述步骤对测出的分析物浓度值进行校正：（ａ）测量待分析试样的空白值，（ｂ）测量不含血红蛋白的参比试样的空白值，（ｃ）测量分析物浓度的未经校正的值和（ ｄ）通过与在步骤（ａ）和（ｂ）中获得的值相关来对步骤（ｃ）中获得的值进行校正，以便获得经校正的分析物浓度值。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：R威希尔特，L谢隆，
申请(专利权)人：罗切诊断学有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]